(医学课件)骨髓细胞学检查ppt演示课件

骨髓细胞学检查 Bone Marrow Examination,.,2,内容,骨髓检查内容与部位 骨髓细胞学检测临床应用 骨髓细胞学检测的方法与内容 血细胞发育过程中形态演变的一般规律 血细胞的正常形态学特征,.,3,内容,血细胞化学染色 细胞免疫分型 细胞遗传学分析 常见血液病骨髓细胞学检查特点,.,4,骨髓检查内容,.,5,骨髓穿刺或活检的部位,髂前/后上棘（posterior or anterior Iliac crest） 胸骨柄（Sternum ）(aspiration only) 胫骨粗隆（Tibia ）(infants 1 year old , particularly newborns) 脊柱棘突（Spinous processes of the vertebrae） (rarely used),Copyright The McGraw-Hill Companies, Inc. All Rights Reserved.,.,6,骨髓细胞学检测临床应用,诊断造血系统疾病： 白血病、恶性组织细胞病、多发性骨髓瘤、再生障碍性贫血、巨幼细胞贫血、戈谢病、尼曼-匹克病、海蓝色组织细胞病等辅助诊断某些疾病： 骨髓转移瘤、淋巴瘤的骨髓浸润、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病、缺铁性贫血、溶血性贫血、脾功能亢进和特发性血小板减少性紫癜,.,7,骨髓细胞学检测临床应用,提高某些疾病的诊断率： 疟原虫、黑热病原虫、狼疮细胞 细菌培养、细胞培养染色体培养、造血细胞集落培养,.,8,骨髓细胞学检查的适应证,外周血细胞成分及形态异常 不明原因的发热，肝、脾、淋巴结肿大 骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜、血沉明显增加 化疗后的疗效观察 移植后的疾病复发监测 骨髓活检、造血祖细胞培养、染色体核型分析、微生物及寄生虫学检查（如伤寒、疟疾）,.,9,骨髓细胞学检查的禁忌证,各种凝血因子缺陷引起的出血性疾病如血友病 晚期妊娠的孕妇慎做骨髓穿刺术,.,10,骨髓细胞学检测的方法和内容,骨髓涂片肉眼观察: 低倍镜检查： 判断标本是否满意： 取材 制片 染色 确定骨髓增生度（见后表) 计数巨核细胞： 735个。 观察有无异常细胞及其他： 转移瘤细胞、戈谢细胞、尼曼-匹克细胞、疟原虫,.,11,备注：40物镜为高倍镜视野,骨髓增生程度,.,12,骨髓增生程度,.,13,骨髓检查方法,油镜下观察 有核细胞分类： 200-500个有核细胞。计算出各系统各阶段有核细胞的百分率。 计算粒/红比值：正常人约24:1。 细胞形态观察 :正常或异常细胞 其他：如寄生虫 骨髓象的分析与报告,.,14,造血系统,.,15,血细胞形态演变的一般规律,.,16,血细胞形态演变的一般规律,.,17,粒细胞系统,占5060% 有核细胞细胞类型 比例原始粒细胞 1%早幼粒细胞 5%中幼粒细胞 15%晚幼粒细胞 15%嗜酸性粒细胞 5嗜碱性粒细胞 1,.,18,红细胞系统,占20% 有核细胞细胞类型 比例 原红细胞 1%早幼红细胞 5%中幼红细胞 10%晚幼红细胞 10%,.,19,其他系统,淋巴细胞： 占20% 有核细胞 单核细胞： 占4% 有核细胞 浆细胞 ： 占2% 有核细胞 巨核细胞： 7-35/片 其他细胞或寄生虫： 无,.,20,血细胞正常形态特征,红细胞系粒细胞系淋巴细胞系浆细胞系单核细胞系巨核细胞系,.,21,红细胞系,原红细胞(proerythroblast)： 圆形或椭圆形，直径15-22um，细胞边缘有时可瘤状突起。核圆形，居中或稍偏位，约占细胞直径的4/5。核染色质呈细砂状或细粒状，较原粒细胞着色深。核仁1-5个，呈暗蓝色，界限不甚清晰，常很快消失。胞质量少，不透明，深蓝色，有时核周围着色浅形成淡染区，胞质不含颗粒。,.,22,红细胞系,早幼红细胞(basophilic erythroblast)： 圆形或椭圆形，直径11-20um，核圆形，约占细胞直径的2/3，居中或稍偏位。染色质开始凝集成小块状，核仁消失。胞质量较多，呈不透明深蓝色，有时胞质着色较原红细胞更深，仍可见瘤状突起及核周淡染区，不含颗粒。,.,23,红细胞系,中幼红细胞(polychromatophilic erythroblast)： 圆形，直径8-18um。核圆形，约占细胞直径的1/2。染色质凝集成团块状或粗索状，似车轮状排列，其间有明显的淡染区域。胞质量较多，因内含血红蛋白逐渐增多，可呈着色不均匀的不同程度的嗜多色性。,.,24,红细胞系,晚幼红细胞(orthochromatic erythroblast)： 圆形，直径7-12um。核圆形，居中，占细胞的1/2以下。染色质凝集成大块状或固缩成团，呈紫褐色或紫黑色。胞质量多，呈均匀的淡红色或极淡的灰紫色。,.,25,粒细胞系,原粒细胞（myeloblasts）： 圆形或椭圆形，直径11-18um。胞核较大，占细胞的2/3以上，圆形或椭圆形，居中或略偏位。核染色质呈淡紫红色细粒状，排列均匀平坦如薄纱。核仁2-5个，清楚易见，呈淡蓝色或无色。胞质量少，呈透明天蓝色，绕于核周，不含颗粒或有少量颗粒。,.,26,粒细胞系,早幼粒细胞（Promyelocyte）： 圆形或椭圆形，胞体较原粒细胞大，直径12-22um。胞核大，圆形或椭圆形，居中或偏位。染色质开始聚集呈粗网粒状，分布不均。核仁可见或消失。胞质量较多，呈淡蓝色或蓝色，核周的一侧可出现淡染区。胞质内含有大小、形态和数目不一、分布不均的紫红色非特异性嗜天青颗粒。,.,27,粒细胞系,中幼粒细胞（Myelocyte）： 中性中幼粒细胞： 圆形，直径10-18um。胞核内侧缘开始变扁平，或稍呈凹陷，圆形或椭圆形，居中或偏位。染色质开始聚集呈粗网粒状，占细胞的2/3-1/2。染色质聚集成粗索状或小块状，核仁消失。胞质量多，淡红色，内含细小、分布均匀、淡紫红色的特异性中性颗粒。,.,28,粒细胞系,晚幼粒细胞（Metamyelocyte）圆形或椭圆形，直径10-16um（嗜碱性晚幼粒细胞稍小）。胞核内明显凹陷呈肾形，但其凹陷程度一般不超过假设核直径的一半。核染色质粗糙呈粗块状，排列紧密。胞质量多，呈淡红色。内含不同的特异性颗粒，可分为中性、嗜酸性、嗜碱性晚幼粒细胞，特异性颗粒的形态、染色及分布等特点同中幼粒细胞,.,29,粒细胞系,杆状核粒细胞（Band cell）圆形，直径10-15um。胞核狭长，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红色。胞质中含特异性颗粒，也可分为中性、嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞，颗粒特点同中幼粒细胞,.,30,粒细胞系,中性分叶核粒细胞（Segmented neutrocyte）：圆形，直径10-15um。胞核分叶状，常分为2-5叶，以分3叶者多见，叶与叶之间有细丝相连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。胞质丰富，呈淡红色，布满细小紫红色的中性颗粒,.,31,粒细胞系,Neutrophil(中性) Eosinophil(嗜酸性性) Basophil(嗜碱性性),.,32,淋巴细胞系,原淋巴细胞（Lymphoblast）： 细胞圆形或椭圆形，直径10-18um。胞核大，圆形或椭圆形，稍偏位。核染色质细致，呈颗粒状，但较原粒细胞稍粗糙，着色较深，染色质在核膜内层及核仁周围有浓集现象，使核膜浓厚而清晰。核仁多为1-2个，小而清楚，呈淡蓝色或无色。胞质量少，呈透明天蓝色，不含颗粒。,.,33,淋巴细胞系,幼淋巴细胞（Prolymphocyte）： 圆形或椭圆形，直径10-16um。胞核圆形或椭圆形，有时可有浅的切迹。核染色质较致密粗糙，核仁模糊或消失。胞质量较少，淡蓝色，一般无颗粒，或可有数颗深紫红色嗜天青颗粒。,.,34,淋巴细胞系,淋巴细胞（Lymphocyte） 大淋巴细胞： 圆形，直径13-18um。胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。核染色质常致密呈块状，排列均匀，深染呈深紫红色。胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而稀疏的嗜天青颗粒。 小淋巴细胞：圆形或椭圆形，直径6-10um。胞核圆形或椭圆形，或有切迹，核着边，核染色质粗糙致密呈大块状，染深紫红色。胞质量极少，仅在核的一侧见到少量淡蓝色胞质，有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。,.,35,浆细胞系,原浆细胞（Plasmablast） 圆形或椭圆形，直径15-20um。胞核圆形，占细胞的2/3以上，常偏位。核染色质呈粗颗粒网状，紫红色。核仁2-5个。胞质量多，呈灰蓝色，不透明，核的一侧可有半圆形淡染区，不含颗粒。,.,36,浆细胞系,幼浆细胞（Proplasmacyte） 多呈椭圆形，直径12-16um。胞核圆形，占细胞的1/2，偏位。核染色质开始聚集，染深紫红色，可见车轮状排列，核仁基本消失。胞质量多，呈不透明灰蓝色，近核处有淡染区，有时可见空泡或少数嗜天青颗粒,.,37,浆细胞系,浆细胞（Plasmocyte） 圆形或卵圆形，直径8-20um。胞核圆形，偏位。核染色质聚集成块，深染，排列成车轮状。胞质丰富，呈不透明深蓝色或蓝紫色，核的一侧有明显的淡染区。常可见小空泡，偶见少数嗜天青颗粒。,.,38,单核细胞系,原单核细胞（Monoblast） 圆形或椭圆形，直径15-25um。胞核较大，圆形或椭圆形。核染色质纤细疏松呈网状，染淡紫红色。核仁1-3个，大而清楚。胞质丰富，呈浅灰紫色，半透明如毛玻璃样，边缘常不整齐，有时可有伪足状突起，不含颗粒 。,.,39,单核细胞系,幼单核细（Promonocyte） 圆形或不规则形，直径15-25um。胞核圆形或不规则形，可有凹陷、切迹、扭曲或折叠。染色质较原单核细胞稍粗，但仍呈疏松丝网状，染淡紫红色。核仁模糊或消失。胞质量多，呈灰蓝色，边缘可有伪足突出，浆内可见许多细小、分布均匀的淡紫红色嗜天青颗粒 。,.,40,单核细胞系,单核细胞（Monocyte） 圆形或不规则形，直径12-20um。边缘常见伪足突出。胞核形状不规则，常呈肾形、马蹄形、笔架形、S形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致，呈淡紫红色丝网状。胞质丰富，呈淡灰蓝色或淡粉红色，可见多数细小、分布均匀细尘样淡紫红色颗粒 。,.,41,巨核细胞系,原巨核细胞（Megakaryoblast） 圆形或椭圆形，胞体较大，直径15-30um。胞核大，占细胞的极大部分，呈圆形或椭圆形。染色质呈深紫红色，粗粒状，排列紧密。可见淡蓝色核仁2-3个，核仁大小不一，不清晰。胞质量较少，呈不透明深蓝色，边缘常有不规则突起。,.,42,巨核细胞系,幼巨核细胞（Promegakaryocyte） 圆形或不规则形，胞体明显增大，直径30-50um。胞核开始有分叶，核形不规则并有重叠。染色质凝集呈粗颗粒状或小块状，排列紧密。核仁模糊或消失。胞质量增多，呈蓝色或灰蓝色，进核处可出现淡蓝色或淡红色淡染区，可有少量嗜天青颗粒。,.,43,巨核细胞系,颗粒巨核细胞（Granular megakaryocyte） 胞体明显增大，直径50-70um，甚至大100 um，外形不规则。胞核明显增大，高度分叶，形态不规则，分叶常层叠呈堆积状。染色质粗糙，排列致密呈团块状，染深紫红色。胞质极其丰富，呈淡紫红色，其内充满大量细小紫红色颗粒，有时可见边缘处颗粒聚集成簇，但周围无血小板形成。,.,44,巨核细胞系,产板型巨核细胞（Megakaryocyte with platelet）胞质内颗粒明显聚集成簇，有血小板形成，胞质周缘部分已裂解为血小板，使细胞边缘不完整，其内侧或外侧常有成簇血小板出现。其余的细胞特征均与颗粒型巨核细胞相同。,.,45,细胞化学染色,髓过氧化酶染色(POX)中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)非特异性酯酶染色(a-NAE)糖原染色(PAS)铁染色,.,46,细胞化学染色,.,47,中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）,参考值：成人 NAP阳性率10%-40%；积分：40-80,.,48,几种常见急性白血病化学染色结果,.,49,铁染色,参考值：细胞外铁 +； 细胞内铁 20% 90%， 平均65% 临床意义： 1. IDA，细胞外铁缺如，细胞内铁减少； 2. 非缺铁性贫血细胞外铁增加 3. 铁粒幼细胞性贫血细胞内铁增多，形成环状铁粒幼细胞增多15%,.,50,铁染色,.,51,细胞免疫分型,原理：用单克隆抗体及免疫学技术对细胞表面和/或细胞质存在的特异性抗原进行检测。分析细胞所属系列、分化程度和功能状态。 检测方法： 1.免疫荧光法（临床常用流式细胞仪检测） 2. 免疫酶染色法 3. ABC法,.,52,细胞免疫分型的临床应用,1.有助于识别不同系列的细胞 2. 识别不同的淋巴细胞 3. 用于检测T淋巴细胞亚群 4. 用于识别不同分化阶段的细胞,.,53,细胞免疫分型的临床应用,5. 有助于识别不同功能状态的细胞 6. 有助于对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究 7.可用于各种白血病细胞的免疫表型分析 8. 可用于白血病微小残留病的检测,.,54,细胞免疫表型(immunophenotypes),常用各系血细胞CD抗原 1、T系：CD1-CD8（CD6不用） 2、B系：CD10, CD19-CD24, FMC7 3、髓系：CD11b,CD13-CD16,CD33,CD64 4、干祖：CD34, CD117, CD38, HLA-DR,.,55,B 淋巴细胞免疫表型,泛B标志：CD19,HLA-DR,cCD79a/CD22 幼稚B标志：CD34,TdT,CD10 成熟B标志：CD23,FMC7,.,56,T淋巴细胞免疫表型,泛T: CD2,CD5,CD7,cCD3 幼稚T: CD34,TdT,CD1a,CD4/8 成熟T: CD3,CD4,CD8,.,57,单核细胞免疫表型,全单核细胞标志：CD33,CD13,HLA-DR 幼稚单核细胞标志：CD34,CD117 成熟单核细胞标志：CD14,CD64,.,58,粒细胞免疫表型,全粒细胞标志：CD13,CD33,Cmpo 幼稚粒细胞标志：CD34,CD117,HLA-DR 成熟粒细胞标志：D15,CD11b,CD10,CD64,.,59,诊断白血病主要标记,B-ALL: CD34, HLA-DR, CD19, CD10+/-, cCD79a T-ALL: CD34, CD38, CD7, CD2+/-, CD5+/-, cCD3 AML: CD34, CD117, CD33, CD13, cMPOM3: CD34-, HLA-DR-M2: CD19+: t(8, 21)M4/M5: CD14+M6: GlyA+, CD71+M7: IIb/IIIa(CD41, CD61)+,.,60,白血病的流式细胞仪检测结果,.,61,急性白血病细胞免疫表型特点,ALL与AML细胞免疫表型特点,.,62,急性淋巴细胞白血病免疫表型特点,.,63,急性髓细胞性白血病,.,64,细胞遗传学检测,.,65,细胞遗传学检测,.,66,常见血液病的血液学特征,贫血(anemia) 白血病(leukemia) 骨髓增生异常综合症(myelodysplastic syndrome) 多发性骨髓瘤(multiple myeloma),.,67,缺铁性贫血(iron deficiency anemia),血象变化,.,68,缺铁性贫血(iron deficiency anemia),血象变化,红细胞中央苍白区明显扩大而呈环状,.,69,缺铁性贫血(iron deficiency anemia),骨髓象变化,.,70,缺铁性贫血(iron deficiency anemia),红细胞常30%，使G:E降低。以中幼及晚幼红细胞为主，严重时，中幼红较晚幼红细胞更多,骨髓象变化,.,71,缺铁性贫血(iron deficiency anemia),左图为铁染色（-），右图为铁染色（+）,骨髓铁染色,.,72,溶血性贫血 (hemolytic anemia),血象改变,.,73,溶血性贫血 (hemolytic anemia),.,74,溶血性贫血 (hemolytic anemia),.,75,溶血性贫血 (hemolytic anemia),骨髓象改变,.,76,溶血性贫血 (hemolytic anemia),.,77,再生障碍性贫血(aplastic anemia),急性再障血象改变,.,78,再生障碍性贫血(aplastic anemia),.,79,再生障碍性贫血(aplastic anemia),.,80,再生障碍性贫血(aplastic anemia),急性再障骨髓象改变,.,81,再障骨髓活检 Biopsy of AA,.,82,再生障碍性贫血(aplastic anemia),慢性再障血象改变,.,83,再生障碍性贫血(aplastic anemia),慢性再障骨髓象改变,.,84,白血病(leukemia),急性白血病血象改变,.,85,白血病(leukemia),急性白血病骨髓象改变,*FAB分型，WHO分型以20%ANC为标准,.,86,白血病(leukemia),急性白血病分型,急性淋巴细胞白血病（acute lymphocytic leukemia, ALL）L1型、L2型、L3型急性髓细胞白血病（acute myelicytic leukemia, AML）M0型、M1型、M2型、M3型、M4型、 M5型、 M6型、 M7型,.,87,白血病(leukemia),急性淋巴细胞白血病（ALL-L1, L2, L3）,.,88,白血病(leukemia),急性髓细胞白血病（AML-M0 &M1）,.,89,急性白血病免疫表型,Lin P,et al.Am J Clin Pathol, 2004;121:402-407,.,90,急性白血病细胞遗传学检测,【1】 Wang Z Y and Chen Z. BLOOD, 2008; 111( 5): 2505-2515 【2】Falini B, et al. Blood, 1997; 90(10 ): 4046-4053 【3】J Gabert, et al. Leukemia,2003; 17: 2318-2357,.,91,白血病(leukemia),慢性粒细胞性白血病(chronic myelocytic leukemia)血象,.,92,白血病(leukemia),慢性粒细胞性白血病(chronic myelocytic leukemia)骨髓象,.,93,白血病(leukemia),慢性粒细胞性白血病(chronic myelocytic leukemia)血象,.,94,白血病(leukemia),慢性粒细胞性白血病(chronic myelocytic leukemia)遗传学,.,95,骨髓增生异常综合症 (myelodysplastic syndrome),血象改变,.,96,骨髓增生异常综合症 (myelodysplastic syndrome),骨髓象改变,.,97,骨髓增生异常综合症 (myelodysplastic syndrome),骨髓象改变,.,98,骨髓增生异常综合症 (myelodysplastic syndrome),骨髓象改变,.,99,骨髓增生异常综合症 (myelodysplastic syndrome),骨髓象改变,.,100,多发性骨髓瘤(multiple myeloma),血象改变,.,101,多发性骨髓瘤(multiple myeloma),血象改变,.,102,多发性骨髓瘤(multiple myeloma),骨髓象改变,.,103,本课件中部分图片摘选自ASH Image Bank，仅作为授课使用！,Thank you!,