62核黄素磷酸钠征求意见稿标准文本.doc

中华人民共和国卫生部 发布中华人民共和国国家标准-实施2011-发布食品安全国家标准食品添加剂 核黄素5-磷酸钠（征求意见稿）GB 食品安全国家标准食品添加剂 核黄素5-磷酸钠1 范围本标准适用于以核黄素为原料，经磷酸化、中和、精制等步骤生产的食品添加剂核黄素5-磷酸钠。2 分子式和相对分子质量2.1 分子式C17H20N4NaO9P2H2O2.2 相对分子质量514.36（按2007年国际相对原子质量）3 技术要求3.1 感官要求：应符合表1 的规定。表1 感官要求项 目要 求检验方法色泽橙黄色取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和状态。状态结晶性粉末3.2 理化指标：应符合表2的规定。项 目指 标检验方法核黄素（C17H20N4O6），w/%73.079.0附录A中A.3比旋光度，/（）+37.0+42.0附录A中A.4pH5.06.5附录A中A.5干燥减量，w/%7.5附录A中A.6灼烧残渣，w/%25.0附录A中A.7游离磷酸，w/%1.0附录A中A.8游离核黄素，w/%6.0附录A中A.9核黄素二磷酸盐，w/%6.0附录A中A.9铅（Pb）/（mg/kg）2.0GB 5009.12表2 理化指标附录A检验方法 A.1 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 66822008中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2 鉴别试验A.2.1 试剂和材料A.2.1.1 盐酸溶液：取浓盐酸1mL，用水稀释至3mL。A.2.1.2 氢氧化钠溶液：取氢氧化钠1g，加水溶解并稀释至25mL。A.2.2 鉴别方法称取约1.5 mg试样，加100mL水溶解，此为试样液。试样液在透射光下显淡黄绿色，并有强烈的黄绿色荧光。取试样液25mL，加入0.5mL盐酸溶液，荧光消失；另取试样液25mL，加入0.1mL氢氧化钠溶液，荧光消失。A.3 核黄素（C17H20N4O6）的测定A.3.1 试剂和材料A.3.1.1 冰乙酸。A.3.1.2 乙酸钠溶液：14 g/L。A.3.2 仪器和设备分光光度计。A.3.3 分析步骤避光操作。称取约100 mg样品，精确至0.0001 g，置于500mL容量瓶中，加1mL冰乙酸和75mL水。待样品溶解后，用水稀释至刻度，摇匀。精密量取10mL，置于100mL容量瓶中，加入7mL乙酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇匀。以水作空白，用光程为1cm的比色杯，在444 nm波长处测定样品溶液的吸光度。核黄素的吸光系数（E1%1cm）以328计。A.3.4 结果计算核黄素含量以核黄素的质量分数w0计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：（A.1）式中：A样品溶液的吸光度值；m样品质量的数值，单位为克（g）；w1实测样品干燥减量的数值，%。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0 %。A.4 比旋光度的测定A.4.1 试剂和材料盐酸溶液：取盐酸27.0 mL，用水稀释、定容至50 mL。A.4.2 仪器和设备旋光仪，精度0.01。A.4.3 分析步骤避光操作。称取0.75 g（以无水品计）样品，精确至0.0001 g，置于50mL容量瓶中，加盐酸溶液溶解并稀释至刻度，在15min内、（251）条件下用旋光仪测定比旋光度。A.4.4 结果计算比旋光度按公式（A.2）计算： （A.2）式中：观察到的样品溶液的旋光度值；c样品溶液浓度的数值，单位为克每毫升（g/mL）；L旋光管长度的数值，单位为分米（dm）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0 %。A.5 pH的测定A.5.1 仪器和设备酸度计，精度0.01。A.5.2 分析步骤称取1.0g样品，精确至0.0001g，置于200mL清洁干燥的烧杯中，加水100mL溶解，在20 下用酸度计测定其pH。A.5.3 结果计算实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0 %。A.6 干燥减量的测定A.6.1 仪器和设备恒温真空干燥箱。A.6.2 分析步骤称取约2 g样品，精确至0.0001 g，置于已干燥至恒重的称量瓶中，于（1001）、0.01MPa下干燥5 h，然后置于干燥器中冷却至室温，称重。A.6.3 结果计算干燥减量以质量分数w1计，数值以%表示，按公式（A.3）计算：（A.3）式中：m1干燥前样品和称量瓶质量的数值，单位为克（g）；m2干燥后样品和称量瓶质量的数值，单位为克（g）；m3干燥前样品质量的数值，单位为克（g）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0 %。A.7 灼烧残渣的测定A.7.1 仪器和设备高温炉。A.7.2 分析步骤称取约1g样品，精确至0.001g，置于已在600700下灼烧至恒重的坩埚中，缓缓加热至样品完全碳化。将碳化的样品冷却，用0.5mL的硫酸润湿残渣，继续加热至硫酸蒸汽逸尽，并在600700的高温炉中灼烧至恒重。A.7.3 结果计算灼烧残渣以质量分数w2计，数值以%表示，按公式（A.4）计算：（A.4）式中：m4残渣和空坩埚质量的数值，单位为克（g）；m5空坩埚质量的数值，单位为克（g）；m6样品质量的数值，单位为克（g）。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.0 %。A.8 游离磷酸的测定A.8.1 试剂和材料A.8.1.1 标准磷酸盐溶液：准确称取105 干燥2 h的磷酸二氢钾0.22g，置于1000mL容量瓶中，加适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀，临用时再稀释5倍。A.8.1.2 钼酸铵 (NH4)6Mo7O244H2O 溶液：70g/L。A.8.1.3 硫酸溶液：3.75mol/L。A.8.1.4 酸性钼酸铵溶液：将25mL钼酸铵溶液用水稀释至200mL，然后缓缓加入25mL硫酸溶液，摇匀。A.8.1.5 硫酸亚铁溶液：准确称取10.0g的硫酸亚铁，置于100mL容量瓶中，加适量的水和2mL的硫酸溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀。A.8.2 仪器和设备紫外可见分光光度计。A.8.3 分析步骤A.8.3.1 样品溶液的制备准确称取300.0 mg样品（按无水品计），置于100mL容量瓶中，加适量的水溶解，并稀释至刻度，摇匀。A.8.3.2 测定准确量取标准磷酸盐溶液和样品溶液各10.0mL，分别置于50mL的锥形瓶中，然后向各锥形瓶中加入10.0mL酸性钼酸盐溶液和5mL硫酸亚铁溶液，混匀，以10.0mL水、10.0mL酸性钼酸盐溶液和5mL硫酸亚铁溶液组成的混合液为空白，用光程为1cm的比色杯，在700 nm波长处测定各锥形瓶中溶液的吸光度。样品溶液的吸光度不得大于标准溶液的吸光度。A.8.4 结果计算实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.5 %。A.9 游离核黄素和核黄素二磷酸盐的测定A.9.1 试剂和材料A.9.1.1 KH2PO4溶液：0.054mol/L。A.9.1.2 甲醇：色谱纯。A.9.1.3 核黄素标准品：核黄素含量不低于99.0%（质量分数）。A.9.1.4 核黄素5-磷酸钠标准品：核黄素含量不低于74.0%（质量分数）。A.9.2 仪器和设备高效液相色谱仪，配荧光检测器（激发波长440 nm；发射波长470 nm）。A.9.3 参考色谱条件A.9.3.1 色谱柱：C18柱，3.9mm300mm，或其他等效的色谱柱。A.9.3.2 流动相：按KH2PO4溶液甲醇=8515（体积比）配制，混合均匀后，用0.45m滤膜过滤，超声脱气后备用。A.9.3.3 柱温：室温。A.9.3.4 流动相流速: 2.0mL/min。A.9.3.5 进样量：100L。A.9.4 分析步骤A.9.4.1 系统适应性试验溶液的制备溶解100mg的核黄素5-磷酸钠标准品于水中，使其质量浓度为2.0mg/mL，加入等体积的流动相，混匀。吸取8mL，用流动相稀释至50mL，混匀备用。A.9.4.2 标准溶液的制备精密称取60.0mg核黄素标准品于250mL容量瓶中，小心加入1mL盐酸溶解，用水稀释至刻度，混匀。用移液管吸取4mL的核黄素溶液于100mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，混匀备用。A.9.4.3 样品溶液的制备精确称取100.0mg样品于100mL容量瓶中，加50mL水溶解，用流动相稀释至刻度，混匀。用移液管吸取8mL溶液于50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀备用。A.9.4.4 测定分别将等体积（约100L）的核黄素标准溶液、样品溶液和系统适应性试验溶液注入色谱柱中进行色谱分析。比较核黄素标准品与样品的图谱，确定峰响应值。通过与核黄素磷酸盐标准品的保留时间比较，确定样品的各色谱峰。核黄素5-磷酸的保留时间约2025 min，各色谱峰出峰顺序如表A.1所示，核黄素4-磷酸和核黄素5-磷酸峰之间的分离度R应大于1.0。表A.1 各色谱峰出峰顺序成分相对保留时间核黄素3,4-二磷酸核黄素3,5-二磷酸核黄素4,5-二磷酸核黄素3-磷酸核黄素4-磷酸核黄素5-磷酸核黄素0.230.390.580.700.871.001.63A.9.5 结果计算游离核黄素含量以游离核黄素的质量分数w3计，数值以%表示，按公式（A.5）计算：（A.5）核黄素二磷酸盐含量以核黄素二磷酸盐的质量分数w4计，数值以%表示，按公式（A.6）计算：（A.6）式中：ws标准溶液中核黄素浓度的数值，单位为毫克每毫升（mg/mL）；PF样品中游离核黄素的峰面积百分比；PS核黄素标准品核黄素的峰面积百分比；PD样品溶液中三种核黄素二磷酸盐的峰面积百分比的总和。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的1.5 %。_