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高效液相色谱法测定胡萝卜素含量,一、实验目的二、实验原理三、实验仪器材料四、实验操作步骤五、实验结果六、实验思考题,实验指导,1、实验目的,1、理解高效液相色谱法的目的和意义；2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法；3、掌握高效液相色谱仪的操作。,2、实验原理,高效液相色谱仪的组成与工作主要流程如下图所示：,-胡萝卜素含量测定原理-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行检测，然后利用反相色谱法分析。,3、.实验仪器和材料,仪器：高效液相色谱仪紫外检测器等。试剂材料：-胡萝卜素；乙酸乙酯；正己烷；色谱甲醇；新鲜胡萝卜。,4、实验操作步骤：,（1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的-胡萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。,（2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。,色谱条件,色谱柱：C18柱；流动相：甲醇；流速：1.5ml/min；紫外检测波长：440nm；进样量：20微升。样品进样前需要用0.45微米的滤膜过滤，装入进样瓶中。,5、实验结果和计算,HPLC外标法定量式中m：10g(mL)样品中-胡萝卜素含量（mg）；m1：标样进样体积中-胡萝卜素含量（mg）；m2：样品称样质量（g或mL）；A1：标样峰面积值；A2：样品峰面积；V1：样品进样质量（L）；V2：样品定容体积（mL）。,实验注意事项,1、样品的预处理；2、流动相的过滤脱气处理；3、色谱条件的选择。,思考题：,1、高效液相色谱仪的组成与工作主要流程？2、高效液相色谱的特点？3、进行高效液相色谱仪检测-胡萝卜素时要对待测样品进行哪些预处理？4、色谱图中-胡萝卜素吸收峰峰高、峰面积与样品中-胡萝卜素浓度和纯度有何关系？,
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