食品中玉米赤霉烯酮的测定

中华人民共和国国家标准 华人民共和国卫生部 发布 布 施 食品安全国家标准 食品 中 玉米赤霉烯酮 的测定 （征求意见稿） 前 言 本标准代替 谷物中玉米赤霉烯酮的测定 和 23504食品中玉米赤霉烯酮的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 。 本标准与 B/T 23504要变化 如下： 修改了标准的中文名称，标准中文名称改为 食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定（理化方法 ）； 按照 新标准内容是由原 23504个方法组成， 将 23504 食品安全国家标准 食品 中玉米赤霉烯酮的测定 1 范围 本标准规定了 食品 中玉米赤霉烯酮的测定方法。 本标准 第一法 适用于 谷物 （ 玉米、小麦 等 ）中玉米赤霉烯酮的测定 ，第二法 适用于粮食和粮食制品、酒类、酱油、醋、酱及酱制品中玉米赤霉烯酮含量的测定。 2 原理 试样中的玉米赤霉烯酮用乙腈 取液经免疫亲和柱净化、浓缩后，用配有荧光检测器的液相色谱仪进行测定，外标法定量。 第一法 免疫亲和层析净化液相色谱法 3 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 符合 6682中 规定的 一级 水 。 试剂 醇 （ ： 色谱 纯 。 腈 （ ： 色谱 纯 。 化钠 （ 。 剂配制 乙腈 9+1）： 90 0 准品 玉米赤霉烯酮 （ 标准品：纯度 98%。 准溶液配制 米赤霉烯酮标准储备 液（ 0.1 mg/ 准确称取适量的玉米赤霉烯酮标准品，用乙腈 溶解并定容至浓度 为 0.1 mg/ 冰箱中避光保存 ，可使用 3个月 。 使用前用流动相稀释成适当浓度的标准工作液。 米赤霉烯酮标准标准曲线工作液： 将标准储备液用乙腈系列稀释后，配成浓度为 g/g/g/g/g/g/g/g/可使用 7 d。 料 米赤霉 烯酮免疫亲和柱。 璃纤维滤纸 4 仪器和设备 高效液相色谱仪，配有荧光检测器。 粉碎机 。 高速均质器 。 氮吹仪 。 空气压力泵 。 玻璃注射器： 20 天平：感量 g。 5 分析步骤 试样 制备 样品提取 称取 40 确到 g）置于 250 入 4 00 9+1） ，以均质器高速搅拌提取 2 过折叠快速定性滤纸过滤，移取 10.0 0.0 玻璃纤维滤纸过滤 1次 2次，至滤液澄清后进行免疫亲和柱净化操作。 净化 将免疫亲和柱连接于 20 确移取 10.0 相当于 0.8 入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以 1 滴 /s 2 滴 /至有部分空气通过柱体。以 5 次，弃去全部流出液，并使部分空气通过柱体。准确加入 1.5 洗脱，流速为 1 mL/集 洗脱液于玻璃试管中，于 55 以下氮气吹干后，用 1.0 b） 溶解残渣，供液相色谱测定。 仪器参考条件 液相色谱条件 a） 色谱柱： 150 .6 内径 ） ，粒度 4 m，或相当者； b） 流动相：乙腈 甲醇 （ 46+46+8） ； c） 流速： 1.0 mL/ d） 检测波长：激发波长 274 射波长 440 e） 进样量： 100 L； f） 柱温：室温。 色谱分析 分别取样液和标准溶液各 100 保留时间定性，峰面积定量。在上述色谱条件下，玉米赤霉烯酮的保留时间约为 3.4 玉米赤霉烯酮标准品的液相色谱图参见 图 1。 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行 。 6 分析结果的表述 按外标法计算试样中玉米赤霉烯酮的含量，计算结果需将空白值扣除。见式 （ l） ： 式中： X 试样中玉米赤霉烯酮的含量，单位为微克每千克 （ g/； A 样液中玉米赤霉烯酮的峰面积； 空白样液中玉米赤霉 烯酮的峰面积； c 标准工作溶液中玉米赤霉烯酮的浓度，单位为微克每毫升 （ g/； V 样液最终定容体积，单位为毫升 （ ； m 最终样液所代表的试样量，单位为克 （ g） ； 标准工作溶液中玉米赤霉烯酮的峰面积。 第二法 免疫亲和层析净化液相色谱法 7 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 6682规定的一级水。 剂 醇 （ ：色谱纯。 腈 （ ：色谱纯。 化钠（ 。 磷酸氢二钠（ 。 磷酸二氢钾（ 。 氯化钾（ 。 试剂配制 取液：乙腈 水 （ 9+1） ， 9份乙腈和 1份水混合而成 。 取 8.0 1.2 0.2 0.2 990 后用浓盐酸调节 用水定容至 1 L。 醇十乙腈 （ 1+1） ： 1份乙腈和 1份甲醇混合而成。 准品 玉米赤霉烯酮 （ 标准品：纯度 98%。 准溶液配制 ： 备液 （ 0.1 mg/：准确称取一定量的玉米赤霉烯酮标准品，用甲醇 +乙腈（ 1+1） 溶解，配成 0.1 mg/ 保存，可使用 3个月。 玉米赤霉烯酮标准工作液：根据使用需要，准确吸取一定量的玉米赤霉烯酮储备液，用流动相稀释，分别配成相当于 10 ng/50 ng/100 ng/200 ng/500 ng/4 保存，可使用 7 d。 料 玉米赤霉 烯酮免疫亲和柱。 玻璃纤维滤纸：直径 11 径 m，无荧光特性。 8 仪器和设备 天平：感量 g。 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 均质器：转速大于 10 000 r/ 高速万能粉碎机：转速 10 000 r/ 玻璃注射器： 10 试验筛： 1 空气压力泵。 9 分析步骤 试样制备与提取 粮食和粮食制品：将样品研磨，硬质的粮食等用高速万能粉碎机磨细并通过 试验筛 （ ，不要磨成粉末。称取 50 g（精确到 g）磨碎的试样于 入 5 提取液 （ 容至刻度，混匀，转移至均质杯中，高速搅拌提取 2 量滤纸过滤，移取 10.0 0 水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液 酒类：取脱气酒类试样（含二氧化碳的酒类使用前先置于 4 冰箱冷藏 30 滤或超声脱气）或其他不含二氧化碳的酒类试样 20 g（精确到 g）于 50 乙腈定容至刻度，摇匀。移取 10.0 0 水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清， 收集滤液 酱油、醋、酱及酱制品：称取 25 g（精确到 g）混匀的试样，用乙腈定容至 100.0 声提取 2 量滤纸过滤，移取 10.0 0 水定容至刻度，混匀，用玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清，收集滤液 净化 将免疫亲和柱连接于玻璃注射器 （ 下，准确移取 A 或 B 或 C 10.0 入玻璃注射器中。将空气压力泵与玻璃注射器相连接，调节压力，使溶液以约 1 滴 至空气进入亲和柱中。依次用 10 和 10 速约为 l 滴 /s 2 滴 /s，直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小柱。 洗脱 准确加入 1.0 速约为 1 滴 /s，收集全部洗脱液于干净的玻璃试管中，用甲醇定容至 1 液相色谱参考条件 a） 色谱柱： 5 m ， 150 .6 b） 流动相：乙腈十水十甲醇 （ 46+46+8） ； c） 流速： 1.0 mL/ d） 柱温： 35 ； e） 进样量： 20 L 100 L； f） 检测波长：激发波长 274 射波长 440 在上述色谱条件下 ，玉米赤霉烯酮标准品色谱图参见图 2。 标准曲线的制作 以玉米赤霉烯酮标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准工作曲线。 试样溶液的测定 将试样溶液注入液相色谱仪中，得到相应的峰面积。用标 准工作曲线对试样进行定量，标准工作溶液和试样溶液中玉米赤霉烯酮的响应值均应在仪器检测线性范围内， 平行测定次数不少于两次 。 空白试验 除不加试样外，空白试验应与测定平行进行，并采用相同的分析步骤。 10 分析结果的表述 试样中玉米赤霉烯酮的含量按式 （ l） 计算： 01 ) 1 0 0 01000c c （ （ 1） 式中： X 试样中玉米赤霉烯酮的含量，单位为微克每千克 （ g/； 试样 溶液中玉米赤霉烯酮的浓度，单位为纳克每毫升 （ ng/； 空白试样溶液中玉米赤霉烯酮的浓度，单位为纳克每毫升 （ ng/； V 甲醇洗脱液体积，单位为毫升 （ ； m 试样的质量，单位为克 （ g） ； f 稀释倍数。 附 录 A 第一法 玉米赤霉烯酮标准品 的液相色谱图 附 录 B 第二法 玉米赤霉烯酮标准品的液相色谱图 图 2 玉米赤霉烯酮标准品的液相色谱图