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微生物与免疫学试验（六）,1,要求,讲解：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教平板：SS平板（肠道致病均和非致病均各一个）、双糖铁培养基（大肠、痢疾、伤寒、变形）、炭疽卷发样菌落； 其它示教：小生化反应（大肠、痢疾、伤寒、变形） 操作：肥达反应（注意标签贴试管上，不要贴到架子上） 录像：肠道杆菌,2,操作：肥达反应（试管凝集反应）,器材：试管6支/人，试管架1个/2人， 吸管1支/人，标签1个/人 已知： 伤寒H抗原、O抗原 （4人/组） 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检：病人血清（1：10稀释）,3,倍比稀释法 1 2 3 4 5 6 生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清 0.5（吹打） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5（弃） 菌液 0.5ml/管 ，从第6 1管加，振匀 水浴43度，2h 最终血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 稀释度 凝集强弱 效价 *吸管 桶，试管 锅, 标签贴在试管上。,4,结果判断,以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O 达到1：80，H达到1：160 H甲（PA）或H乙（PB）达到1：80或以上有诊断意义 结合当地流行病学史、病程和抗体消长的意义进行判断。,5,6,7,肠道杆菌的鉴定,8,大肠杆菌,伤寒杆菌,变形杆菌,痢疾杆菌,9,SS培养基,胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红,抑制杂菌生长,被非致病菌分解产酸,被致病菌分解产碱,酸：红 碱：黄,10,Shigella-Salmonella medium,菌落红色乳糖发酵阳性，非致病菌 菌落无色乳糖发酵阴性， 致病菌,11,双糖铁培养基,下层 上层,葡萄糖 半固体 酚红 乳糖 硫酸亚铁,12,生化反应表,13,霍乱弧菌,14,炭疽杆菌,致病菌中最大的G粗大杆菌 ,两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中央,15,培养: 3035，在普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察边缘呈卷发状,炭疽杆菌培养基,16,厌氧菌,17,1、破伤风：G；芽胞位于菌体顶端，大于菌体， 使细菌呈鼓槌状；菌体细长，有周身鞭毛,18,厌氧血平板上的羽毛状菌落,19,庖肉培养基,成分 牛肉浸液 1000mL 蛋白胨 30g 酵母膏 5g 磷酸二氢钠 5g 葡萄糖 3g 可溶性淀粉 2g 碎肉渣适量 pH7.8 制法 1 称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。 2 碎肉渣经水洗后晾至半干，分装15mm150mm试管约23cm高，每管加入还原铁粉0.10.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.30.4cm。121高压灭菌15min。,20,庖肉培养基,破伤风梭菌培养基,破伤风痉挛,21,2、产气荚膜梭菌：两端几乎平切的G粗大杆菌；芽胞位于 次极端，呈椭圆形，不大于菌体；在体内有明 显的荚膜；无鞭毛,22,生化反应： 血琼脂平板上，双层溶血环（、毒素），“靶样溶血”,血平板（双层溶血环）,23,代谢活跃 高层琼脂断裂试验 庖肉培养基：分解肉渣中的糖类，产酸产气，肉渣淡红色 牛乳培养基：可出现“汹涌发酵”（stormy fermentation）,24,Nagler反应（）,卵黄琼脂平板,25,庖肉培养基,牛乳培养基汹涌发酵,26,3、肉毒梭菌：G；芽胞呈椭圆形，粗于菌体，位于次极 端，使细胞呈汤匙状或网球拍状；有鞭毛，无荚膜。,肉毒梭菌,27,
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