激素检测方法及注意事项.ppt

第六节激素检测方法及注意事项,常用激素检测方法及评价重视分析前干扰因素正确评价单次激素水平测定的意义,现在激素多用较灵敏特异的免疫法和HPLC、HPCE检测，但除受方法技术本身影响外，激素测定结果受多种分析前因素，如取样时间、方法、样品预处理等的影响大，在激素测定和结果解释中应特别注意。,(一)常用激素检测方法及评价常用激素检测方法有生物活性法、受体结合竞争法、HPLC、高效毛细管电泳法(HPCE)及免疫法。其中生物活性法一方面仅为半定量，另一方面受影响生物反应性因素的影响，现已趋于淘汰。受体结合竞争法因需复杂的受体制备，难以在临床常规检测中应用。HPLC和HPCE由于需特殊仪器及大多要进行样品预处理，亦未能在国内临床常规检测中推广。因此，免疫法为临床激素常规检测的主要方法。,激素免疫法检测根据标记物的性质、检测方法不同，有多种试剂盒可供选用。但对检测结果影响最大的是所用抗体的质量。前已述及，一些激素如TSH、FSH、LH、hCG间存在交叉抗原性；PRL在血液中存在有交叉免疫性但活性不同的单体和多聚体形式；一些激素的代谢物及药物，亦可和激素有程度不等的交叉免疫反应性。同一样本用抗体质量不同的试剂盒检测，将有较大差异。此亦是有关激素参考值各家报告差别大，较难统一的主要原因。因此，最好能坚持使用质量可靠的同一种试剂盒，并建立以该试剂盒测定的参考值。,(二)重视分析前干扰因素多数激素在安静状态和应激反应时分泌量差异巨大，如E和NE仅由卧位变为立位，血浆浓度便可增加一倍以上。因此供激素测定的血样，一般都主张在空腹安静平卧状态，置人保留式取血导管半小时以上采集。以减小因活动、对疾病和静脉穿刺的恐惧等引起的分泌量剧变。生长激素可迅速被血液中的肽酶水解，E和NE可迅速被氧化破坏。因此，血样采集后应迅速低温分离血浆，必要时可加入肽酶抑制剂或抗氧化剂。而ACTH易被玻璃器皿吸附，从血样采集到分析都应避免接触。,(三)正确评价单次激素水平测定的意义不少激素分泌存在生理性昼夜节律及随生长发育阶段不同而改变，性激素在不同的发育阶段及女性月经周期的不同时相差别甚大。因此应根据取样时间所处的昼夜节律、发育阶段及月经周期时相，具体分析。对昼夜节律明显者，最好分别在同一天的高峰期和低谷期取样测定，观察其昼夜节律。而对GH等主要以脉冲式分泌的激素，单次测定结果实无多大意义，必需结合动态功能试验等做出诊断。对甲状腺激素、皮质醇、性激素等高血浆蛋白结合率的激素，最好直接测定游离激素浓度。若测定总激素水平，结果解释时要充分考虑各种影响其蛋白结合率生物化学检验广泛应用于内分泌疾病诊断、病情评估和疗效监控。,下丘脑-腺垂体-内分泌腺(细胞)激素系统的反馈调节，是内分泌的主要调控机制。多数激素并非每日均衡分泌，而存在生理性节律(昼夜节律、不同发育阶段节律、月经周期节律等)或脉冲式分泌。甲状腺激素、糖皮质激素、性激素等和血浆蛋白结合率高，其血浆(清)总浓度受相应结合蛋白浓度影响大，但只有游离激素才能发挥包括对上述调节轴的反馈调控在内的作用。理解掌握各种激素的分泌调控机制、分泌方式和血浆运输特点，是正确解释激素及其结合蛋白和代谢物检测、动态功能试验的基础。,1由于生长激素(GH)每日仅数次脉冲式分泌方式和半寿期短的特点，GH紊乱疾病的生物化学诊断，首选检测项目不是GH，而是半寿期长并依赖GH生成的作用介导物IGF-1或其结合蛋白IGFB-3。仅GH异常无多大意义，只有同时至少两项相关动态功能试验异常方可做出诊断。,2甲状腺功能紊乱是内分泌病中最常见者。其首选筛查项目是血清TSH测定，特别是新生儿尽早发现甲减及时治疗，避免呆小症发生，意义重大。确诊甲状腺功能紊乱的种类、严重程度及疗效监控，可同时测定血浆(清)甲状腺激素。由于甲状腺激素高血浆蛋白结合特点，甲状腺激素测定包括TT4、TT3、FT3、FT4，随着检测技术的可靠性提高，推荐将FT3、FT4，尤其是FT3作为甲状腺激素测定常规项目。,多数甲状腺功能紊乱都有自身免疫机制参与，甲状腺自身抗体检测在国内较普及。但这些自身抗体多缺乏特异性，亦见于部分正常人尤其是老年人、其他自身免疫性内分泌病者，尚有部分自身免疫性甲状腺炎患者不能检测出。因此，在甲状腺功能紊乱的诊断上，甲状腺自身抗体检测仅有助于自身免疫性甲状腺炎的诊断，而不能说明甲状腺功能有无紊乱及种类。,3肾上腺由皮质和髓质两个独立的内分泌腺组成。肾上腺皮质功能紊乱诊断的首选项目是血浆(清)总皮质醇、唾液及尿游离皮质醇测定。若能同肘检测血浆ACTH及进行必要的动态功能试验，则有助于病变部位及性质判断。,尿17-OHCS、17-KS测定因干扰因素多，诊断效率较低，已趋于淘汰。嗜铬细胞瘤是肾上腺髓质的主要病变，其临床生物化学检验首选血浆肾上腺素和去甲肾上腺素测定。尿中该两种激素代谢物3-甲氧-4-羟杏仁酸检测因干扰因素多，特异性差，已较少使用。由于嗜铬细胞瘤的激素释放可为间发性，必要时可进行高血糖素刺激试验协助诊断。,ACTH和肾上腺素、去甲肾上腺素测定只能用血浆作样本，严格按照前面介绍的方法采集血样和迅速低温分离血浆，尽快检测，减少分析前干扰因素，对保证结果的准确可靠极为重要。,4内分泌性性功能异常的诊断很大程度上依靠生物化学检验。单纯检测血浆(清)性激素水平提供的信息有限，同时检测性激素和促性腺激素(FSH、LH)则对性激素紊乱的有无及种类做出初步诊断。但由于性发育及女性月经周期存在较大的个体差异，对性激素和促性腺激素异常者，应通过兴奋或抑制动态功能试验，准确了解性腺及其调节系统的功能状况，并协助病变部位和性质的确定。这在青春期延迟和性幼稚症的鉴别、男性青春期后性功能减退症及女性继发性闭经的病因诊断、治疗决策上，尤为重要。,小结,1.了解内分泌的概念、内分泌系统和神经系统的调节机制及有关内分泌紊乱性疾病的临床生化检查方法2熟悉主要内分泌激素的生理、生化功能及生化诊断3.掌握甲状腺激素、肾上腺激素的代谢、调节及生化诊断,