BCA法测蛋白ppt课件

BCA法测定蛋白浓度 1 原理 碱性条件下 蛋白将Cu2 还原为Cu Cu 与BCA试剂形成紫颜色的络合物 测定其在562nm处的吸收值 并与标准曲线对比 即可计算待测蛋白的浓度 2 主要特点 1 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响 2 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝 3 快速 45分钟内完成测定 4 准确灵敏 线性范围广 5 经济实用 在微孔板中进行测定 可大大节约样品和试剂用量 3 实验器材与试剂 1 器材 分光光度计 恒温水浴锅 2 试剂 BCA试剂盒 待测样品 4 操作步骤 1 配制BCA工作液 根据标准品和样品数量 按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂 50 1 配制适量BCA工作液 充分混匀 2 稀释标准品 用生理盐水稀释蛋白标准品BSA 5 200 6 蛋白液稀释 7 8 5 按上表 将稀释好的A GBSA标准品和待测蛋白样品 原液 1 10 1 100稀释液 各150 l分别加到作好标记的试管中 推荐每个测定的样本做2 3个平行反应 6 向每个试管中各加入3mlBCA工作液 充分混匀 37 水浴中孵育30分钟 将各管冷却至室温 须在3 5分钟内完成检测 7 用分光光度计在562nm处 测定每个样品及BSA标准品的吸光值 同时做好记录 8 绘制标准曲线 计算样品中的蛋白浓度 9 注意事项 1 标本的充分混匀 2 要得到更为精确的蛋白浓度结果 每个蛋白样品均需做复孔 每次均应做标准曲线 3 使用水浴箱温育时 应注意防止因水份蒸发影响检测结果 10 11