详细的淋巴细胞的分离、计数图文教程.ppt

T淋巴细胞的分离 计数 中山医学院免疫学教研室 实验目的和要求 掌握外周血淋巴细胞分离的方法掌握细胞计数的方法 实验原理 外周血中细胞种类细胞密度红细胞和多核白细胞1 090淋巴细胞和单核细胞1 075 1 090血小板1 030 1 035密度梯度离心法 利用一种密度介于1 075 1 092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心 使一定密度的细胞按相应密度梯度分布 从而将各种细胞加以分离 本实验 淋巴细胞 实验方案 抽取外周血 分离淋巴细胞 细胞计数 实验材料 1 肝素抗凝血2 Hank s液3 淋巴细胞分离液4 水平离心机5 显微镜6 细胞计数板 实验步骤 肝素抗凝静脉血1 5ml 加1 5mlHank s液稀释 置于2ml淋巴细胞分离液上 交界液面 一定不要打乱 稀释后的抗凝血 淋巴细胞分离液 用Hank s液洗 离心 1000rpm 5min 重复2次 血浆 分层液 红细胞粒细胞 离心 2000rpm 25min 淋巴细胞与单核细胞层 用Hank s液重悬细胞 取10ul细胞悬液与90ul白细胞计数液或台盼兰计数液混合 取10ul于细胞计数板上 细胞计数 细胞计数板 细胞计数 数上不数下 数左不数右 实验结果 2 2个大方格内细胞总数 单个核细胞浓度 细胞数 ml 104 10 稀释倍数 细胞活力检测 死细胞被染成蓝色 活细胞不着色 细胞数量 纯度在90 以上淋巴细胞约占90 95 细胞收获率可达80 90 活细胞百分率在95 以上 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 注意事项 稀释的肝素抗凝血 沿管壁轻轻叠加于分离液上 使两者形成一个清晰地界面 细胞经离心分层后 缓慢小心吸取 切勿打破形成的细胞层 细胞计数的仪器 Thanks