资源描述
细胞培养,细胞的传代方法,培养细胞的方法,主要讲2方面问题:,细胞计数,培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。血细胞计数器:手工计数细胞Coulter计数仪:人工计数,细胞计数:1、将血球计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上。2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。3、静置3分钟。,4、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算:细胞数/ml4大格细胞总数/410000注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。,根据细胞生长的恃点,传代方法有3种:1悬浮生长细胞传代离心法传代:离心(1000转/分)去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将上清培养液去除l2一23,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。,细胞传代方法,2半悬浮生长细胞传代(Hela细胞)此类细胞部分呈现贴壁生长现象,但贴壁不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来,进行传代。3贴壁生长细胞传代采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25的胰蛋白酶液。,贴壁生长细胞传代方法:,1吸光培养瓶中的培养液2加入1-2ml0.25的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准)静置2-10min(显微镜下动态监测)。3吸去胰蛋白酶液,加入培养液。4用吸管吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,形成细胞悬液。,5离心,细胞沉淀用培养液制成悬液。5吸取1/101/40细胞悬液,接种于新的培养瓶内。6加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。7将后者放入培养箱中培养。,谢谢!,
展开阅读全文