流式淋巴细胞亚群检测技术原理.ppt

淋巴细胞亚群检测 目录 1 淋巴细胞的分类 2 淋巴细胞亚群检测方法 3 淋巴细胞亚群检测原理 4 淋巴细胞亚群的免疫功能 5 淋巴细胞亚群的临床意义 T淋巴细胞 细胞免疫 B淋巴细胞 体液免疫 NK细胞 固有免疫 淋巴细胞的分类 淋巴细胞占外周血白细胞总数的20 40 检测方法 采用流式细胞术 FCM 是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速 精确的对单个细胞 或生物学颗粒 的理化特性进行多参数定量分析和分选的技术 FCM 检测对象 单细胞悬液或生物颗粒 检测参数 多参数 检测特点 单细胞水平分析 检测速度 高速 最高达上万个细胞 秒 检测结果 精度高 准确性好 可对目标细胞进行分选 荧光抗体 直接标记 第一抗体 荧光二抗 间接标记 免疫荧光染色主要有两种方法 间接标记的方法难以进行多色标记 而且操作复杂 所以一般首选直接荧光染色 检测原理 常用荧光素 499nm蓝色荧光 Blue 500 549nm 绿色荧光 Green 550 584nm 黄色荧光 Yellow 585 615nm 橙色荧光 Orange 616 700nm 红色荧光 Red 700nm 远红外荧光 Far Red 常用荧光素 免疫荧光染色 FCM可检测下列细胞成分 表面标记物胞浆标记物核内标记物可溶性成分 联合CD45的四色方案 第一种是用CD45 CD3 CD4 CD8做四色标记 主要可以检测T3细胞 T4细胞 T8细胞这三种不同的亚群CD45 FITCCD4 RD1CD8 ECDCD3 PC5 联合CD45的四色方案 第二种是用CD45 CD3 CD19 CD16和 或 CD56做第二管的标记 用于检测T3细胞 B细胞和NK细胞CD45 FITCCD56 RD1CD19 ECDCD3 PC5 检测目的 相互协作共同参与 1 2 3 功能 比例 数量 T B细胞相互作用 主要检测项目 淋巴细胞 总T细胞 T4细胞 T8细胞 NK细胞 B细胞 总T淋巴细胞 CD3 T4细胞 CD3 CD4 CD8 T8细胞 CD3 CD8 CD4 B细胞 CD3 CD19 NK细胞 CD3 CD 16 56 淋巴细胞的免疫标志 总T细胞增高 提示体内的T细胞免疫功能增强见于临床某些自身免疫性疾病 如SLE 重症肌无力 慢性活动性肝炎 甲状腺功能亢进 淋巴细胞性甲状腺炎 器官移植排斥反应 T细胞性白血病等 总T细胞降低 提示体内的T细胞免疫功能减弱见于某些白血病 应用免疫抑制剂药 放疗过程中 先天性细胞免疫缺陷 艾滋病 多发性骨髓瘤 传染性单核细胞增多症 以及过劳等造成机体免疫功能处于相对较低的其他一些情况 T4细胞增高 提示体内存在细菌等病原微生物感染 主要见于临床各种细菌性感染性疾病 器官移植发生排斥反应支气管哮喘SLE活动期某些免疫增强药物的有效结果注意 昼夜变化 傍晚的峰值可为上午的两倍 T4细胞降低 提示体内存在病毒等病原微生物 主要见于临床各种病毒感染性疾病 以HIV感染时减少最为明显T4细胞减少也可见于 免疫球蛋白缺乏症 胸腺发育不良 严重联合免疫缺陷病 严重创伤 大手术等 T8细胞 主要功能 特异性直接杀伤靶细胞两条途径 一是分泌穿孔素 颗粒酶及淋巴毒素等直接杀伤靶细胞二是通过Fas FasL途径诱导细胞凋亡 杀伤特点 连续性杀伤特异性杀伤MHC限制性 T8细胞增高 提示体内存在病毒或胞内寄生菌等病原微生物感染主要见于HIV HBV CMV EB等病毒感染也可见于结核杆菌感染等 T8细胞降低 移植排斥反应可见于 免疫球蛋白缺乏症胸腺发育不良严重联合免疫缺陷病糖尿病等 T4 T8细胞比值增高 是T4淋巴细胞增高或T8淋巴细胞减少所致见于某些自身免疫性疾病 如SLE 多发性硬化 器官移植排斥反应 自身免疫性溶血性贫血等 T4 T8细胞比值降低 是T4细胞减少或T8细胞增高所致见于艾滋病 再生障碍性贫血 某些白血病 传染性单核细胞增多症 免疫缺陷综合征 某些病毒感染 恶性肿瘤 结核病等一般来说 导致T4 T8比值倒置 以全身性 侵袭和破坏机体免疫系统的感染引起的倒置变化幅度最大临床抗感染治疗有效时 可以观察T4 T8细胞比值的逐步恢复 T4 T8细胞比值临床意义 器官移植受者免疫功能监测个体化免疫治疗疗效判断受者需要的是一种恰当的免疫抑制 将免疫功能控制在较低的一个范围内 需要经常性监测受者的免疫功能 T4 T8细胞比值是非常好的一个监测指标当受者T4 T8细胞比值出现小于0 2的情况时 必须立即停用免疫抑制药 等待免疫功能的适当恢复 T4 T8细胞比值与肿瘤 恶性肿瘤患者术前T4 T8细胞比值低 手术后比值恢复正常当发生癌转移时 T3 T4细胞数明显减少的同时T8细胞数明显增多T4 T8比值明显降低 提示恶性肿瘤患者晚期细胞免疫功能更低 预后更差 产生抗体 提呈抗原 免疫调节 B细胞的功能 B细胞增高 提示机体体液免疫功能被增强此时体内高亲和力抗体的产生也增加见于临床各种细菌性感染B细胞增高也见于B细胞白血病 B细胞减少 见于原发及继发性免疫功能低下 临床可出现反复发作的呼吸道及消化道感染见于严重病毒性感染 使用免疫抑制剂制药等情况见于原发性B细胞缺陷病 如性联无丙种球蛋白血症 和重症联合免疫缺陷 T细胞同时缺如 体液免疫功能不良者则减少在生命垂危时可呈现极度减少 自然杀伤细胞 表面标记CD3 CD56 CD16 表面受体 1 杀伤细胞活化受体 KAR 结合靶细胞表面糖类配体 促使NK发挥杀伤作用 2 杀伤细胞抑制受体 KIR 识别自身细胞表面MHC I类分子 产生抑制信号无须致敏即直接杀伤靶细胞 抗感染与抗肿瘤 免疫调节 NK细胞作用及效应机制 抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 ADCC 天然细胞毒性NK细胞介导的凋亡NK细胞产生的细胞因子NK细胞受体 NK细胞通过ADCC作用杀伤病毒感染的靶细胞 NK细胞杀伤靶细胞电镜图 NK细胞 NK细胞是机体抗某些病毒 细菌 寄生虫 真菌感染的重要免疫因素 NK细胞异常在病毒感染时尤其突出 NK细胞减少见于萨科奇病毒 脑心肌炎病毒 流感病毒 EB病毒 HSV 型等感染 NK细胞也参与 型超敏反应和移植物抗宿主反应 IL 2治疗后外周血NK细胞数量增加 NK细胞 NK细胞与肿瘤性疾病的发生 发展和转归密切相关一般而言 肿瘤患者NK细胞数量较正常人减少 且减少的程度与肿瘤病情的严重程度密切相关 病情好转 NK细胞数量回升因此 NK细胞数量是肿瘤临床病情判断 疗效监测的指标 淋巴细胞亚群检测适用人群 肿瘤病人化疗过程中活动期的自身免疫病患者器官移植患者血液病患者 白血病 免疫功能低下患者 幼儿 老人 免疫抑制剂 抗精神药物 放化疗等 急慢性肝炎患者呼吸道感染患者胰岛素依赖型糖尿病患者 谢谢大家