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,第二讲 微生物的利用,课前自主学习,二、微生物的利用,课堂互动探究,1培养基的种类 (1)按物理状态分类,微生物的培养与应用,(2)按功能分类,2.消毒和灭菌的比较,3.微生物的营养,4.纯化大肠杆菌以及菌种的保藏 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)纯化大肠杆菌 原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。,方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)菌种的保藏 短期保存：固体斜面培养基上4 保存，菌种易被污染或产生变异。 长期保存：20 甘油管在冷冻箱中保藏。,特别提醒 平板冷凝后，培养皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的温度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发；又可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,1. (2013辽宁大连双基测试)下列是有关微生物的培养与应用的问题，请分析回答。 (1)如图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步_分散到培养基的表面。图中右手拿的器具称为_。,(2)分析下面培养基的配方；NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO47H2O、KCl、H2O。若用于培养纤维素分解菌，应加入_(物质)，为检测纤维素分解菌的存在与否，还应加入_染料。 (3)获得的菌种如果需要长期保存，可以采用_的方法。 答案：(1)平板划线 稀释 接种环 (2)纤维素粉 刚果红 (3)甘油管藏,1筛选菌株的原理 微生物的选择培养：在选择培养基的配方中，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 2统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法： 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。,土壤中分解尿素的细菌的分离与计算,方法：用计数板计算。 缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法)： 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。,操作： a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。 计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。,3实验流程,特别提醒 由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。,2自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 实验步骤： (1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 (2)为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。,(3)适宜温度下培养。 结果分析： (1)测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是_，其理由是_。,A一个平板，统计的菌落数是230 B两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240 C三个平板，统计的菌落数分别是210、50和520，取平均值260 D四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250,(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是_(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)。 (3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_。,解析：本题考查微生物的计数方法，可从两种接种方法的优缺点和统计菌落数目时应注意的问题入手解答该题。为了得到更加准确的结果，应用稀释涂布平板法接种样品。(1)选取多个菌落数相差不大的平板计数，取其平均值。(2)2340.11052.34108。(3)因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。,答案：实验步骤：(2)稀释涂布平板 结果分析：(1)D 在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否相当 (2)2.34108 (3)多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落,1筛选原理,分解纤维素的微生物的分离,3两种刚果红染色法的比较,3如图为分离并统计分解纤维素的微生物的实验流程，据此回答有关问题：,(1)要从富含纤维素的环境中分离纤维素分解菌，从高温热泉中寻找耐热菌，这说明_。 (2)接种微生物最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，本实验宜采用_法，原因是_。 (3)用稀释涂布平板法统计菌落数目时，最好选择菌落数在_间的平板进行计数。若统计出在一稀释倍数为105的平板上的平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2 mL，则每克样品中的菌落数为_。,答案：(1)根据目的菌株对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 (2)稀释涂布平板 平板划线法难以根据稀释体积计算每克样品中的细菌数 (3) 30300 1.5107个,1下列常用的无菌操作中错误的是( ) A无菌操作的目的是防止杂菌污染 B用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒 C实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭,解析：对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止瓶口的微生物污染培养基。对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消灭其中的微生物，用酒精擦拭不能达到目的。 答案：D,2平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( ) A都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作 C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 D都会在培养基表面形成单个的菌落,解析：平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个的菌落。 答案：D,3(2013山东青岛调研)在农田土壤的表层自生固氮菌较多，用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( ) 加抗生素 不加抗生素 加氮素 不加氮素 加葡萄糖 不加葡萄糖 37恒温箱中培养 2830温度下培养 A B C D,解析：细菌对抗生素敏感，故培养基中应不加抗生素；自生固氮菌有固氮功能，故培养基中不需要加氮素，自生固氮菌是异养的，应该加葡萄糖，其生长繁殖的适宜温度是2830。 答案：C,4(2011重庆高考)下列有关细菌培养的叙述，正确的是( ) A在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌 B在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长 C向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长 D在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动,解析：单个菌落中只含有一种细菌；青霉素能抑制细菌生长，而对真菌没有影响；破伤风杆菌是厌氧型细菌，通入氧气会抑制其生长。 答案：D,5关于灭菌和消毒的不正确理解是( ) A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B消毒和灭菌实质上是完全相同的 C接种环用灼烧法灭菌 D常用灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法,解析：消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 答案：B,6制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的下列操作中，不正确的是( ) A操作流程是计算、称量、溶化、灭菌和倒平板 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同倒入烧杯中再加水、去纸 C灭菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加2%琼脂，并使其溶解 D将培养基冷却到约50时，在酒精灯火焰附近倒平板,解析：琼脂加入到牛肉膏蛋白胨溶液中，溶化后再灭菌。 答案：C,7. (2013无锡模拟)如右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是( ) A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B划线操作须在火焰上进行 C在5区域中才可以得到所需菌落 D在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌,解析：在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。 答案：D,8(2013江苏高考)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是( ) A培养基分装到培养皿后进行灭菌 B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D培养过程中每隔一周观察一次,解析：微生物分离中培养基的制备应是先灭菌再倒平板，A项错误；每一次划线前都要灼烧接种环，以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，B项正确；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件，C项错误；培养过程中观察的间隔时间不能太长，适宜条件下一般不超过24 h，D项错误。 答案：B,9(2013泰州模拟)下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是( ) A微生物培养前，需对培养基进行消毒 B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法 C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度 D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源,解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法而一般不用活菌计数；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落数在30300间的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。 答案：A,10(2013新课标全国卷)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： (1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_ 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。,(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的_。,(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。 解析：(1)实验室中对微生物纯化培养时，常用的接种方法有划线法和稀释涂布法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖，常用涂布器把稀释的菌液均匀涂满整个平板。,(3)对某种抗生素越敏感的致病菌，在该抗生素存在的范围内，越不易生存，形成的透明圈就越大。但是，如果在透明圈中还有菌落生存，则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知，在应用时，要想杀死某致病菌，就得选择能使该致病菌大量死亡，即产生的透明圈大的那种抗生素。 答案：(1)划线 稀释涂布(或涂布) (2)涂布 (3)敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A的弱 耐药菌 (4)A,11急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题： (1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为_。在下面所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是_。,(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？_。 (3)如分别取0.1 mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为_。 (4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？_。,解析：纯化大肠杆菌的方法稀释涂布平板法和平板划线法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。,答案：(1)稀释涂布平板法 D (2)需要 因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格) (3)5.6108 (4)通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37 恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌,
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