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考纲要求1.微生物的分离和培养。2.果酒、果醋和腐乳的制作。3.酶在洗涤方面的应用。4.制备和应用固定化酵母细胞。5.DNA的粗提取与鉴定。,灭菌,尿素,稀释涂布平板,纤维素,刚果红染色,化学,结合法,物理和化学性质,二苯胺,1.(2014江苏单科，24)某同学设计了右图所示的发酵装置，下列有关叙述正确的是(多选)()A.该装置可阻止空气进入，用于果酒发酵B.该装置便于果酒发酵中产生的气体排出,考点一微生物的培养与传统发酵技术,典例引领,C.去除弯管中的水，该装置可满足果醋发酵时底层发酵液中大量醋酸菌的呼吸D.去除弯管中的水后，该装置与巴斯德的鹅颈瓶作用相似解析该装置中注水的弯曲部分可阻止空气进入，能用于果酒发酵，A正确；果酒发酵产生的CO2可溶解在弯管的水中，进一步通过水排出，B正确；醋酸菌是好氧菌，因没有通入无菌空气，去除弯管中的水后也不能满足底层发酵液中醋酸菌的呼吸需氧量，C错误；去除弯管中的水后，该装置的弯管部分也能防止空气中的微生物进入，与巴斯德的鹅颈瓶作用类似，D正确。答案ABD,2.(2014全国课标，39)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题。,(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_分解成_。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成_色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。,(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：注：“”表示有，“”表示无。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_。,解析(1)纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，如下图：(2)刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(3)分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，且需以纤维素为唯一碳源。,答案(1)纤维二糖葡萄糖(2)红透明圈(3)不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成CR纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌,3.临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。,(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的_。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。,解析本题考查微生物接种和抗生素抗菌能力判断。(1)在微生物的培养过程中，常用来分离微生物的方法是稀释涂布(平板)法或平板划线法。(2)为了使微生物在培养基上能够均匀分布，一般用涂布法将微生物接种在培养基上。(3)在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌生长；透明圈的大小表示此种抗生素抗菌能力的强弱，据此可判断A、B、C抗菌能力强弱依次是A、C、B；D的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。(4)实验结果表明抗生素A对该致病菌的抗菌效果最好。答案(1)划线稀释涂布(平板)(或涂布)(2)涂布(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A,1.微生物的培养与分离技术(1)微生物培养中的无菌操作技术常用消毒3种方法消毒法、巴氏消毒法及化学药剂消毒法。常用灭菌3种方法灭菌接种环、接种针等金属器具；灭菌主要针对玻璃器皿等；灭菌主要针对等。,煮沸,灼烧,干热,高压蒸汽,培养基,(2)培养基制备与微生物纯化技术,称量,灭菌,(3)筛选目的微生物的原理原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。因此，可以通过配制选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。实例：培养基以尿素为唯一氮源可筛选到尿素细菌；培养基以纤维素为唯一碳源，可筛选到纤维素分解菌。,2.传统发酵技术的应用(1)制作果酒、果醋、腐乳、菌种的比较(2)传统发酵技术必须控制的发酵条件发酵过程都需要器材消毒、灭菌和操作过程无菌操作。加入抑制杂菌繁殖的物质，如酒精、香辛料等。控制发酵温度、pH、氧气浓度和发酵时间。,(1)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养。(2013江苏卷，T18C)()(2)用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30300菌落数的平板(2015四川卷，3D)()(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法。(2011新课标全国卷，T39(2)()(4)在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长(2012江苏，21A)(),错混诊断,(5)在家庭中用鲜葡萄制作果酒时，让发酵装置接受光照并放在45处(2010北京，1AD)()(6)与果醋、果酒制作相比，腐乳的制作所需要的适宜温度最高，所用菌种为乳酸菌(2011江苏，3AC)()(7)在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与，所用豆腐的含水量为70%左右，水分过多腐乳不易成形(江苏，17AB改编)()答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)提示(1)培养微生物不必在光照条件下；(5)制作葡萄酒不需光照且温度为1825；(6)腐乳制作所需菌种为毛霉，果醋制作所需温度最高。,题组1微生物的培养与应用,1.(2015江苏卷，19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上,解析A项错，高压灭菌加热结束后，让其自然冷却后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物；B项错，倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖；C项错，灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；D项正确，皿底的标记不会因为盖子混淆而混淆。答案D,2.(2014四川卷，10)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。,(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。,(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该实验设计是否合理？为什么？_。,答案(1)氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖(2)细胞分裂素母液(3)接种环接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照,1.分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。2.平板划线法只适用于微生物的提纯，不适合进行计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。3.倒平板的温度一般在50左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。4.平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。,题组2传统发酵技术的应用,1.(2015江苏卷，17)关于“腐乳的制作”实验，下列叙述错误的是()A.将腐乳坯堆积起来会导致堆内温度升高，影响毛霉生长B.腐乳坯若被细菌污染，则腐乳坯表面会出现黏性物C.勤向腐乳坯表面喷水，有利于毛霉菌丝的生长D.装坛阶段加入料酒，可有效防止杂菌污染,解析A项对，将腐乳坯堆积起来会导致微生物大量繁殖，堆内温度升高，影响毛霉生长；B项对，正常情况下毛霉等菌种，会使豆腐表面长出一层菌丝，被细菌污染，腐乳坯表面会出现黏性物；C项错，适于做腐乳的豆腐含水量为70%左右，适于毛霉菌丝生长，再加水不利于腐乳成型；D项对，加入料酒，可抑制杂菌生长。答案C,2.(2015江苏卷，24)下图为苹果酒的发酵装置示意图，下列叙述错误的是(多选)()A.发酵过程中酒精的产生速率越来越快B.集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的CO2C.发酵过程中酵母种群呈“J”型增长D.若发酵液表面出现菌膜，最可能原因是发酵瓶漏气,解析A项错，发酵后期，底物减少、酒精浓度增加等因素，都会造成酒精产生速率减慢；B项错，发酵初期，由于发酵瓶中有氧气，酵母菌能进行有氧呼吸产生二氧化碳；C项错，酵母菌种群不呈“J型”增长；D项对，发酵瓶漏气，会使醋酸菌大量繁殖而形成表面观察到的菌膜。答案ABC,3.根据传统发酵技术的相关知识，回答下列问题。(1)果酒的制作制作果酒时，发酵瓶可用体积分数为70%的酒精进行_(填“消毒”或“灭菌”)。从微生物培养的角度分析，果汁能够为制作果酒所用的酵母菌提供水、_、_和无机盐。(2)果醋的制作制作果醋所用的微生物只有当_充足时，才能进行旺盛的生理活动。在制作果醋的过程中，要将温度严格控制在_。,(3)腐乳的制作腐乳的制作有多种微生物参与，其中起主要作用的是_。在制作腐乳的过程中，加盐和加酒所发挥的相同作用是_。答案(1)消毒碳源氮源(2)氧气3035(3)毛霉抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质,果酒和果醋发酵装置的设计思路酵母菌繁殖需要氧气，醋酸菌是好氧细菌，则果酒制作前期和果醋制作整个过程都需要氧气；酵母菌产生酒精时是厌氧的，则在充气口处应该设置开关。发酵过程中产生CO2，需要设置排气口；为了防止空气中微生物污染，排气口应该连接一个长而弯曲的胶管。为便于取样及监测发酵情况，需要设置出料口。,1.(2014江苏高考，18)下列关于加酶洗衣粉的叙述，正确的是()A.高温易使酶失活，因此冷水洗涤去污效果应该比温水好B.洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用C.在pH低于7.0的自来水中，碱性蛋白酶依然能起作用D.洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用,考点二酶的应用,典例引领,解析加酶洗衣粉中的酶在水温4560时，能充分发挥洗涤作用，水温高于60时，碱性蛋白酶要失去活力，水温低于15时，酶的活性迅速下降，影响洗涤效果，A项错误。表面活性剂能影响碱性蛋白酶活性，还会使酶失活，B项错误。碱性蛋白酶适合的pH值为6.08.5，C项正确。蛋白质是衣物上最普遍存在的污垢，而且是最难被表面活性剂和其他助洗剂所去除的。蛋白酶能把衣物上蛋白质先分解成可溶性的肽，然后再分解成氨基酸，从而很容易被洗去，D项错误。答案C,2.(2015江苏单科，11)下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，错误的是()A.固定化酶的主要目的是实现酶的重复利用B.溶解氧交换受阻是固定化酶应用的重要限制因素C.固定化细胞用于生产能分泌到细胞外的产物D.凝胶与被包埋细胞之间不是通过共价键结合解析A项，固定化酶制作的目的是能够顺利从发酵产物中把酶分离出来，能够使酶反复使用；B项，溶解氧交换受阻会影响细胞呼吸，是固定化细胞应用的重要限制因素；C项，固定化细胞常用于生产能分泌到细胞外的产物如固定化酵母细胞用于生产酒精；D项，将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞，细胞并不与凝胶通过共价键结合。,B,3.(2013江苏单科，6)下列有关固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是()A.可用包埋法制备固定化酵母细胞B.反应产物对固定化酶的活性没有影响C.葡萄糖异构酶固定前后专一性不同D.固定化细胞可以催化各种反应底物的一系列反应解析本题考查固定化酶和固定化细胞的相关知识。可用包埋法制备固定化酵母细胞；有些反应产物可与相应酶结合，进而影响固定化酶的活性；葡萄糖异构酶固定前后专一性不变；固定化细胞固定的是一系列酶，催化一系列反应，不能催化各种反应底物的一系列反应。,A,1.制备固定化酵母细胞固定酵母细胞的方法：包埋法。步骤如下：(1)酵母细胞的活化：酵母菌吸水，由休眠状态恢复为正常状态(2)配制CaCl2溶液：CaCl2溶液用于增强凝胶珠的强度。(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞混合(5)固定化酵母细胞：将海藻酸钠酵母细胞混合液滴加到CaCl2溶液中。,2.探寻在酶的实验探究中应注意的问题(1)实验设计时要遵循_和_两大原则，严格控制_。(2)探究不同温度(或pH)对酶活性的影响时，_作为自变量，通常通过设置_来确定最适值。最适值是通过比较相同时间内获得的_来确定的。(3)探究最适温度时，_为无关变量；探究最适pH时，温度最好为_。(4)探讨加酶洗衣粉的最适温度要根据生活中的实际情况，合理设置_。(5)在使用加酶洗衣粉时不但要考虑最佳洗涤效果条件，还要考虑到酶的_和_的问题。3.果胶酶可以提高果汁的出汁率，还可以提高果汁的澄清度。,单一变量,对照,无关变量,温度(或pH),合理的梯度,产量或效果,pH,最适温度,温度梯度,专一性,洗涤成本,(1)用果胶酶澄清果汁时，温度越低澄清速度越快。(2015江苏卷，7C)()(2)洗衣时，加少许白醋能增强加酶洗衣粉中酶的活性。(2015江苏卷，7D)()(3)下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，判断正误(2015江苏卷，11)固定化酶的主要目的是实现酶的重复利用()溶解氧交换受阻是固定化酶应用的重要限制因素(),错混诊断,固定化细胞用于生产能分泌到细胞外的产物()凝胶与被包埋细胞之间不是通过共价键结合()(4)嫩肉粉是以蛋白酶为主要成分的食品添加剂。就酶的作用特点而言，室温下先与肉片混匀放置一段时间再炒熟的使用方法最佳(广东文基，72D改编)()(5)用含蛋白酶的洗衣粉去除油渍，效果比其他类型的加酶洗衣粉好(2010江苏，3D)()(6)棉织物不能使用添加纤维素酶的洗衣粉进行洗涤(2011江苏，15C)(),答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)提示(1)在一定范围内，温度越低，酶活性越低，果汁中果胶的分解速度越慢。(2)洗衣粉中的碱性蛋白酶在弱碱性条件下活性最强。(3)溶解氧交换受阻会影响细胞呼吸，是固定化细胞而不是固定化酶应用的重要限制因素。(5)由于酶具专一性，蛋白酶不宜去除油渍。(6)洗涤棉织物也可使用添加纤维素酶的洗衣粉，它可使棉织物更柔软。,题组1果胶酶及其在果汁生产中的应用,某生物兴趣小组为探究不同浓度果胶酶对澄清苹果汁出汁率的影响，进行了如下实验。,实验步骤：制备苹果汁：将苹果洗净，切成小块，用榨汁机打碎成苹果汁匀浆。加热苹果汁到100，再冷却至50左右。配制不同浓度的酶液：取5支10g/L的试管，依次编为26号。分别加入不同量的质量浓度为10g/L果胶酶溶液，再分别加入苹果酸定容至10g/L，获得质量浓度分别为2g/L、4g/L、6g/L、8g/L、10g/L的果胶酶溶液备用。,降解苹果汁(如下图)沉淀：向上述6只烧杯中添加明胶、活性炭等物质搅拌处理，充分混匀后静置，分别过滤。记录并处理结果：用量筒测量澄清滤液(即苹果汁)的体积记入表格，并计算出汁率。,请回答下列问题。(1)果胶酶能提高苹果的出汁率并使果汁澄清的原因是_。(2)步骤中，苹果汁先加热到100的目的是_。(3)步骤中，在26号试管中加入10g/L果胶酶溶液的量分别是_；步骤中，在1号烧杯中加入1mL_。(4)根据预期结果，请绘制出澄清苹果汁出汁率与果胶酶浓度之间大致的关系曲线，并在坐标轴上标出澄清苹果汁最高出汁率所需的果胶酶最佳浓度。,解析(1)果胶酶能分解果胶，瓦解细胞壁，从而提高出汁率并使果汁澄清。(2)将苹果汁加热到100，可使苹果中原有酶失活，防止对实验结果产生干扰。(3)欲获得xg/L的浓度，应加入xmL果胶酶量。在1号烧杯中加入1mL苹果酸作为对照。(4)出汁率曲线起点于纵轴某点，在一定范围内随果胶酶浓度升高，出汁率上升，达饱和点后稳定。,答案(1)果胶酶能分解果胶，瓦解细胞壁(2)使苹果中的酶失活，防止对实验结果产生干扰(3)2mL、4mL、6mL、8mL、10mL苹果酸(4)如图(注意坐标轴的含义、曲线变化趋势、起点、最佳浓度),在混合苹果泥和果胶酶之前，要将苹果泥和果胶酶分装在不同的试管中，每组进行同温(或同pH)处理，其目的是保证底物和酶在混合时的温度(或pH)相同，避免苹果泥或果胶酶混合时影响混合物的温度(或pH)，从而影响果胶酶的活性。,题组2探究加酶洗衣粉的洗涤效果,1.(2012江苏单科，16)下列关于“探究加酶洗衣粉和普通洗衣粉的洗涤效果”的叙述，合理的是()A.先用热水溶解洗衣粉，再将水温调节到最适温度B.实验的观察指标可以是相同洗涤时间内污渍的残留程度C.相同pH时加酶洗衣粉洗涤效果好于普通洗衣粉D.衣物质地和洗衣粉用量不会影响实验结果,解析本实验的自变量是洗衣粉的种类，因变量是洗涤效果，无关变量有温度、pH、衣物质地(因为酶具有专一性)、洗衣粉的用量等，探究实验中除自变量外应给予相同且适宜的其他条件，才能排除无关变量对实验结果的干扰，根据上述分析，符合题意的是B。答案B,2.加酶洗衣粉是指含有酶制剂的洗衣粉。请回答下列问题：(1)由图推知，该实验的目的是_。50时加酶洗衣粉中碱性蛋白酶的最适含量是_。,(2)下表是添加脂肪酶的加酶洗衣粉和普通洗衣粉洗涤效果的实验记录，请据表回答：,该实验设计体现了_原则。若实验组1号洗净所需时间接近7min，最可能的原因是_。,(3)下列衣料不适宜用添加蛋白酶的加酶洗衣粉洗涤的有_。棉织品毛织品腈纶织品蚕丝织品(4)根据以上实验结果，写出两项提高加酶洗衣粉效果的措施_。答案(1)探究温度、碱性蛋白酶含量对去污力的影响0.6%(2)对照、单一变量酶失活(3)、(4)用温水浸泡；延长浸泡时间；增加洗衣粉的用量等(写出两项合理答案方可),(1)一般说来，丝绸类的衣物不可以使用加酶洗衣粉洗涤，是因为蛋白酶会水解蛋白质类的丝绸。(2)酶的催化作用需要适宜的温度，用温水浸泡衣物可以缩短衣物的浸泡时间，加快洗涤。(3)人体皮肤细胞有蛋白质，使用加酶洗衣粉后如不彻底清洗双手，就会使手的皮肤受到腐蚀，而使人患过敏性皮炎、湿疹等。(4)加酶洗衣粉的酶制剂不含肽酶，因为肽本身易溶于水。,题组3固定化酶及其应用,1.(2015江苏卷，20)下图为制备人工种子部分流程示意图，下列叙述正确的是()A.胚状体是外植体在培养基上脱分化形成的一团愈伤组织B.该过程以海藻酸钠作为营养成分，以CaCl2溶液作为凝固剂C.可在海藻酸钠溶液中添加蔗糖，为胚状体提供碳源D.包埋胚状体的凝胶珠能够隔绝空气，有利于人工种子的储藏,解析本题主要考查人工种子的制备。难度适中。A项错误，胚状体是愈伤组织再分化得到的；B项错误，海藻酸钠是凝固剂；C项正确，在海藻酸钠溶液中添加蔗糖，不仅为胚状体提供能量，而且是培养物渗透压的主要调节者；D项错误，凝胶珠具有空间网状结构，不隔绝空气。答案C,2.(2012江苏单科，17)下列关于酶和固定化酵母细胞的研究与应用的叙述，错误的是()A.从酶的固定方式看，吸附法比化学结合法对酶活性影响小B.作为消化酶使用时，蛋白酶制剂以口服方式给药C.尿糖试纸含有固定化的葡萄糖酶和过氧化氢酶，可以反复使用D.将海藻酸钠凝胶珠用无菌水冲洗，目的是洗去CaCl2和杂菌,解析酶的固定方式有包埋法、化学结合法和物理吸附法，物理吸附法是利用吸附剂本身的表面张力对附近的分子产生吸附，与化学结合法相比，不会使被吸附物质的性质发生改变，所以吸附法对酶活性影响较小，A项说法正确；消化酶在人体消化道内发挥作用，蛋白酶制剂一般在最外面加上糖衣后通过口服方式给药，B项说法正确；尿糖试纸是一种将葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和某种无色的化合物固定于滤纸上制成的酶试纸，不能反复利用，C项说法错误；制作固定化酵母细胞时，将海藻酸钠凝胶珠用无菌水冲洗的目的是洗去CaCl2和杂菌，防止凝胶珠硬度过大和杂菌污染，D项说法正确。答案C,(1)酶的三种固定方法：化学交联法、物理吸附法、包埋法(2)适用对象一般来讲，酶更适合用化学结合和物理吸附法固定化，而细胞多采用包埋法固定化，这是因为个大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶则易从包埋材料中漏出。,1.(2015江苏卷，25)图1、2分别为“DNA的粗提取与鉴定”实验中部分操作步骤示意图，下列叙述正确的是(多选)(),考点三DNA的粗提取与鉴定,典例引领,A.图1、2中加入蒸馏水稀释的目的相同B.图1中完成过滤之后保留滤液C.图2中完成过滤之后弃去滤液D.在图1鸡血细胞液中加入少许嫩肉粉有助于去除杂质,解析本题主要考查“DNA的粗提取与鉴定”实验，意在考查考生理解能力和实验能力。难度较小。A项错误，图1、2中加入蒸馏水稀释的目的分别是破碎细胞获取含DNA的滤液、稀释NaCl溶液，析出DNA；B项正确，图1过滤之后保留滤液，因滤液含DNA；C项正确，图2过滤之后弃去滤液，因DNA已析出；D项正确，嫩肉粉中的蛋白酶可对蛋白质进行水解。答案BCD,2.(2014江苏卷，16)下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误的是()A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料B.DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝,解析理论上只要含DNA的生物材料都行，只是从操作难易程度上分，最好选择容易操作的，所以酵母和菜花可作为提取DNA的材料，A正确；DNA在2mol/LNaCl溶液和蒸馏水中都能溶解，只不过溶解度不同，B正确；向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，鸡血细胞会破裂，DNA在蒸馏水中溶解度较大，不会析出，C错误；DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝，D正确。答案C,3.(2013江苏单科，4)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验，操作错误的是()A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热解析破碎植物细胞时，加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作，A错误。答案A,1.DNA粗提取和鉴定的原理(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，即2mol/LNaCl可溶解DNA，0.14mol/LNaCl可析出DNA。(2)DNA不被蛋白酶水解：加入嫩肉粉，可将蛋白质水解，得到DNA。(3)DNA不溶于酒精：加入冷却的体积分数95%的酒精可析出DNA、除去杂质。(4)DNA可被二苯胺染成蓝色，以此鉴定DNA(需沸水浴加热)。,2.DNA的粗提取和鉴定方法(1)材料的选取：选用DNA含量相对较高的生物组织。(2)破碎细胞动物的红细胞，吸水破裂。植物细胞：加入洗涤剂、食盐后研磨。(3)除去杂质的方法方法一：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度的不同，通过调节_除去溶于和不溶于NaCl溶液中的杂质。方法二：利用DNA对酶的耐受性，直接在滤液中加入嫩肉粉，反应1015min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解_，而不会破坏_。,NaCl溶液的浓度,DNA,蛋白质,方法三：利用DNA对高温的耐受性，将滤液放在6075的恒温水浴箱中保温1015min，使_变性沉淀而_分子还未变性。(4)DNA的析出：向处理后的滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液(体积分数为95%)，静置23min，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。(5)DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成_。,蛋白质,DNA,蓝色,(1)关于DNA的实验，请判断正误(2015广东卷，3)用兔的成熟红细胞可提取DNA()DNA溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴后生成蓝色产物()用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色，细胞核呈绿色，细胞质呈红色()(2)提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞(江苏，23A)()(3)用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质(江苏，23B)(),错混诊断,答案(1)(2)(3)提示(1)兔的成熟红细胞无细胞核及各种细胞器。用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色只能使细胞核呈绿色，不能使细胞质呈红色。(2)提取植物细胞中的DNA不能用涨破法。,题组DNA的粗提取与鉴定,1.(2012江苏卷，18)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是()A.洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度B.将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝C.常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取D.用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少,解析洗涤剂能够瓦解细胞膜，但不能增加DNA的溶解度，A错误；将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴中变蓝，不需要冷却，B错误；常温下菜花匀浆中有些酶可破坏DNA，影响DNA的提取，C正确；用玻棒缓慢搅拌滤液并不影响DNA的含量，而在粗提取时，缓慢搅拌有利于DNA附着，D错误。答案C,2.请回答下列关于DNA粗提取和鉴定的问题。(1)DNA提取过程可以使用鸡血或者菜花，使用鸡血时，需在鸡血中加入_，目的是_。在_中加入蒸馏水，目的是_。(2)使用菜花提取DNA时，需先研磨，研磨时可加入一定的洗涤剂和食盐，其作用分别是_和_。(3)本实验中可用到嫩肉粉，起作用的是其中的_。(4)使用体积分数为_的_酒精可使DNA析出。最后，使用_对DNA进行鉴定，水浴加热冷却后溶液呈蓝色。,答案(1)柠檬酸钠防止血液凝固鸡血细胞液使鸡血细胞破裂(2)使细胞膜破裂溶解DNA(3)蛋白酶(4)95%冷二苯胺试剂,“DNA的粗提取与鉴定”实验和“血红蛋白的提取与分离”实验中都常常用到红细胞，但前者往往采用鸡血细胞，后者一般采用哺乳动物的血红细胞。原因是鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得，且极易吸水涨破；哺乳动物成熟的血红细胞中不含有细胞核和多种细胞器，其中的血红蛋白含量丰富，适宜用于血红蛋白的提取与分离实验。,
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