B淋巴细胞荧光标.ppt

B淋巴细胞荧光标记试验,2011级麻醉免疫学实验,组员：学号：,艾仕青1110550127马松1110550128黄科胜1110550129廖成群1110550130李倩1110650126廖莉1120550101马艳南1120550102,实验目的,1、掌握免疫荧光标记技术直接法的原理和操作方法；2、熟悉荧光显微镜的使用方法。,实验原理,B淋巴细胞表面携带的mIg，能与相应的特异性抗体结合，故可用荧光标记的抗Ig血清进行免疫荧光染色镜检。由于B细胞在分化过程中的每个阶段均具有mIg的标记，故该法可检出全部B淋巴细胞。每一个B淋巴细胞表面可携带不同类的Ig,分别用荧光标记的抗Ig单克隆抗体染色，则可鉴别带不同类Ig的B淋巴细胞。能与荧光标记体结合的细胞，在荧光显微镜下细胞膜可呈现荧光，即为mlg阳性细胞，也就是B淋巴细胞。同时用普通光源照明，计数该视野的淋巴细胞总数，根据发荧光和不发荧光细胞的计数，可算出B细胞的百分数。,实验材料,1、制作好的淋巴细胞抗原片2、PBS溶液3、FITC标记的羊抗人IgM4、37恒温箱、滴管、荧光显微镜、镊子,操作步骤,1、细胞片自低温取出后至室温平衡5min，然后滴加荧光抗体（抗人IgM-FITC）1滴，置湿盒，37恒温箱内保温3060min2、取出细胞片，以0.01mol/LpH7.4的PBS溶液洗涤3次，冷风吹干后置荧光显微镜下观察,