微生物标本采集ppt课件

微生物标本采集 标本质量 微生物检验结果质量正确选择 采集 运输错误的标本 错误的结果 错误的治疗 2 研究表明 分析前和分析后是当代检验误差的主要来源 有报道 有93 的实验室误差来自分析前 分析前阶段的质量控制是整个检验质量控制中一个容易被忽视却非常重要的环节 它是获得准确实验结果的重要保证 3 标本采集的规范化是微生物检验分析前质量控制的重要内容之一 4 标本规范化采集的重要性 正确采集 处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低 是临床细菌检验成功的关键 标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误 不当的标本可导致假阴性 假阳性结果的出现 因此标本采集与处理的规范化是准确 及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础 好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量 降低医疗成本 5 国内微生物标本的采集目前存在的问题 如痰培养污染口腔大量细菌 如肺炎链球菌等在口腔可能为定植菌 但它有是大叶性肺炎常见致病菌 尿培养 大肠埃希菌常是尿路感染菌 但尿袋常污染这种细菌 采样方法不规范时 会污染这种细菌 6 正确运送方式 标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露 可能减少很多种细菌的存活时间苛养菌 脑膜炎球菌 淋病奈瑟菌 流感嗜血杆菌 肺炎链球菌肠道菌 沙门菌 志贺氏菌 霍乱弧菌 空肠弯曲菌及厌养菌定量评价细菌数量的培养 尿标本 运送时间 对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时 如果运送时间太长 其它菌则成倍增长 目标细菌可同其它菌一起过度生长 需进行细菌学检测的所有标本 应在收集后2小时内送到实验室 7 准确报告培养结果局限性 可能造成假阴性结果的原因 采集和运输标本不理想 可能控制的 延误了培养时间 病原菌数量很少 或标本量不够检出 敏感度 WBC 其他身体免疫因子或使用抗生素抑制生长在当时所有培养方法不能培养的微生物 局限性 8 临床医生要合理用好两种数据 1 本地区 本单位病原流行病学资料 指导经验用药 微生物室 院感办 临床科室 2 药敏试验报告 纠正经验用药 重视病原学检查 尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检 以提高病原学诊断率 为选药和调整药物提供依据 9 一 标本采集和处理的原则 可能致病源 收集到越多越好 保持其活性 非无菌部位 避免污染 消毒 减少增生 低温保存及使用输送培养基无菌部位 避免污染 确实消毒 10 发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查最好是病程早期 急性期或症状典型时 而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集标本采集时应严格无菌操作 采集的标本应无外源性污染 减少或避免机体正常菌群及其它杂菌污染要收集足够量的标本标本采集后应立即送至微生物室 11 二 血液培养 病人出现以下临床表现 或同时具备以下几种临床表现时应采集血培养 1发热 38 或低温 36 2寒战3白细胞增多 10 10 L 特别有 核左移 时 4粒细胞减少 成熟的多形核白细胞 1 10 L 5血小板减少6昏迷7多器官衰竭8血压降低9呼吸加快 12 几种特殊情况 1可疑新生儿败血症时 除发热或低温外 很少培养出细菌 应增加尿液和脑脊液培养 2老年菌血症病人可能不发热或不低温 如伴有身体不适 肌痛或中风 可能是感染性心内膜炎 也应采取血培养 3骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的 临床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主 但当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者 抽取骨髓培养阳性率会远高于血培养 13 皮肤消毒和预防血培养污染 要求和建议 建议使用碘酊或者洗必泰 碘酊 次氯酸和洗必太的消毒效果要胜于碘伏 碘酊和洗必泰的作用大致相等 消毒剂要求有足够的作用时间以保证消毒效果 碘酊要求30秒 碘伏要求1 5 2分钟 洗必泰要求的消毒作用时间与碘酊相等 而且没有过敏反应 消毒后不必擦去 但不能用于小于2个月的婴儿 14 皮肤消毒 碘酊 次氯酸和洗必太的消毒效果要胜于碘伏 碘酊和洗必泰的作用大致相等 消毒剂要求有足够的作用时间以保证消毒效果 碘酊要求30秒 碘伏要求1 5 2分钟 洗必泰要求的消毒作用时间与碘酊相等 而且没有过敏反应 消毒后不必擦去 但不能用于小于2个月的婴儿 15 培养瓶消毒程序 1 用70 酒精消毒血培养瓶橡皮塞子 2 酒精作用60s 3 在血液注入血培养瓶之前 用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精 然后注入血液 16 皮肤消毒后不可触摸穿刺点血液由于菌量少和血液成分影响不建议直接涂片 抽取血液后 不要换针头 直接注入血培养瓶中 轻轻颠倒混匀 以防血液凝固 采血培养应尽量在抗菌药物使用之前 采集血培养 一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养 每次2瓶 同时作需氧和厌氧培养 因为研究已证实 多份血培养可以提高检测所有的菌血症和真菌血症以及帮助排除血培养的假阳性 17 血培养的血量 对于成年患者 当血培养的血量在2 30ml的范围内 病原菌的阳性培养率与血量成正比 对于婴幼儿 抽血量不应超过患者总血量的1 血标本量不足 血液体积少于血培养瓶标签上推荐血量的80 18 对于疑似菌血症者 建议采集2 3套血培养有研究表明一套血培养阳性率为65 2套80 3套96 19 为什么要送检厌氧瓶 正视厌氧瓶的功能 增加采血量 增加兼性厌氧菌的分离机会 增加厌氧菌的分离机会提升阳性率 20 关于厌氧血培养瓶的使用 研究中 使用 配对需氧 厌氧血培养瓶 比用 两个需氧血培养瓶 复现出更多的金葡 肠杆菌科细菌和厌氧菌 推荐常规血培养包括配对的需氧 厌氧血培养瓶 当抽得的血少于推荐血量时 应该首先接种需氧瓶 剩余血液接种厌氧瓶 21 22 关于厌氧血培养瓶的使用 绝大多数需氧的致病菌都是兼性厌氧菌 坚持需氧加厌氧的双瓶培养 不仅可以获得双倍的血培养血量 还可以增加这些兼性厌氧菌的检出率 更何况 一些兼性厌氧菌在厌氧环境中得以更快的生长出来 因此 这些细菌的血培养可能在厌氧瓶中更早报告阳性或者只在厌氧瓶中生长 23 结论 如果不送检厌氧瓶 将会损失16 的报阳机会 厌氧瓶更优于需养瓶更快报阳 24 危重病人的三级报告 一级 报告培养阳性和涂片报告 我们科室第一时间电话通知临床医生 并要求医生开出细菌涂片医嘱 不需采样 只要送单 我们在细菌涂片报告上描述我们意见 二级 报告确切涂片和培养初步报告 有改变时 三级 正式鉴定和药敏报告 25 三 痰标本培养 检查项目 痰常规培养及鉴定 嗜血杆菌培养 真菌培养及鉴定 痰液常规 真菌涂片 抗酸涂片痰常规培养及鉴定 嗜血杆菌培养 真菌培养及鉴定 痰液常规 真菌涂片 抗酸涂片可以同一标本送检 痰液的一般细菌培养需要同时进行痰液常规 痰液常规可以提示痰标本的初步信息 上皮细胞的多少提示痰标本留取污染口腔细菌的程度 影响着痰培养结果的可靠性 26 三 痰标本采集方法 自然咳痰以晨痰为佳 用清水反复漱口 用力咳出呼吸道深部的痰 痰液直接吐入无菌容器中 尽快送检 否则有的细菌 如肺炎球菌 流感嗜血杆菌 在外界可能死亡 痰量极少者可用雾化吸入加温至45 的10 NaCl水溶液 使痰液易于排出 要求采到肺深部的痰液 不要唾液 27 三 痰标本采集方法 吸痰管取痰法对咳嗽乏力或昏迷病人 用吸痰管经鼻腔或口抵达气管腔内吸引痰液 双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者 可用吸痰管经人工气道插至叶支气管水平吸引痰液 支气管镜采集法 支气管肺泡灌洗等 28 三 痰标本的质量评估 痰培养前需做标本质量评估 即涂片进行细胞学筛选和细菌学显微镜检查 明确唾液对标本的污染程度 并可初步判定是否有病原菌存在 病原菌的数量及其类别 有助于初步报告 选择培养基和对培养结果的综合分析 一般认为 来自下呼吸道的合格痰标本应是含脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多 而受唾液污染严重的不合格标本则扁平鳞状上皮细胞较多 中华医学会呼吸病学分会制订的标准 痰直接涂片检查每低倍视野鳞状上皮细胞 10个 白细胞 25个 29 三 痰标本注意事项 以晨痰为好 最好在应用抗菌药物之前采集标本 采集后应立即送检 以防止某些细菌在外环境中死亡 室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌 葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降 约有1 4 1 2肺部感染患者可能发生菌血症 应同时做血培养 30 四 尿培养 标本送检指征 有典型的尿路感染症状 肉眼脓尿或血尿 尿常规检查表现为白细胞和 或亚硝酸盐阳性 不明原因的发热 无其他局部症状 留置导尿管的病人出现发热 膀胱排空功能受损 泌尿系统疾病手术前 31 四 尿培养 检查项目 尿培养及菌落计数 真菌培养及鉴定 细菌涂片检查 抗酸杆菌 真菌涂片检查 32 四 尿培养采集方法 清洁中段尿 最好留取早晨清洁中段尿标本 嘱咐患者睡前少饮水 清晨起床后用肥皂水清洗会阴部 女性应用手分开大阴唇 男性应翻上包皮 仔细清洗 再用清水冲洗尿道口周围 开始排尿 将前段尿排去 中段尿约10 20ml直接排入专用的无菌容器中 立即送检 2h内接种 该方法简单 易行 是最常用的尿培养标本收集方法 但很容易受到会阴部细菌污染 应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取 如需即时采样 应采集在膀胱停留4h以上的尿液 方法同上 33 四 尿培养采集方法 留置导尿管收集尿液 利用留置导尿管采集标本时 应先消毒导尿管外部 按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液 操作时应防止混入消毒剂 注意不能从尿液收集袋中采集尿液 34 四 尿培养注意事项 一般于晨起第一次尿液送检 如需即时采样 应采集在膀胱停留4h以上的尿液 应选在抗菌药物应用之前 标本采集后应及时送检 及时接种 室温下保存时间不得超过2h 夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存 4 冷藏保存时间不得超过8h 但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养 有一部分尿路感染患者可能发生菌血症 应同时做血培养 35 五 开放性感染标本 检查项目 脓性分泌物培养及鉴定 脐部分泌物真菌培养及鉴定 脐部分泌物细菌涂片检查 脐部分泌物抗酸杆菌涂片检查 脐部分泌物真菌涂片检查 36 五 开放性感染标本 采集方法 开放性感染和已溃破的化脓灶 先用灭菌生理盐水冲洗表面的污染菌 采样前要先进行表皮消毒 采组织肉芽上的新鲜分泌物 不能直接采脓苔中央 用灭菌拭子 采用前应用无菌盐水预湿 采取脓液及病灶深部的分泌物 注意尽量取化脓组织与正常组织交界处的脓汁 因为脓汁中心的细菌大部分已死亡 交接处的活菌较多 会提高阳性率 所有脓性标本建议同时进行细菌涂片 通过涂片观察尽早了解细菌有关信息 如细菌分类 是否混和感染 白细胞情况 细菌侵袭还是定植等情况 37 六 封闭性脓液 深部脓肿常见不外乎肺脓肿 上呼吸道正常菌群混合感染 结核可能性均存在 肝脓肿 肠道菌群混合 结核可能性 腹腔脓肿 肠道菌混合可能性极大 盆腔脓肿 肠道菌群 阴道菌群 其它如肾脓肿 胰腺脓肿相对较少 脓液直接接种 不能增菌 即直接用注射器抽取或拭子采样 无法抽取或开放性时 脓液标本建议同时进行细菌涂片 通过涂片观察尽早了解细菌有关信息 如细菌分类 是否混和感染 有无厌氧菌 白细胞情况等 38 六 封闭性脓液 检查项目 脓液普通培养及鉴定 脓液真菌培养及鉴定 脓液厌氧菌培养及鉴定 脓液细菌涂片检查 脓液抗酸杆菌涂片检查 脓液真菌涂片检查 39 七 粪便 标本送检指征 1急性腹泻 大便次数明显增多 腹痛 里急后重 往往伴有发热 大便性状为粘液便或脓血便 2慢性腹泻 大便次数多 多为稀便 伴有全身乏力等症状 3无痛性大量水样便或米泔样稀便 4先吐后泻 恶心 呕吐 腹痛 腹泻 有集体发病史 多为细菌性食物中毒所致 5抗生素治疗后腹泻 常发生于长期抗生素治疗后 糊状便 排便次数增加 6高热惊厥 通常为中毒性痢疾 多见于婴幼儿和小儿 40 七 粪便 标本的采集方法 自然排便采集法 粪便先排入一干净容器中 调取有脓血粘液部位的粪便2 3g 液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内立即送检 直肠拭子法 如不易获得粪便时或排便困难的患者 可采用直肠拭子方法采集 取出后置于灭菌容器内立即送检 方法为将拭子前端用无菌生理盐水湿润 然后插入肛门约4 5cm 幼儿约2 3cm 处 轻轻旋转擦取直肠表面粘液后退出 41 七 粪便 标本采集注意事项 采集时间 应在急性期采样 以提高检出率 最好在用药前 粪便标本不可被尿液污染 不可在地上或粪池内采样 不可用卫生纸收集 卫生纸可能抑制粪便中的某些致病菌生长 标本运送过程中必须保证其安全 防止溢出 避免细菌污染 42