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中 华 人 民 共 和 国 轻 工 行 业 标 准 B/T 黄酒中氨基酸的测定方法 of in 征求意见 稿） - -发布 - -实施 工业与信息化部 发布 I 目 次 前言 . 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 试剂 . 1 5 仪器和材料 . 1 6 分析步骤 . 2 7 结果计算 . 3 8 重复性 . 3 附录 A . 4 附录 B . 5 言 本标准由全国食品发酵标准化中心提出并归口。 本标准负责起草单位： 本标准主要起草人： 1 黄酒中氨基酸的测定方法 1 范围 本标准规定了黄酒中天冬氨酸 (谷氨酸 (丝氨酸 (甘氨酸 (组氨酸 (精氨酸 (苏氨酸 ( 4丙氨酸 (脯氨酸 (酪氨酸 (缬氨酸 (蛋氨酸 (异亮氨酸 (亮氨酸 (苯丙氨酸 (色氨酸（ 赖氨酸 ( 18种氨基酸的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于黄酒中天冬氨酸 ( 赖氨酸 ( 18种氨基酸的测定，检出限为 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 6682 分析实验室用水规则和实验方法 3 原理 采用 异硫氰酸苯酯 衍生剂与黄酒中 氨 基酸进行衍生 反应 ， 氨基酸衍生产物 在 特定 紫外 波长有强 吸收 ， 经 外检测器检测，外标法定量分析。 4 试剂 腈 : 色谱纯。 醇：色谱纯。 硫氰酸苯酯 (99%)。 硫氰酸苯酯 的乙腈 溶液：移取 硫氰酸苯酯 ( 10量瓶中，用乙腈定容至刻度。 乙胺：分析纯。 乙胺 的乙腈 溶液：移取 乙胺 ( 10 量瓶中，用乙腈定容至刻度。 酸 钠：分析纯。 己烷：分析纯。 乙酸（ 。 0%乙酸溶液：取 1乙酸 (用高纯水 稀释到 10 盐酸 :分析纯。 .1 盐酸溶液：取 盐酸 （ ,用水定容至 100 基酸标准物质 ： 纯度 98%。 准储备液：准确称取各氨基酸标准品 确至 ， 用 0.1 盐酸（ 解后 ， 定容至 10匀，使其浓度为 储存在 下有效期为 1 年。 准工作液 ： 准确量取标准储备液（ 用水稀释，依次配制成 10g/20g/40g/0g/80g/标准溶液，现配现用 。 ： 6682 二级水。 5 仪器和材料 效液相色谱带有紫外检测器或二极管阵列检测器。 2 析天平（精度 涡混合器。 料离心管。 孔有机滤膜：孔径 m。 6 分析步骤 品 衍生 取黄酒样品 1.0 水定容至 10 200 于 2心管中 ,再加入异硫氰酸苯酯 的乙腈 溶液 (00 L、 三乙胺 的乙腈 溶液 ( 100 L， 混匀 ， 室温下放置 1 入 30 液 （ 取净化 在离心管中加入 400 ,漩涡混合器振荡 1 静置 10 注射器吸取下层溶液 ,收集 滤液 待 测定。 准样品前处理 分别 移取 200 准工作液 （ 。 置于 2心管中 ,加入异硫氰酸苯酯 的乙腈 溶液 (00 L、 三乙胺 的乙腈 溶液 ( 100 L， 混匀 ， 室温下放置 1 入 30 液 （ 。按 谱条件 谱柱： 谱柱 （ 250 .6 5 m） 。 动相及洗 脱程序见表 1。 表 1 梯度洗脱顺序 时间 / 乙 酸钠 (含 三乙胺 , 乙腈 / % 水 / % 起始 90 5 5 3 90 5 5 12 85 10 5 25 81 10 9 26 30 65 28 7 40 60 32 8 45 0 80 20 53 0 80 20 54 0 10 90 59 0 10 90 60 90 5 5 70 90 5 5 速： 1.0 样 体积 ： 10 L。 温 ： 38 。 测波长： 254 性 根据氨基酸标准样品的保留时间，与待测样品中组分的保留时间 进行定性 ， 定性色谱图参加附录 B。 3 标法 定量 将 系列 氨基酸使用溶液（ 按照 色谱条件（ 行测定，以 各 标准工作液 峰面积为纵坐标、浓度为横坐标 ，绘制标准曲线， 将 定 各 氨基酸 色谱峰面积，由标准曲线查得样品中的氨基酸浓度。 7 结果计算 品中各组分的含量按式（ 1）计算获得： 样品中各组分的含量按下式计算 ： 10 0010 00 （ 1） 式中 ： X 样品中各组分的含量，单位为（ ） ； C 从标准曲线求得样品中组分的含量，单位为（ ） ； F 样品 稀释倍数 为 10； 行测定结果用算术平均值表示，保留 2 位有效数字。 8 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的相对偏差不大于 10%。 4 附 录 A （资料性附录） 18 种氨基酸的分子式和相对分子量 18种氨基酸的分子式和相对分子量见表 表 8种氨基酸的分子式和相对分子量 名 称 英文名称 分子式 相对分子量 天冬氨酸 氨酸 氨酸 3氨酸 2氨酸 6氨酸 6氨酸 444氨酸 氨酸 氨酸 9氨酸 5氨酸 5亮氨酸 6氨酸 6丙氨酸 9氨酸 11氨酸 6B/T 5 附 录 B （资料性附录） 18 种氨基酸 标准样品 的 色谱图，见图 图 酒对照样品的 色谱图
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