巨须裂腹鱼

ICS65.152B 52备案号：DB54西藏自治区地方标准DB 54/ XXXXXXXXX巨须裂腹鱼Large barbell schizothoracin点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施西藏自治区市场监督管理局发布DB54/ XXXXXXXXX目次前言II1范围12规范性引用文件13学名与分类13.1学名13.2地方名13.3分类位置14主要形态结构特征14.1外部形态特征14.2内部结构特征25生长与繁殖35.1生长35.2繁殖46遗传学特性46.1细胞遗传学特性46.2生化遗传学特性57检测方法57.1抽样57.2性状测定57.3年龄鉴定57.4染色体检测67.5肾细胞醇脱氢酶(ADH)同工酶检测68检验规则与结果判定6附录A（资料性附录）生长方程、体长与体重关系式7附录B（规范性附录）同工酶试剂的配制8前言本标准按照GB/T 1.1的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由西藏自治区农牧厅提出。本标准由西藏自治区农牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：华中农业大学、西藏自治区农牧厅畜牧总站、四川律贝生物技术有限公司。本标准的主要起草人：霍斌、谢从新、覃剑晖、马徐发、尼玛群宗、边巴卓玛、格桑达娃、林少卿、旦增旺久、尼玛次仁、张鑫宬、胡程鹏。本标准为首次制定。9巨须裂腹鱼1 范围本标准给出了巨须裂腹鱼（Schizothorax macropogon Regan）的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性以及检测方法。本标准适用于巨须裂腹鱼的种质检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分：检验规则GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分：性状测定GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第13部分：同工酶电泳分析3 学名与分类3.1 学名巨须裂腹鱼（Schizothorax macropogon Regan）。3.2 地方名胡子鱼。3.3 分类位置硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），裂腹鱼亚科（Schizothoracinae），裂腹鱼属（Schizothorax）。4 主要形态结构特征4.1 外部形态特征4.1.1 外形体延长，稍侧扁。头锥形。吻端略宽扁。口下位，呈弧形。下颌角质不形成锐利锋缘。左右两侧叶细狭，表面具乳突。唇后沟中断。须2对，发达；上颌须末端后伸达前鳃盖骨之后，口角须末端后伸可达胸鳍基部。体鳞细小，胸部在接近鳃峡的一小部分区域裸露无鳞。背鳍刺强壮，其后侧缘具锯齿。腹鳍起点稍前于背鳍起点之下方。体背呈青灰色，体侧青黑色，腹部浅黄色，体侧有少数暗斑。巨须裂腹鱼的外形见图1。图1 巨须裂腹鱼的外形图4.1.2 可数性状4.1.2.1 背鳍鳍式D. iii -78。4.1.2.2 臀鳍鳍式A. iii- 5。4.1.2.3 第一鳃弓鳃耙数外侧鳃耙数：1524；内侧鳃耙数：2027。4.1.2.4 鳞式 。4.1.3 可量性状巨须裂腹鱼可量性状实测比例见表1。表1 巨须裂腹鱼可量性状比例值比例性状平均值（范围）比例性状平均值（范围）体长/体高4.5（4.14.9）头长/吻长2.8（2.73.1）体长/头长4.4（4.24.8）头长/眼径5.8（5.66.2）体长/尾柄长5.1（4.65.6）头长/眼间距3.0（2.53.3）体长/尾柄高9.2（8.610.04）尾柄长/尾柄高1.7（1.52.0）4.2 内部结构特征4.2.1 鳔鳔分两室。后室细长，其长度为前室长的2.53.1倍。4.2.2 下咽齿下咽齿3行，2. 3.5/5.3.2，或2.3.4/4.3.2。咽齿细圆，顶端尖而稍钩曲，咀嚼面凹入呈匙状。4.2.3 脊椎骨脊椎骨总数：5052。4.2.4 腹膜黑色。5 生长与繁殖5.1 生长雌鱼最大年龄24龄，雄鱼最大年龄19龄。不同年龄组的鱼体长和体重实测值见表2。生长方程和体长与体重关系式参见附录A。表2 巨须裂腹鱼各年龄组的体长和体重实测值年龄组龄雌鱼雄鱼体长(平均 S.D.)mm体重 (平均 S.D. )g体长(平均 S.D.)mm体重(平均 S.D.)g3-172.314.384.713.04207.012.8136.523.1211.015.7151.134.35240.320.3222.849.0233.323.0195.049.66257.918.4279.855.5248.129.5244.590.77286.029.8383.9127.8288.638.1401.9145.38291.026.0401.2101.2300.828.0453.4140.59314.632.5514.8145.4317.139.8533.5159.310333.428.0610.1131.9361.327.5785.2159.711346.519.5689.911.8352.035.4795.7269.412348.722.4721.5136.5372.325.8829.0159.013351.223.6721.0143.9382.121.7922.5136.914362.525.0803.6162.0391.116.81031.5107.315365.418.1857.8177.3397.523.41052.7141.616378.722.4876.8150.4401.224.81092.988.517360.412.8808.9108.3408.213.81225.0192.918373.823.0832.9141.0415.719.71295.8166.419384.011.31174.9236.8425.920.61368.194.820356.513.5741.283.0417.519.11374.958.321421.0985.8422.823.71173.5223.422388.01002.4396.049.11187.1200.223-427.327.11366.9217.224408.01065.3389.541.71720.654.125474.01772.126404.01355.627441.01693.55.2 繁殖5.2.1 性成熟年龄雌鱼为9 龄，雄鱼为6龄。5.2.2 产卵类型性腺一年成熟一次，分批产出。5.2.3 繁殖期繁殖期为1月2月。5.2.4 怀卵量不同年龄组个体怀卵量见表3。表3 巨须裂腹鱼不同年龄组的个体怀卵量年龄组龄体重范围g怀卵量（均值标准差）粒/尾12911.01192.697785476141106.01132.310099146161074.61098.910555652181277.41531.51407839076 遗传学特性6.1 细胞遗传学特性染色体数：2n=96，核型公式22m+12sm+40st+22t，臂数（NF）: 130染色体核型见图2。图2 巨须裂腹鱼肾细胞染色体组型图6.2 生化遗传学特性肾细胞醇脱氢酶(ADH)酶带扫描图见图3。图3 巨须裂腹鱼肾细胞醇脱氢酶(ADH)酶带扫描图7 检测方法7.1 抽样 按GB/T 18654.2的规定执行。7.2 性状测定按GB/T 18654.3的规定执行。7.3 年龄鉴定采用耳石鉴定年龄。方法按SC 1037的规定执行。7.4 染色体检测按GB/T 18654.12的规定执行。7.5 肾细胞醇脱氢酶(ADH)同工酶检测7.5.1 试剂及配制方法同工酶各种试剂的配制见附录A。7.5.2 样品的采集与制备从尾静脉抽取2ml血，于4、1000r/min离心6min，取上清备用。7.5.3 制胶将混匀的7.0%分离胶液倒入模板，插好梳子，置于36左右，待凝胶聚合好后，置于冰箱中备用。7.5.4 点样点样量为20L。吸取20L样与2L3L加样指示剂混匀，一起加到样孔中。7.5.5 电泳分离1) 采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度7.0%。2) 电极缓冲液：pH为8.3的Tris-甘氨酸。3) 电泳：稳压280 V（起始电流约1824mA）电泳0.5h后，将电压调到220v，继续电泳5 h6h（溴酚蓝跑出胶后2h以上）。4) 染色：电泳结束后，放入预先配好并在37恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。8 检验规则与结果判定按GB/T 18654.1的规定执行。AA附录A （资料性附录）生长方程、体长与体重关系式A.1 体长和体重生长方程雌性和雄性群体的体长和体重生长方程分别见式（A.1）、（A.2）、（A.3）和（A.4）：雌性：Lt=446.01-e-0.190(t-0.576)（A.1） Wt =1310.01-e-0.190(t-0.576) 2.937（A.3）雄性：Lt=428.51-e-0.218(t-0.218)（A.2） Wt =1247.81-e-0.218(t-0.218) 2.867（A.4）式中：Ltt龄时鱼体体长，mm；Wtt龄时鱼体体重，g；e自然对数；t鱼的年龄。A.2 体长与体重关系式雌性和雄性群体的体长与体重关系式见（A.5）和（A.6）：雌性：W=2.47610-5L2.937（A.5）雄性：W=3.55110-5L2.867（A.6）式中：W鱼体体重，g；L鱼体体长，mm。BB附录B （规范性附录）同工酶试剂的配制B.1 凝胶制备B.1.1 凝胶制备溶液配制各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表B.1。表B.1 各种凝胶制备溶液配方溶 液配 制 方 法凝胶缓冲液取Tris 56.75g加200mL蒸馏水，用浓盐酸调pH为8.9，加蒸馏水到250mL。4贮存。凝胶储液取丙烯酰胺33.3g，N，N 亚甲基双丙烯酰胺0.9g，四甲基乙二胺（TEMED ）338L溶于蒸馏水中定容到150mL。4贮存。AP取过硫酸铵1.5mg溶解到100mL蒸馏水水中。4贮存。B.1.2 凝胶制备7.0%聚丙烯酰胺垂直板凝胶配方见表B.2。表B.2 7.0%凝胶制备配方凝胶缓冲液mL凝胶储液mLAP mL纯水mL总体积mL2.412.62.422.640B.2 加样指示剂0.15溴酚蓝-50甘油：称取0.15g溴酚蓝溶于50mL蒸馏水，再加50mL甘油混匀。B.3 电极缓冲液电极缓冲液配制方法：取甘氨酸28.80g溶于800mL水，用约6.00g的Tris调pH至8.3，加蒸馏水到1000mL。电泳时稀释10倍使用。B.4 染色液的配制B.4.1 染色用各溶液配制染色用各溶液配制方法见表B.3。表B.3 染色用溶液配方溶 液配 制 方 法A氯化硝基四氮唑蓝（NBT）300mg辅酶1（NAD）500mg吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）20mg水（H2O）100 mLB乙醇B.4.2 染色液配方取A液10mL，B液4mL，H2O 136mL，混合均匀。_