5 食品添加剂 辣椒橙.doc

食品添加剂 辣椒橙1 范围 本标准适用于以辣椒果皮及其制品为原料，经萃取、过滤、浓缩、脱辣椒素等工艺制成的食品添加剂辣椒橙。食品添加剂辣椒橙为橙色或橙红色油状液体。2 分子式和相对分子质量2.1 分子式辣椒红素：C40H56O3 辣椒玉红素：C40H56O42.2 相对分子质量辣椒红素：584.85 辣椒玉红素：600.85 3 技术要求应符合表1的规定。表1 技术要求项 目指 标检验方法类胡萝卜素总量，w/% 标称附录A中A.3辣椒总碱/g/mL符合声称附录A中A.4辣椒红素和辣椒玉红素，w/% 类胡萝卜素总量的30%附录A中A.5砷（以As计）/（mg/kg） 3.0附录A中A.6铅（Pb）/（mg/kg） 2.0附录A中A.7总有机溶剂残留量，w/% 0.005附录A中A.8附录A检验方法 A.1 一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 66822008规定的三级水。试验中所需标准溶液、杂质标准溶液、制剂及制品在没有注明其他规定时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603规定配制和标定。A.2 鉴别试验A.2.1 显色反应 在1滴试样中加2滴3滴三氯甲烷和1滴硫酸，溶液呈深蓝色。A.2.2 最大吸收样品溶解在丙酮中，在约462nm处有最大吸收峰。样品溶解在正己烷中，约在470nm处有最大吸收峰。A.2.3 高效液相色谱法通过测试，详见“辣椒红素和辣椒玉红素含量测定”。A.3 类胡萝卜素总量的测定A.3.1 方法提要采用分光光度计法测定辣椒橙中的类胡萝卜素在最大吸收波长处（约462nm）吸光度值，计算其含量。A.3.2 试剂和材料丙酮。A.3.3 仪器和设备A.3.3.1 分光光度计。A.3.3.2 比色皿：10mm。A.3.4 试样溶液的配制准确称取0.3g0.5g（精确至0.0002 g）辣椒橙加到100mL容量瓶中，加入丙酮摇动溶解，定容，静置2min。吸取该溶液1mL加入另外一个100mL容量瓶中，丙酮定容到刻度，充分摇动。A.3.5 分析步骤将辣椒橙试样溶液置于10mm比色皿中，在最大吸收波长处（约462nm）读取吸光度A。调整样品浓度，使吸光度在0.30.7之间。A.3.6 结果计算类胡萝卜素总量以计，数值以%表示，按式（A.1）计算： （A.1）式中：A 辣椒橙试样溶液的吸光度值；2100辣椒红素/辣椒玉红素在丙酮中462nm波长处的吸光度；m试样质量的数值，单位为克（g）；计算结果表示到小数点后1位。A.4 辣椒总碱的测定A.4.1 方法提要采用高效液相色谱法测定辣椒总碱（降二氢辣椒碱、辣椒碱和二氢辣椒碱）的含量。A.4.2 试剂和材料A.4.2.1 合成辣椒碱标样，纯度大于99%。A.4.2.2 乙醇。A.4.2.3 丙酮。A.4.2.4 乙腈。 A.4.3 仪器和设备A.4.3.1 高效液相色谱仪：带有20L定量环、荧光检测器或紫外检测器。A.4.3.2 检测器：荧光检测器-激发波长280nm，发射波长325nm。 紫外检测器-检测波长280nm。A.4.3.3 色谱柱：长为150mm，内径为4.6mm的不锈钢柱，固定相为C18、粒径5m。A.4.3.4 固相萃取小柱：C18 SEP-PAK 6mL。A.4.4 色谱分析条件A.4.4.1 流动相：乙腈：水溶液=40:60 水溶液为1%乙酸溶液（v/v）。A.4.4.2 流量：1.5mL/min 。A.4.4.3 进样量：20L。A.4.5 标样溶液的配制准确称取75mg 合成辣椒碱，纯度大于99%，（CAS RN：2444-46-4）加入500mL容量瓶中，加乙醇溶解稀释到刻度，摇匀，此溶液为标准溶液A，浓度为150g/mL。吸取10mL标准溶液A加入到100mL容量瓶中，加乙醇溶解稀释到刻度，摇匀，此溶液为标准溶液B，浓度为15g/mL。吸取5mL标准溶液B加入到100mL容量瓶中，加乙醇溶解稀释到刻度，摇匀，此溶液标准溶液C，浓度为0.75g/mL。A.4.6 样品溶液的配制准确称取5g辣椒橙加到50mL容量瓶中，避免样品粘到容量瓶内壁上。加入5mL丙酮，摇动直至样品完全溶解。倾斜45角观察样品是否粘附瓶底。缓慢加入乙醇（95%或无水乙醇）直到溶液浑浊，稀释到刻度，混合均匀。用10mL注射器直接吸取5mL样品溶液加入到规格为6mL固相萃取柱中，避免样品粘附到注射器的内壁上。样品通过萃取柱并收集到25mL的容量瓶中。用5mL乙醇洗涤萃取柱，洗涤三次，洗涤液收集到容量瓶中。乙醇定容， 经0.45 m过滤器过滤，滤液装入玻璃瓶中。A.4.7 分析步骤在A.4.4规定的色谱条件下，分别用微量注射器吸取试样溶液和合适的标准溶液注入并充满定量环，进行色谱检测，待最后一个组分流出完毕，用色谱工作站或积分仪进行结果处理。进样顺序是标准溶液、试样溶液、标准溶液。A.4.8 结果计算降二氢辣椒碱浓度以cN计，数值以g/mL表示，按式（A.2）计算： （A.2）式中： N降二氢辣椒碱的平均峰面积数值； cS 标样浓度g/mL； A1 标样的平均峰面积数值； rN降二氢辣椒碱相对标样的响应因子。辣椒碱浓度以cC计，数值以g/mL表示，按式（A.3）计算： （A.3） 式中： C辣椒碱的平均峰面积数值； cS 标样浓度g/mL； A1 标样的平均峰面积数值； rC辣椒碱相对标样的响应因子。 二氢辣椒碱浓度以cD计，数值以g/mL表示，按式（A.4）计算： （A.4）D二氢辣椒碱的平均峰面积数值； cS 标样浓度g/mL； A1 标样的平均峰面积数值； rD二氢辣椒碱相对标样的响应因子。 样品中辣椒总碱（降二氢辣椒碱、辣椒碱和二氢辣椒碱）以w2计，数值以g/mL表示，按式（A.5）计算：w2= + + （A.5） 式中：cN降二氢辣椒碱的浓度g/mL；cC,辣椒碱的浓度g/mL；cD 二氢辣椒碱的浓度g/mL。 表A.1 各辣椒碱参数各辣椒碱名称紫外检测器响应因子（UV）荧光检测器响应因子（FLU）相对保留时间/min降二氢辣椒碱（rN）0.980.920.90辣椒碱（rC）0.890.881.00二氢辣椒碱（rD）0.930.931.58A.5 辣椒红素和辣椒玉红素含量的测定A.5.1 方法提要采用高效液相色谱法，用面积归一化法测定辣椒红素和辣椒玉红素的含量。A.5.2 试剂和材料A.5.2.1 丙酮：色谱纯。A.5.2.2 无水硫酸钠。A.5.2.3 氢氧化钾-甲醇溶液：2g氢氧化钾溶于100mL甲醇。A.5.2.4 乙醚。A.5.3 仪器和设备A.5.3.1 高效液相色谱仪：带有二极管阵列检测器，波谱范围350 nm600nm。A.5.3.2 色谱柱：长为250 min，内径为4mm的不锈钢柱，固定相为C18。A.5.4 色谱分析条件A.5.4.1 检测波长:450nm。A.5.4.2 流量：1.5mL/min。 A.5.4.3 进样量：5L。A.5.4.4 梯度洗脱：时间/min丙酮水-10（进样前）752507525575251095517955221000277525A.5.5 样品溶液的配制称取0.2g样品溶于适量丙酮中，转移至500mL分液漏斗，加入丙酮至溶液体积为100mL，再加入100mL乙醚，混合均匀，过滤。加入100mL氢氧化钾-甲醇溶液，静置1h，定时摇动。除去水相，用水洗涤有机相数次，直到洗液无色。经无水硫酸钠过滤，用旋转蒸发仪在35以下蒸干。将干燥的色素转移至25mL容量瓶中，用丙酮溶解定容，冷却。可在分析前用超声波发生器将样品充分溶解，经0.45m过滤器过滤。A.5.6 分析步骤在A.5.4规定的色谱条件下，用微量注射器吸取5L试样溶液注入进样阀，待最后一个组分流出完毕，用色谱工作站或积分仪进行结果处理。出峰顺序： 新叶黄素、 辣椒玉红素、 紫黄质、辣椒红素、氧化玉米黄素、 玉米黄质、类胡萝卜黄色素 A、玉米黄质、隐辣椒质、-玉米黄质、-胡萝卜素。A.5.7 结果计算样品中辣椒红素和辣椒玉红素含量以计，数值以%表示，按式（A.6）计算：（A.6）式中：A2 试样中辣椒红素的峰面积数值；A3 试样中辣椒玉红素的峰面积数值；Ai试样中各组分i的峰面积之和。计算结果表示到小数点后1位。A.6 砷的测定A.6.1 方法提要辣椒橙经湿法消解后，制备成试样溶液，用原子吸收光谱法测定砷的含量。A.6.2 试剂和材料A.6.2.1 硝酸A.6.2.2 硫酸溶液：1+1A.6.2.3 硝酸-高氯酸混合溶液：3+1A.6.2.4 砷（As）标准溶液：按GB/T 602配制和标定后，再根据使用的仪器要求进行稀释配制成含砷相应浓度的三种标准溶液。A.6.2.5 氢氧化钠溶液：1g/L。A.6.2.6 硼氢化钠溶液：8g/L(溶剂为1g/L的氢氧化钠溶液) 。A.6.2.7 盐酸溶液：1+10。A.6.2.8 碘化钾溶液：200g/L。A.6.3 仪器和设备A.6.3.1 原子吸收光谱仪。A.6.3.2 仪器参考条件：砷空心阴极灯分析线波长：193.7nm；狭缝：0.5 nm1.0nm；灯电流：6 mA10 mA 。A.6.3.3 载气流速：氩气 250mL/min。A.6.3.4 原子化器温度：900。A.6.4 分析步骤A.6.4.1 试样消解称取约1g试样（精确至0.001g），置于250mL三角或圆底烧瓶中，加10mL15mL硝酸和2mL硫酸溶液，摇匀后用小火加热赶出二氧化氮气体，溶液变成棕色，停止加热，放冷后加入5mL硝酸-高氯酸混合液，强火加热至溶液透明或微黄色，如仍不透明，放冷后再补加5mL硝酸-高氯酸混合溶液，继续加热至溶液透明无色或微黄色并产生白烟（避免烧干出现炭化现象），停止加热，放冷后加5mL水加热至沸，除去残余的硝酸-高氯酸(必要时可再加水煮沸一次)，继续加热至发生白烟，保持10min，放冷后移入100mL容量瓶（若溶液出现浑浊、沉淀或机械杂质须过滤），用盐酸溶液稀释定容。同时按相同的方法制备空白溶液。A.6.4.2 测定量取25mL消解后的试样溶液至50mL容量瓶，加入5mL碘化钾溶液，用盐酸溶液稀释定容，摇匀，静置15min。同时按相同的方法以空白溶液制备空白测试液。开启仪器，待仪器及砷空心阴极灯充分预热，基线稳定后，用硼氢化钠溶液作氢化物还原发生剂，以标准空白、标准溶液、样品空白测试液及样品溶液的顺序，按电脑指令分别进样。测试结束后电脑自动生成工作曲线及扣除样品空白后的样品溶液中砷浓度，输入样品信息（名称、称样量、稀释体积等），即自动换算出试样中砷含量。平行测定结果的绝对差值不大于0.1mg/kg，取其算术平均值作为测定结果。A.7 铅的测定A.7.1 方法提要辣椒橙经湿法消解后，制备成试样溶液，用原子吸收光谱法测定铅的含量。A.7.2 试剂和材料A.7.2.1 铅（Pb）标准溶液：按GB/T 602配制和标定后,再根据使用的仪器要求进行稀释配制成含铅相应浓度的三种标准溶液。A.7.2.2 氢氧化钠溶液：1g/L。A.7.2.3 硼氢化钠溶液：8g/L(溶剂为1g/L的氢氧化钠溶液) 。A.7.2.4 盐酸溶液：1+10。A.7.3 仪器和设备A.7.3.1 原子吸收光谱仪 。A.7.3.2 仪器参考条件：GB 5009.12-2010 第三法 火焰原子吸收光谱法。A.7.4 分析步骤可直接采用A.6.4.1的试样溶液和空白溶液。按GB 5009.12-2010 第三法 火焰原子吸收光谱法操作。平行测定结果的绝对差值不大于1.0mg/kg，取其算术平均值作为测定结果。A.8 总有机溶剂残留量A.8.1 方法提要采用气相色谱法，用内标法测定总有机溶剂（乙酸乙酯，甲醇，乙醇，丙酮，2-丙醇，己烷）残留量。A.8.2 试剂和材料A.8.2.1 甲醇。A.8.2.2 内标物：3-甲基-2-戊酮。A.8.3 仪器和设备A.8.3.1 气相色谱仪。A.8.3.2 检测器：氢火焰离子化检测器。A.8.3.3 色谱柱：石英毛细管柱，长为30m，直径为0.53mm，膜厚1m（如DB-1或能达到同等分离效果的其他毛细管柱）。A.8.4 色谱分析条件A.8.4.1 载气：氦气。A.8.4.2 流量：5mL/min。A.8.4.3 气化室温度：140。A.8.4.4 检测器温度：300。A.8.4.5 柱温：35保持5min，然后以5/min 升温至90，保持6min。A.8.4.6 进样量：1.0mL (分流状态下)。A.8.5 溶液配制A.8.5.1 内标溶液的配制准确量取50.0mL甲醇加入到50mL进样瓶中，密封，称重，然后通过隔膜注射15L3-甲基-2-戊酮，称重，精确至0.01mg。A.8.5.2 样品溶液的配制准确称取0.20g样品加入样品瓶中，再加入5.0mL甲醇和1.0mL内标溶液，60加热10min,充分摇动10秒钟。A.8.5.3 标准曲线溶液的配制准确量取50.0mL甲醇加入到50mL样品瓶中，密封。准确称量，精确到0.01mg。通过隔膜注入50L标样（目标化合物），称重，混合均匀。A.8.6 分析步骤在A.8.4规定的测试条件下，用微量注射器吸取5L试样溶液注入进样阀，待最后一个组分流出完毕，用色谱工作站或积分仪进行结果处理。A.8.7 结果计算样品中的总有机溶剂残留量以w4计，数值以%表示，按式（A.7）计算：（A.7）式中：ri 试样中各残留有机溶剂与内标物响应值之比平均值；ms标样（目标化合物）的质量数值，单位为克（g）；ws标样（目标化合物）的质量分数，%；rs 标样（目标化合物）中各残留有机溶剂与内标物响应值之比平均值；mi试样质量的数值，单位为克（g）。计算结果表示到小数点后1位。 _10