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,两个核苷酸之间的_,作用 部位,携带目的基因进入 _,拼接DNA 片段，形成_,切割_ 和载体,作用,载体,DNA 连接酶,限制酶,目的基因,重组DNA,受体细胞,磷酸二酯键,质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒等,Ecoli DNA 连接酶、T4 DNA 连接酶,EcoR 限制酶 Sma 限制酶,常用类型,能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 有多个_ _ 具有特殊的_ _,Ecoli DNA 连接酶只能连接 _ T4 DNA 连接酶能连接_ _和平末端,识别双链DNA 分子的某种_ _ 在特定位点上切割,作用特点(条件),载体,DNA 连接酶,限制酶,特定核苷酸,序列,黏性末端,限制酶切割,位点,黏性末,端,标记基,因,目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在_ _作用下延伸,PCR技术扩增,以RNA为模板，在 作用下人工合成,反转录法,已知核苷酸序列的 ，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板,化学合成,人工合成,从自然界已有的物种中分离，如从_ 中获取,直接分离,具体操作,方法,基因文库,较小基因,逆转录酶,DNA聚合,酶,原核细胞,_,受精卵、体细胞,受体 细胞,_法(用Ca2处理),_技术,_法、 基因枪法、_ _法,常用 方法,微生物细胞,动物细胞,植物细胞,花粉,管通道,显微注射,感受态细胞,受精卵,农杆菌转化,过程,动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织,植物幼嫩部位,取材,动物细胞培养,植物组织培养,项目,蛋白质生物制品的生产 皮肤移植材料的培育 检测有毒物质 生理、病理、药理学的研究,植株快速繁殖 脱毒植株的培养 人工种子 生产药物、杀虫剂等 转基因植物的培育,应用,无菌、无毒 营养，血清等 温度和pH 气体环境：O2、CO2,无菌 营养 适宜条件,条件,新的细胞，不形成个体，不体现全能性,获得植株个体，可以体现全能性,结果,动物细胞培养,植物组织培养,项目,过程,细胞膜的_,细胞膜的 _、细胞的_,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,流动性,流动性,全能性,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能,克服了远缘杂交的_ _，获得杂种植株,意义,杂交细胞,杂种植株,结果,除物理法和化学法外还可以用_诱导,物理法：离心、电激、振动； 化学法：聚乙二醇等试剂诱导,融合方法,_或胶原蛋白酶,纤维素酶和_,相关酶,动物细胞融合,植物体细胞杂交,果胶酶,胰蛋白酶,灭活的病毒,不亲,和性,
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