风湿病的常用免疫学检查及临床应用-广州中医药大学.ppt

风湿病的常用免疫学检查及临床应用 概述 多数风湿病的发病机制都与免疫失调有关 因此检测自身抗体 抗细胞内 细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白 补体 淋巴细胞及其它免疫学成份有助于许多疾病的诊断 治疗和疗效判断 对检验结果的判断必须密切结合临床 并进行综合分析 抗核抗体 ANA 是指抗细胞核成分的抗体 换言之是指一组对细胞核内DNA RNA 蛋白质 或这些物质的分子复合物的自身抗体 一 核的组成及其抗原性 细胞核是由核膜 核仁 染色质和核液组成 核膜为双层脂质结构 膜孔和内层的蛋白具有抗原性 间接免疫荧光检查出现周边核染色 核仁抗原包括核糖体蛋白 U3及Th小RNAs PM Scl抗原和核仁的Ku蛋白及增殖细胞核抗原 PCNA 染色质是由DNA和组蛋白组成 它排列的基本结构亚单位为核小体数百种非组蛋白 它们具有结构维持 基因表达及酶的作用 都是免疫反应潜在的目标 二 检测方法 对流免疫电泳 间接免疫荧光 放射免疫 免疫印迹 酶联免疫吸咐试验 三 抗核抗体的种类及临床意义 1954年Hargrave发现SLE病人血液中的LE细胞 它是抗核抗体谱检查的起源 它所针对的核抗原是DNA 主蛋白 DNP 目前已采用了简易和迅速的抗DNP抗体测定取代LE细胞的检查 它的阳性率在未治SLE中50 85 RA10 PSS PM DM及药物过敏等均有 一 分型 H 均质型 与组蛋白和抗DNA抗体有关 见于SLE 药物性狼疮S 斑点型 与抗ENA抗体有关 见于CTDP 周边型与抗DNA抗体有关 见于SLEC 着丝点型与DNA蛋白结合体有关 为CREST综合征的标记性抗体N 核仁型与抗4 6sRNA有关 见于PSS不同的底物ANA的阳性率不同 国际以Hep 2作为基质 SLEPSS HEP 295 70 鼠肝85 50 二 分类 1 ds DNA检测 Farr RIA 结合力 20 30 SLETE 马疫锥虫 1 5 1 10SLE 抗ds DNA抗体是SLE的重要抗体 40 60 的SLE抗ds DNA抗体阳性 特别是活动性SLE和狼疮肾 其它风湿性疾病则阳性率很低 2 抗Histon抗体 不同疾病中的阳性率 ELISA 药物性狼疮约为95 SLE50 70 PM DM13 RA23 服INH53 SS30 服他巴唑20 PSS27 服苯妥因钠18 3 抗ENA抗体 常见七种常见的ENA抗体 SM 病人名 J0 1 病人名John RNP nRNA PM 1 polymyositis SS A 病名 Scl 70 sclerederma SS B 病名 抗Sm抗体 仅在SLE中出现的阳性率为25 左右 它是SLE的标记性抗体 它对早期 不典型SLE及治疗缓解后SLE的回顾性诊断有很大帮助 抗nRNP抗体 在多种风湿病中出现 常与双手肿胀 雷诺氏现象 指端硬化相关 当抗nRNP阳性而同时抗dsDNA阴性 则肾病发生率较低 在METD中几乎100 阳性 抗SS A Ro抗体 在原发SS中70 80 SLE40 RA20 以鼠肝为底物的ANA检测中 抗SS A抗体常呈阴性反应 用免疫印迹法检测时它可与60KD和52KD两条蛋白多肽反应 作者及一些文献都认为60KD的多肽在SLE中较SS更多见 进一步的研究表明抗SS A抗体与新生儿狼疮 先天性房室传导阻滞 光敏感相关 抗SS B La抗体 在原发SS中50 60 SLE10 故有人称抗SS B抗体是SS的标记性抗体 抗RIB抗体 ribosomeRNP 在SLE中24 且常常在活动期SLE中存在 但不随病情的缓解而消失 可持续1 2年 抗RIP抗体与LN和NP较密切 有报导说与在RIP阳性的SLE中37 发生NP 而RIP阴性的SLE中仅次16 发生NP 两者有显著差异 抗PCNA proliferatingcellnuclearantigen 抗体 针对的是36Kd的DNA聚合酶副蛋白 在SLE中2 10 而在其它结缔组织病中阴性 抗Pm 1抗体 在PM DM中8 15 在PSS中3 在PM与PSS重叠且伴有肾炎的病人中 阳性率可高达80 抗Jo 1抗体 在PM中25 30 合并肺间质病变时其阳性率可高达60 被视为PM的标记性抗体 如患者有发热 对称性关节炎 工艺手 雷诺氏现象及肌炎并肺间质病变 抗Jo 1抗体常阳性 此时称之为抗Jo 1抗体综合症 抗Scl 70抗体 在PSS中30 40 是PSS的标记抗体 有报道抗Scl 70抗体阳性的PSS患者肺纤维化的发生率是抗Scl 70抗体阴性患者的10倍 抗Ku抗体 在SLE MCTD PSS中30 50 DM中仅5 抗Ki抗体和抗Mi 2 抗Ki抗体在SLE中8 20 其价值不明 在其它风湿病中仅很低的阳性率 抗Mi 2抗体在PM中5 抗RA33抗体 在RA中36 尤其是早期RA血清中 有人随访了抗RA33抗体阳性又未能确诊的关节炎 结果大部分病人在8 24个月后均发生典型的RA 另需注意的是u1RNP可能与RA33有交叉反应 且抗RA33抗体的消长与病情和用药无关 1989年Hassfeld首次报道 总之检测抗核抗体的意义就在于帮助一些疾病的诊断 有些抗核抗体有较高诊断特异性 观察治疗反应 判断疾病的活动性 不同抗体不同对待 如RNP Sm就与活动性无关 疾病与抗核抗体关系 A dsDNASLEA smSLEA scl 70PSSA CentromereCRESTA Jo 1PMA Pm 1PM DMA SSBSSA SSASS SLEA RNPMCTD CTDA P蛋白SLE 抗磷脂抗体 APL 抗磷脂抗体包括狼疮抗凝因子和一组抗负电磷脂抗体目前应用最多的是抗心磷脂抗体 AcL 它有IgG IgM和IgA三种成份 IgG更具特异性 而IgA最不具特异 Acl与HLADR DQ及C4有关 在SLE患者的AcL阳性率是33 44 ELISA法 在合并有网状青紫或中枢神经病变的SLE其阳性率达80 或90 在其它风湿病 如PSS RA SS和MCTD中阳性率分别是23 15 10 和14 AcL与反复动脉 静脉血栓 习惯性流产 血小板减少以及神经系统症状密切相关 是诊断抗磷脂抗体综合征 APS 不可缺少的指标 1957年Conley首次报道 抗内皮细胞抗体 AECA 是一种针对内皮细胞膜蛋白的抗体 在SLE中的阳性率约14 85 也可出现于RA MCTD SS以及一些血管炎疾病如Wegener s肉芽肿 多动脉炎 Behcet s病以及kawasaki疾病中 IgG IgM亚类的AECA与疾病活动性显著相关 AECA与血管损伤密切相关 尤其是肾脏累及时 当血管炎发作缓解 则AECA滴度下降 抗中性粒细胞浆抗体 ANCA 是一种与中性粒细胞或单核细胞胞浆中的溶酶体酶起反应的抗体 ANCA可分为胞浆型ANCA cANCA 和核周型ANCA pANCA 其滴度常与病情活动相关cANCA抗原主要为颗粒中的蛋白酶 PR3 protlinase pANCA抗原主要为髓过氧化酶 Hyploperoxidase MPO 韦格氏肉芽肿病人血清中有cANCA 特异性为90 少数巨细胞动脉炎 大动脉炎 过敏性紫癜 白细胞破碎性皮肤性血管炎和白塞病等cANCA也可阳性 pANCA不如cANCA具有诊断特异性 在镜下多动脉炎 Churg sttrauss及其它自身免疫性疾病 硬化性胆管炎 溃疡性 结肠炎 肝炎 狼疮 类风关 干燥等 中均能出现 ANCA可能参与血管炎的发病 类风湿因子 RF RF是抗人或动物IgG分子FC片段的抗体 它不仅能与变性的IgG反应 也能与自身的或异体的IgG反应 还能与其它抗原如核蛋白发生交叉反应 按照抗免疫球蛋白类型分为IgM RF IgG RF和IgA RF三种 后种分子不易于其它非相关抗原反应 故特异性较强 具有更高的诊断价值 如今最常用于检测RF的方法仍是乳胶凝集法 IgM型 RA患者中阳性率可达80 如乳胶法RF阴性 临床高疑RA 可用ELISA测IgG和IgA型RF 一般抗体滴度越高 关节外的表现越重 疾病越活动 预后越差 在5 的正常老人 其它风湿病 细菌性心内膜炎 结核 肝炎 肺纤维化等多种疾病中都可出现不同比例 低滴度的RF阳性 除干燥综合征症为高滴度 此外RF检测是划分血清阴性关节炎是重要标准 淋巴细胞分型 lymphocytetypy 淋巴细胞由T B二类组成 它们是免疫反应中的重要物质基础 在免疫系统中 B淋巴细胞执行特异体液免疫功能 T淋巴细胞则执行特异细胞免疫和免疫调节功能 因此这二类细胞的数目及功能异常均可导致免疫学异常 淋巴细胞表面表达多种蛋白分子 有些只暂时出现在细胞发育的某一阶段 有些表达于全部细胞表面 有些分子只表达于特定功能亚群的T或B细胞表面 故称之为分化抗原 这些分子均可被相应单克隆抗体识别 从而将T B淋巴细胞分成许多成熟度和活性不同的亚型 部分分化抗原命名的T B细胞 分化抗原分子量分布及特点意义CD121 48不成熟T细胞血液病 CD320 20 25成熟T细胞自身免疫病 SLE RA CD455辅助T细胞免疫活跃 免疫缺陷 CD830 45杀伤 抑制T细胞SLE CD2550 55IL 2受体 链自身免疫病 CD45RO80记忆T细胞同上 尤其是RACD1995早期B细胞急性淋巴细胞白血病 CD21140略成熟B细胞自身免疫病 CD22135成熟B细胞 与T同上细胞有协同作用 细胞因子 cytokine 细胞因子是活细胞分泌的具有生物活性的多肽 蛋白产物 是免疫调节中不可缺少的物质 同时也参与炎症反应 根据来源分成淋巴因子和单核因子两类 其中以T细胞产生最多 研究结果最明确 生物学意义最明显 如IL1 15 IF2 单核因子主要指IL1 IL6及TNF 共同的特性是 多效性 多源性 快速反应性及致热原性 细胞因子与意义 细胞因子来源意义IL 1单核 胶质 T细胞 内皮诱导IL 2 活化淋巴细胞 致炎 抗癌IL 2THS细胞 胸腺细胞促进细胞因子 IgG分泌 活化NK和巨噬细胞 剌激T B细胞增殖IL 6单核 内皮细胞 瘤细胞诱导B细胞增殖 致炎 抗癌TNF单核 内皮抗肿瘤 致炎IF 白细胞 成纤维细胞 抗病毒 抗癌及免疫调节T细胞CSF 6类 淋巴细胞 骨髓细胞促进血细胞及组织细胞生长 THANKYOU