DBS53 014-2013 食品安全地方标准 食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 高效液相色谱法.doc

DBS 53云南省食品安全地方标准DBS 53/ 0142013食品中对羟基苯甲酸酯类的测定高效液相色谱法2013 - 10 - 20发布2014 - 04 - 20实施云南省卫生厅发布DB53/ 0142013前言本标准为首次发布。3食品中对羟基苯甲酸酯类的测定 高效液相色谱法1 范围本标准适用于酱油、醋、果酱、糕点、腌制品、果酒及饮料等食品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。 本标准检出限：对羟基苯甲酸甲酯：1.8 mg/kg；对羟基苯甲酸乙酯：1.2 mg/kg；对羟基苯甲酸丙酯：0.9 mg/kg；对羟基苯甲酸丁酯：1.3 mg/kg。2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3 原理试样用乙醇超声波提取，取上清液过滤，以高效液相色谱法分离，二极管或紫外检测器检测，外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 甲醇（色谱纯）。4.2 乙酸铵（分析纯）。4.3 20 mmol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54 g乙酸铵（4.2）用水定容至1000 ml，过0.45m滤膜。4.4 无水乙醇（分析纯）。4.5 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯：99 %以上。4.6 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准储备溶液：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯各0.050 g于50 mL容量瓶中，用甲醇（4.1）稀释至刻度，该溶液每毫升相当于1 mg的对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。4.7 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯的标准工作溶液：将混合标准溶液用甲醇（4.1）依次稀释成1.0 g/ml、10.0 g/ml、25.0 g/ml、50.0 g/ml、100.0 g/ml的系列标准溶液，使用前配制。4.8 微孔针式滤膜：有机相，0.22 m。5 仪器和设备5.1 高效液相色谱仪：带可变波长紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2 超声波清洗器。6 分析步骤6.1 提取称取5.0 g（精确至0.01 g）试样于50 ml比色管中，加入15 ml乙醇（4.4），混匀，超声波清洗器提取10 min，冷却至室温后用乙醇（4.4）定容至50 ml刻度线，摇匀、静置、取上层液体经微孔滤膜（4.8）过滤后待测。6.2 色谱条件a) 色谱柱：C18柱，1504.6 mm（i.d），5 m，或性能相当者；b) 流动相：甲醇B（4.1）：20 mmol/L 乙酸铵溶液A（4.3）= 40 + 60（体积比）；c) 洗脱梯度见表1；表1 对羟基苯甲酸酯类的洗脱程序时间/min2.004.0012.0012.0115.00B%40606040stopd) 流速：1 ml/min；e) 柱温：35 ；f) 进样体积：10 l；g) 检测波长：256 nm。6.3 测定步骤在相同实验条件下，样液中待测物质的保留时间，与基质标准工作溶液的保留时间偏差在2 %之内；则可判定为样品中存在对应的待测物。将标准工作液（4.7）按照浓度由低到高的顺序进样测定，以各组分峰面积对其浓度绘制标准曲线。试样进样后，以各组分在256 nm波长下对应色谱峰的峰面积标准曲线定量。6.4 计算按照下式计算试样中各组分的含量：(1)式中：试样中某组分的含量，单位为mg/kg；c由标准曲线得到的试样中某组分的浓度，单位为g/ml；V试样溶液的体积，单位为ml；m试样质量，单位为g。7 精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10 %。AA附录A （资料性附录）4种对羟基苯甲酸酯类的标准品色谱图注： 出峰顺序依次为：对羟基苯甲酸甲酯；对羟基苯甲酸乙酯；对羟基苯甲酸丙酯；对羟基苯甲酸丁酯图A.1 4种对羟基苯甲酸酯类的标准品色谱图_