四血型鉴定和交叉配血中常见问题分析和处理PPT课件

,血型鉴定和交叉配血 中常见问题分析和处理,1,2,血型相容性检测,受血者和供血者AB0血型是否相容 受血者和供血者RhD血型是否相容 主次侧交叉配血是否相容 受血者血清中是否有临床有意义的意外抗体,第一部分,3,ABO正反定型不符的原因分析和处理,第二部分,4,原因,一、实验者操作技术的错误 二、红细胞标本问题 三、血清标本的问题,5,原因,一、实验者操作技术错误未加入抗体或血清未识别溶血血清与红细胞比例不当离心速度、时间不够使用失效或错误试剂实验结果记录、解释错误,1.假阴性结果,6,原因,离心速度过大、时间过长使用了受到细菌污染的试剂试验器皿不干净实验结果记录、解释错误,2.假阳性结果,7,二、红细胞标本问题,患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型红细胞,原因,8,二、红细胞标本问题,某些ABO基因变异的个体或ABO亚型红细胞，一些白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原减弱，应用抗A、抗B试剂未能出现预期的凝集反应,原因,9,二、红细胞标本问题,红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞或Tn/T多凝集红细胞，人血清抗A、抗B试剂可能与这些异常的红细胞反应,原因,10,二、红细胞标本问题,使用未洗涤的红细胞标本，其表面黏附的血浆或血清中含针对抗A、抗B试剂中染色剂或其他成分的抗体，出现假阳性反应,原因,11,二、红细胞标本问题,患者血清中高活性、高浓度冷自身抗体严重致敏（包被）自身红细胞，以至自发地发生凝集，而不是试剂的特异性免疫反应所致 红细胞表面包被IgG类抗体,原因,12,三、血清标本的问题,小的纤维蛋白凝集的红细胞凝块被误认为是血液凝集，如使用血浆标本或未完全去除纤维蛋白的血清标本时。,原因,13,三、血清标本的问题,免疫抑制疾病患者血清中ABO抗体减少或消失。老年人ABO抗体减弱 4-6月龄内婴儿血清中ABO抗体未产生或很弱，一般只做正定型,原因,14,三、血清标本的问题,血清中不正常浓度和比例的蛋白质成分或高分子蛋白增多可引起非特异凝集，如缗钱状红细胞的非特异凝集。 血清中含抗A、抗B以外的其他红细胞抗体，如抗M、抗I等。 患者接受了ABO血型不同的骨髓移植,原因,15,三、血清标本的问题,患者血清中含有针对红细胞保护剂的抗体 大量C 1分子由于异常高效价的补体结合抗体抗A、抗B作用，结合到红细胞膜上，遮蔽了A、B抗原位点，不发生凝集,原因,16,基本程序,1.重新采集标本，以避免采集、标记、污染等错误 2.查询患者既往病史、输血史、用药史、骨髓移植史 3.彻底洗涤标本或试剂红细胞 4.应用抗AB、抗A1、或抗H检测红细胞 5.分析抗筛结果，确定结果是否受同种异型或自身冷抗体干扰 6.室温孵育30min后，离心观察结果，以检测弱的抗原抗体反应 7.用自身红细胞对照，以确定自身抗体的干扰,分析和处理,17,一、 抗原表达减弱所致的ABO正反定不符 二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符 三、 意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,分析和处理,ABO正反定不符的分类,18,一、抗原表达减弱所致的ABO正反定不符,血型抗原表达减弱的常见原因 ABO亚型红细胞 白血病或其他恶性疾病患者的红细胞ABO抗原太弱，应用抗A、抗B试剂未能出现预期的凝集反应 新生儿,分析和处理,19,抗原表达减弱所致ABO正反定不符的处理 将抗A、抗B和抗A，B试剂与洗涤过的红细胞在室温或4孵育30min，以增强抗原、抗体的结合 用木瓜酶、无花果酶和菠萝蛋白酶处理红细胞，以增强抗原、抗体的结合 应用抗AB、抗A1、或抗H检测红细胞,分析和处理,一、抗原表达减弱所致的ABO正反定不符,20,用人血清抗A、抗B进行吸收放散试验，检测弱A、B抗原，但不是所有单克隆抗体试剂都适宜做吸收放散试验，单克隆抗A、抗B必须经过系统验证，且同时要做O型血吸收放散试验作对照 检测唾液中A、B和H血型抗原物质,分析和处理,21, 获得性B红细胞 获得性类A抗原 混合视野凝集 抗体包被红细胞,分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符, 引起抗-A、抗-B血清意外反应的因素,22,获得性B红细胞(特征) 常出现在有肠道细菌进入血循环的疾病，也可发生在正常人 通常只有A 型人能出现获得性B抗原 常伴有T和T n多凝集红细胞出现(细菌感染时) 自身抗B不与自身获得性B抗原反应(无自凝现象),分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,23,获得性B红细胞(鉴定) 调整人血清抗B试剂pH至6.0时，即不与获得性B细胞反应 分泌型者唾液中无B血型物质 乙酸酐处理能明显减弱其反应，但正常B细胞不受影响,分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,24,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,获得性类A抗原 造血干细胞的体细胞突变可造成部分红细胞持续性Tn抗原激活，类同A抗原 Tn和T一样属隐蔽性抗原,激活暴露后与所有血型的血清和人血清血型抗体出现凝集反应(全凝后多凝) 蛋白酶能降解Tn分子，消除与抗A凝集反应性，而正常A抗原不受影响,也可通过AB血清证实,分析和处理,25,混合视野凝集 非O型人近期输用O型血 骨髓移植后 A3细胞与抗A呈典型的混合视野凝集现象 单合子的镶嵌红细胞、双合子的交移体红细胞,分析和处理,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,26,抗体包被红细胞 患HDN婴儿、存在自身免疫或同种异体免疫的成人，其红细胞严重包被IgG抗体分子 与含一定蛋白质浓度的试剂（抗D、抗A、抗B）产生凝集 45 放散后，抗体解离，即可准确定型,二、抗-A、抗-B血清的意外反应所致的ABO正反定不符,分析和处理,27,抗体太弱或消失 非正常高浓度的抗A、抗B可引起前带现象 A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗A1 患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因，可发生类似凝集现象，如缗钱状凝集,分析和处理,引起意外血清学反应的因素,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,28,冷自身抗体，如抗I、抗IH、抗IA等 自身免疫性温型抗体 同种抗体/意外抗体,分析和处理,引起意外血清学反应的因素,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符,29,抗体太弱或消失如新生儿、老年人、免疫抑制患者，应注意患者的年龄和诊断 非正常高浓度的抗A、抗B可引起前带现象，导致假阴性,将血清稀释或用EDTA（2.5）处理可消除 A2、A2B或其他ABO亚型人血清中可能有抗A1, 抗A1只凝集A1型红细胞而不凝集A2、O型红细胞,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,30,患者血浆蛋白浓度过高或静脉输用了大量大分子药物等原因，可发生类似凝集现象，如缗钱状凝集将血清用生理盐水稀释3倍或用盐水替换技术可消除,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,31,冷自身抗体，如抗I、抗IH、抗IA等(自凝)a.所有试剂及细胞37孵育， 37下判读结果b.将冷自身抗体吸收c.将血清用0.01mol/L DTT处理和再定型,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,32,自身免疫性温型抗体 自身免疫性溶血性贫血病人血清中可有温型自身抗体 37反应比室温强 血清能凝集自身和其他各型红细胞 若红细胞上吸附自这种自身抗体，在自身或他人血清中均可出现凝集,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,33,自身免疫性温型抗体 正定被误认为AB型，反定被误认为O型用递增温度（22，37，45）洗涤红细胞后再做血型鉴定,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,34,同种抗体/意外抗体室温下抗-P、抗-M、抗E等，可能出现意外反应，干扰ABO血型鉴定 抗体特异性抗体鉴定，选择抗原阴性的红细胞做反定,三、意外的血清学反应所致的ABO正反定不符及其处理,35,多发性骨髓瘤致ABO血型鉴定困难1例,应用举例,36,多发性骨髓瘤（MM）：一种恶性浆细胞疾病，大量分泌异常的单克隆免疫球蛋白(M 蛋白) ,影响红细胞表面负电荷状态,血清蛋白浓度和比例异常,A/G比例失调,红细胞呈缗钱状非特异性聚集,给血型鉴定带来一定的困难。,37,病情简介,患者，女，38岁，因骨痛、贫血 2个月入院；Hb 65 g/L ,WBC 6.4 109 / L,PL T 90 109 / L, 尿本周蛋白阳性,BUN、Cr 均异常；骨髓象示:浆细胞37% 。诊断：多发性骨髓瘤。有既往输血史。,38,血型血清学检查,正定： A型，RhD（） 反定： O型 直抗： （） 抗筛： （）,39,处理,1.吸收试验,6次洗涤后的患者压积红细胞 等量的抗A、抗B血清（1:128）,4 1h,离心，取上清，测吸收液的抗A、抗B效价,抗A降低明显，抗B 1：128,40,吸收后的患者RBC用NS洗涤6次等量的NS,56 1015min,放散液与5标准 A、B RBC反应,Ac:+ Bc: -,彻底洗涤,吸收放散试验证明：患者RBC上有A抗原，无B抗原,为A型,2.放散试验,41,3.将患者血清用O型标准RBC吸收,等份血清等份O细胞 振荡,室温 1530min,离心，取上清，转移到另一等份O细胞中,吸收后的血清与标准A、B红细胞反应,Ac: - Bc:+,患者血清中有抗-B，无抗-A,42,患者血型最终确定为A型 RhD（），输注2U 经过筛选的A型悬浮RBC后，未见任何不良反应,43,交叉配血试验中常见问题分析和处理,第三部分,44,交叉配血原则,除非极为紧急情况，输血前患者与献血者必须进行交叉配血 受血者血清中无即刻或迟发性地凝集和(或)溶解所输入的红细胞的抗体 献血者血清中无即刻或迟发性地凝集和(或)溶解受血者红细胞的抗体,45,方法,盐水介质交叉配血检测不完全抗体的交叉配血,46,盐水介质交叉配血只能检出IgM类抗体（主为ABO血型系统抗体），无法检出IgG，具有很大的危险性，只能在受血者血清中不含临床有意义抗体的情况下进行。,47,检测不完全抗体的交叉配血临床最常见的迟发型输血反应ABO系统以外的其他血型(如Rh）的IgG类抗体导致的血型不相容 有输血史、妊娠史或血清中有意外抗体的患者必须进行不完全抗体的交叉配血试验 包括抗人球蛋白法、蛋白酶法、促凝剂法等,48,抗人球蛋白法鉴定不完全抗体最可靠的方法，传统的抗人球法不能成 为临床输血的常规检验。1986年,Lapierre发明的微柱 凝胶抗球蛋白试验准确、可靠、不需洗涤，可方便的应 用于抗体筛检和交叉配血试验,49,交叉配血不相容的原因及解决办法,一、血型鉴定错误：受血者、献血者红细胞ABO血型不相容，出现问题最多的是，其次才是技术错误。 复查血型二、患者存在冷反应自身抗体：采用自身对照和37 水浴以及递增盐水温度洗涤患者红细胞等方法排除非特异性凝集的干扰,责任错误,50,交叉配血不相容的原因及解决办法,三、患者存在温反应自身抗体：采用吸收放散试验后取患者的红细胞与血清和同型的洗涤红细胞进行交叉配血。,51,交叉配血不相容的原因及解决办法,四、血清蛋白紊乱及白球蛋白比例倒置引起的假凝集：如多发性骨髓瘤、肺癌、肝癌患者等。多表现为主侧凝集,52,交叉配血不相容的原因及解决办法,五、ABO血型以外的其它血型系统引起的交叉配血不合：常发生于有输血史、妊娠史的患者，产生主侧凝集。如抗D、抗E、抗C、抗c、抗I、抗e和抗Fyb等，用经筛选的不含相应抗原的血液进行交叉配血即可消除。,53,交叉配血不相容的原因及解决办法,六、献血者红细胞DAT阳性：大约万分之一健康人包被了IgG或补体的红细胞，不应输用此类细胞。,54,交叉配血不相容的原因及解决办法,七、献血者红细胞是多凝集红细胞：正常人血清中可含有非红细胞刺激而产生的自然发生的抗体，如抗T、抗Tn等。应筛选低水平抗T、抗Tn的血液,55,意外抗体筛选的意义和方法,第四部分,56,是指除ABO血型系统抗体以外的其他抗体，如抗D、抗E等。主要经输血或妊娠等免疫刺激产生，人群检出率为0.32.0，是引起迟发性免疫反应的主要原因。,意外抗体,57,意外抗体,临床有意义抗体：引起新生儿溶血病、溶血性输血反应，或者使输入的红细胞存活期减少的、在37反应的同种异型抗体。,IAT阳性!,58,意外抗体,临床无意义抗体 室温或低温反应的抗体，但抗-Vel,抗-P等，在体内引起明显的红细胞破坏。,59,筛选方法 要求 1.选择敏感的技术检测出受血者血清中非常低水平的临床有意义抗体。 高度注意！即使受血者血清中抗体对输入的不相容红细胞抗原呈弱反应，但也能够发生快速的强的回忆反应，增加抗体产生，破坏红细胞,60,筛选方法要求 2. 每一试剂瓶中只能有一人份的试剂红细胞，不可将多人份红细胞混合，以避免红细胞混合后对弱抗原红细胞的稀释。 FDA对试剂红细胞抗原表达的要求：D,C,E,c,e,M,N,S,s,PI,Le, Lea, Leb,K,k,Fya, Fyb,Jka, Jkb.,61,筛选方法 实验方法 盐水直接凝集试验： 是最简单的血型血清学方法，紧急情况下可在室温下立即离心。可检出室温或低于室温反应的临床意义不大的抗体如抗M、抗N、抗P、抗Lea等,62,筛选方法 实验方法 抗球蛋白试验： 可检出绝大部分临床有意义的不完全抗体，抗球蛋白试剂要有多特异性抗球蛋白抗体，其中含有抗IgG和抗C3d。含抗补体的球蛋白也能够检出结合补体的无临床意义的冷抗体，如抗I、抗HI等,63,筛选方法 实验方法 其他试验:蛋白酶试验、聚乙二醇试验、LISS和微柱凝胶试验等各种试验都有其本身的特点，适用不同范围，实验室应根据自己的条件，建立实验室常规试验程序和规程,64,抗体特异性鉴定 血清标本，EDTA抗凝（避免补体体外致敏红细胞）血浆标本 病史：输血、妊娠、用药 试剂：谱细胞、增强介质，抗人球蛋白试剂 自身对照,65,抗体特异性鉴定 对谱细胞的要求 不少于8人份的O型红细胞 血型系统包括： Rh,Kell,Duffy,Kidd,P,Lewis,MNS 自身对照的意义 阴性：血清只与试剂红细胞反应，只有同种抗体存在 阳性：有自身抗体存在，或与同种抗体并存自身吸收后鉴定同种抗体！,66,抗体筛选的意义 发现临床有意义的抗体 减少溶血性输血反应的发生 有利于免疫溶血性疾病的诊断 有利于提前选择和准备相合的血液 确保临床输血安全、及时、有效,67,抗体筛选阴性，盐水介质交叉配血不相容 供、受血者ABO血型不相容 受血者A2或A2B亚型，血清中抗A1与供血者A1或AB型红细胞凝集 存在室温反应的同种抗体，如抗-M等 献血者是多凝红细胞，隐蔽抗原T、Tn等暴露,抗体筛选的意义,68,献血者红细胞DAT阳性 万分之一健康人红细胞表面包被IgG或补体，不应该输此类红细胞 抗体与低频抗原反应 人群1%血清中含有针对低频抗原的抗体 筛选细胞一般缺少低频抗原,抗体筛选的意义,抗体筛选阴性，检测不完全抗体的交叉配血不相容,69,抗体筛选阳性，交叉配血相容 自身抗-H O型红细胞含有大量H抗原，而A1、A1B含量很低。室温反应，37度无反应，无临床意义 献血者红细胞正好不含对应的抗原 抗-Lebh 只与O型Le(a-b+）反应，不与A1、A1B Le(a-b+）反应，室温反应，37度无反应，临床意义不大,抗体筛选的意义,70,抗体筛选阳性，交叉配血不相容 同种抗体存在，自身对照阴性 选择对应抗原阴性的血做交叉。如抗体是抗-M、抗N、抗-P1、抗-Lea等就无须确认对应抗原缺失，但需37度交叉配合,抗体筛选的意义,71,抗体筛选阳性，交叉配血不相容 同种抗体存在，自身对照阳性 近期（2-3月）接受过输血的患者体内的同种抗体可引起自身对照阳性 循环中的自身抗体可引起自身对照阳性 区别两者很重要（很难），因选择红细胞程序不同 可用对应抗原阳性的细胞做吸收放散实验来证实同种抗体存在,抗体筛选的意义,72,抗体筛选阳性，交叉配血不相容 同种抗体存在，自身对照阳性 患者血清中的同种抗体可与输入的红细胞起反应 如是有意义的抗体，应选择抗原阴性红细胞输血 37度抗人球交叉配血相合是必须的,抗体筛选的意义,73,抗体筛选阳性，交叉配血不相容 冷反应自身抗体 强反应冷抗体（疾病）引起血型鉴定和交叉配血困难，临床意义不大 37度抗人球交叉配血相合是必须的,抗体筛选的意义,74,抗体筛选阳性，交叉配血不相容 温反应自身抗体 抗体筛选阳性，交叉配血不相容 必须分析血清中是否含有有意义的抗体 造成输血困难，可经放散后配血 37度抗人球交叉配血最低血清学不相容原则,抗体筛选的意义,75,病例讨论,病人，女，83岁，因消化道出血住院，有既往输血史（AB），入院后发现有自身溶血，Hb20g/L，DAT，IAT均阳性。 血型：见图，有自身凝集。 抗体筛选：凝聚胺（-）卡式法（4+） 抗体鉴定： 未完成 交叉配血： 10单位 AB，O洗涤红 结果： 不相合,76,弱D检测的意义和方法,第五部分,77,D抗原的分类,(1)D：正常D抗原 (2)弱D：抗原数量减少，表位基本完整,D抗原只是量的减少，无质的改变 (3)表位不完全型D（部分D）:抗原数量正常或增加，缺失部分表位 (4)表位不完全型弱D：抗原数目减少，缺失部分表位 (5)增强D：D抗原数量有很大程度的增加,78,临床输血中检测弱D的意义,献血者为弱D的意义：D抗原表达弱的红细胞可能刺激D阴性受血者产生抗体；受血者血清中已有抗D时，切不可输用弱D型红细胞，因为该受血者血清抗D会快速破坏输入的弱D型红细胞；弱D型献血者必须以D阳性者看待。,79,受血者为弱D的意义：如果弱D表型是由于该D抗原缺失1至多个D抗原表位所致，则该弱D表型受血者可能被输用的D阳性血所免疫，产生溶血性输血反应；弱D型受血者应视为Rh阴性，以保证临床输血安全。,80,弱D的检测方法,弱D型受血者应视为Rh阴性，临床应输注RH阴性血液,盐水法初筛（）,IAT 确 认,弱D,_,吸收放散试验,Del型,_,Rh阴性,81,谢 谢,82,