2-HPLC仪器装置ppt课件

Chapter7第三节仪器装置 高效液相色谱仪组成 流动相及贮液罐高压输液泵及梯度洗脱装置进样装置色谱柱检测器 馏分收集器数据处理及色谱工作站 流动相 泵 色谱柱 检测器 泵液 分离 检测 记录 进样阀 进样 一 流动相及贮液罐 1 贮液罐 材料应耐腐蚀 常用材料为玻璃 不锈钢或特种塑料 PEEK 吸滤头 多孔不锈钢过滤器 孔径0 45um 流动相需经过0 45um滤膜过滤 以除去微小颗粒 尤其是使用缓冲液 2 流动相脱气 流动相中有溶解的气体 在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时 因压力降低而产生气泡 从而影响检测器的工作 1 低压脱气法使用水泵连接抽滤瓶和微孔玻璃漏斗 可完成脱气和过滤的双重任务 3 超声波脱气法将流动相瓶置于超声波清洗器中 以水为介质超声脱气 2 吹氦脱气法将氦气通入流动相以驱除其中的空气 适用于所有的溶剂 4 真空脱气法 在线脱气打开真空脱气机的电源开关后 控制电路即开启真空泵 真空泵运行使真空箱内产生部分真空 真空度由压力传感器测定 根据传感器信号 真空脱气机通过运行或关闭真空泵来维持真空度 流动相 泵 色谱柱 检测器 泵液 分离 检测 记录 进样阀 进样 仪器装置 二 高压输液泵及梯度洗脱装置 1 要求 1 耐化学 酸 碱 腐蚀 2 输出流量稳定 重复性高 3 能在高压下连续工作 5 易清洗 维修 具有梯度洗脱功能力 4 输出流量范围宽分析柱 0 1 10ml min 2 分类 恒流泵 恒压泵 3 往复型泵 1 原理 2 优点 体积小 流量调节方便 更换溶剂容易 3 缺点 对加工制造有特殊要求 耐磨损输出压力有明显的起伏脉动 4 减小脉动措施 采用多头泵交替联动 A双柱塞并联泵 B双柱塞串连泵 4 梯度洗脱 问题 样品组成复杂 第一个组分的k 值和最后一个峰的k 值相差几十倍至上百倍 解决 程序升温 流量程序 在一个分析周期中 不断改变流动相的组成 先用洗脱能力弱的溶剂 然后不断增加洗脱能力强的溶剂的组成 使各个组分能在最佳条件下得到洗脱 1 定义 gradientelution 2 梯度洗脱装置 A 低压梯度 泵前混合 B 高压梯度 泵后混合 三 进样装置 柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽 主要包括进样系统 连接管道及检测器中存在死体积 分柱前和柱后展宽 进样系统是引起柱前展宽的主要因素 因此高效液相色谱法中对进样系统要求较严 1 自动进样器进样 2 六通阀进样 美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用 各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器 进样阀 样品 装样 废液 淋洗液 至分离柱 样品环 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 手柄处于Load和Inject之间时 由于暂时堵住了流路 流路中压力骤增 再转到进样位 过高的压力在柱头上引起损坏 所以应尽快转动阀 不能停留在中途 在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱 是平头注射器 一方面 针头外侧紧贴进样器密封管内侧 密封性能好 不漏液 不引入空气 另一方面 也防止了针头刺坏密封组件及定子 1 部分装液法 进样量最多为定量环体积的75 并且要求每次进样体积准确 相同2 完全装液法 进样量最少为定量环体积的3至5倍 这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液 达到所要求的精密度及重现性 六通阀进样器的进样方式 四 色谱柱 色谱柱长 100mm 250mm色谱柱内径 4 6mm 2 1mm色谱柱填装 匀浆装柱 馏分收集器 用微处理机控制 按预先规定好的程序 或按时间 或按色谱峰的起落信号逐一收集和重复多次收集 数据处理及色谱工作站 通用型和专用型通用型工作站包括软件 数据采集装置和接口 可用于不同型号的仪器 具有数据采集 校正 计算 绘图 贮存 管理等功能 能完成一般仪器系统测试 计算工作曲线和样品含量 绘制色谱图等 专用型是指为一定型号仪器配套的工作站 大都包括了仪器参数的自动控制功能 一般功能较强 如能贮存和履行梯度洗脱程序和自动进样程序 进行各种数据校正 高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较