大专《药物分析》教案

.教 案（大专）药物分析药学教研室 肖东 第一章 概 论组织教学1.掌握药品质量标准、中国药典、药品检验程序2.熟悉药物分析的性质及任务、药物分析统计学知识引入新课 第一节 中国药典一、基本概念1.药物分析：研究化学结构明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制方法，也研究中药制剂和生物制品及其制剂有代表性的质量控制方法。2.药品非临床研究质量管理规定GLP；药品临床试验质量管理规范GCP药品生产3.质量管理规范GMP；药品经营质量管理规范GSP；中药材生产质量管理规范GAP人用药品注册技术要求国际协调委员会ICH4.药品标准的内涵包括：真伪鉴别、纯度检查和品质要求。决定了药品的安全性、5.有效性和质量可控性。、精确度 药典规定取样量的准确度和试验精密度。6.药典：记载药品质量标准的法典；国家监督、管理药品的技术标准；法律约束力。各国药典现行版本：ChO2010,EP7,USP34,JP16二、中国药典：1953,63,77,85,90,95,00,05,10。ChP2010由一部、二部、三部及其增补本组成。 （一部）药材和饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂（二部）化学药品、生化药品、抗生素、放射性药品、药用辅料；（三部）生物制品内容分为:凡例、正文、附录正文每一品种项含：品名（包括中文名，汉语拼音名与英文名） 有机药物的结构式；分子式与分子量； 来源或有机药物的化学名称；含量或效价规定 处方；制法；性状；鉴别；检查； 含量或效价测定；类别；规格；贮藏； 制剂三、质量标准术语：1.凡例：为正确使用中国药典进行药品质量检定的基本原则。是对中国药典正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。2.正文:（药品标准）根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的来源、处方、生产工艺、贮藏运输条件等所制定的、用于检测药品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否均一稳定的技术规定。3.附录：包括制剂通则、通用检测方法和指导原则。1药品名称：列入国家药品标准的药品名称-称为药品通用名称-不得作为药品商标使用。INN-国际非专利药名。药品中文名称：须按照中国药品通用名称(China Approved Drug Names，CADN)。2.制法：对药品生产制备的重要工艺和质量管理的要求。3性状：外观性状、溶解度、物理常数：熔点、旋光度、吸收系数等可反映药品纯度。4鉴别：根据药物的某些物理、化学或生物学特性进行的试验，以判定药物的真伪。区分药物类别-一般鉴别试验；证实具体药物-专属鉴别试验。5检查：是对药物的安全性、有效性、均一性和纯度四个方面的状态所进行的试验分析6含量测定：方法：化学原料药-首选容量分析法、制剂-首选色谱法7制剂规格：系指每一支、片或其他每一个制剂单位含有主药的重量（或效价）或含量（%）或装量，即制剂的标示量。8检查方法和限度：原料药的含量-按重量计，制剂的含量限度-指标示量的百分含量表示时，范围95.0%-105.0%9标准物质：标准品：用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位(或g)计，以国际标准品进行标定.对照品：化学药品标准物质，按干燥品计算后使用。对照药材对照提取物-中药检验。参考品-生物制品10精确度（1）称重和量取：由有效位数确定：0.1g可称取0.060.14g；2g1.52.5；2.01.952.05；2.001.9952.005。精密称定-准确至所取重量的千分之一；称定-百分之一；精密量取-移液管的精度要求；量取-量筒；约-不得超过规定量的10%；恒重-连续2次重量差小于0.3mg。空白试验-不加供试品或等量溶剂替代供试液四、药品标准制定的原则：科学性、先进性、规范性、权威性原料药的结构确证：1样品要求：纯度99.0%，杂质0.5%。2结构确证方案：一般项目：有机光谱分析法：原子发射光谱法（AES）、原子吸收分光光度法含金属药物中无机元素测定；质谱-多肽；单糖-纸、薄层、HPLC、色质连用；得意他办公-凝胶色谱；手性-单晶X射线四圆衍射仪；晶型-粉末X-衍射、IR、熔点、热分析稳定性试验：影响因素试验、加速试验、长期试验药品检验工作的基本程序：药品检验工作的基本程序一般分为取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告药品取样的基本原则：均匀、合理第二章 药物的鉴别试验一、鉴别试验的内涵：1、根据药物分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学方法来判断药物真伪.2、中国药典和世界各国药典所收载的药品项下的鉴别实验方法均为用来证实贮藏在标有标签容器中的药物是否为所标示的药物而不是对未知物进行定性分析.3、方法应为专属，每个品种一般23次二、一般鉴别试验1、有机氟化物：氧瓶燃烧法碱性溶液吸收无机FpH4.3茜素氟蓝、硫酸铈蓝紫色络合物2、有机酸盐：水杨酸杨：FeCl3，紫色酒石酸盐：氨制硝酸银水浴内壁银镜3、芳香胺类：NaNO萘酚 (重氮化-偶合)4、托烷生物碱类：发烟硝酸水浴蒸干残渣醇溶KOH一粒深紫色（Vitali）5、焰色反应：钠-鲜黄；钙砖红；钡黄绿，绿色玻璃中蓝色6、铵盐：NaOH加热氨臭7、硝酸盐：硫酸+铜丝加热红棕色气体三、药物鉴别方法：化学法：要求反应迅速，现象明显.包括显色、沉淀、荧光、气体生成、试剂褪色、熔点测定.光谱法：紫外光谱(测定max或同时测定min；规定一定浓度供试液在max处的A；规定和E；规定1/2；经化学处理后测定产物的吸收光谱特征)；红外光谱(专属性强，应用广)色谱：1.薄层色谱TLC：定性参数为RP值；不同类药物不能互相干扰；应确证TLC的专属性. 2.HPLC：要求供试品和对照品色谱峰保留时间一致.射线粉末衍射法生物学法：微生物或动物实验鉴别的方法.指纹图谱与特征图谱鉴别法显微鉴别法鉴别试验一般需要对方法的专属性和耐用性进行验证小结：作业：补充的练习题5min15min10min30min5min20min5min第三章 药物的杂质检查组织教学1.掌握药物的纯度要求2.掌握杂质的检查方法3.掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、金属检查、砷盐检查、酸碱度检查复习旧课引入新课 第一节 概 述一、杂质：Chp将任何影响药品纯度的物质均称为杂质。二、来源：1生产过程引入；2贮藏过程中受外界条件影响，引起药物理化特性变化而产生。三、分类：按来源分类1一般杂质(生产和贮藏过程中容易引入的杂质)2特殊杂质：特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，也常称为有关物质，这类杂质随药物的不同而不同。四、杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量。杂质限量=杂质最大允许量/供试品量100%杂质控制方法：1限量检查法：通常不需要测定准确含量，只检查杂质是否超过限量。（1）对照法：杂志限量(%)=标液浓度*标液体积/供试品量*100%。（2）灵敏度法：在供试品溶液加入一定量试剂，在一定条件下不得有正反应出现（3）比较法：取一定量供试品依法检查，测定特定待检杂志参数与规定限量比较三、杂质的检查方法：1化学方法：（1）显色反应检查法（2）沉淀反应检查法（3）生成气体检查法（4）滴定法2色谱方法：TLC、HPLC、GC，杂质对照品法、供试品自身稀释对照法。TLC,要求主斑点颜色不得更深。3光谱法：紫外-可见、红外、原子吸收分光光度法（用于金属杂质检查）4其他方法：（1）热分析法：热分析：是在程序控制温度下，精确记录物质的物理化学性质随温度变化的关系，研究物质在受热过程中所发生的晶形转化、熔融、蒸发、脱评价药品水等物理变化，或热分解、氧化、还原等化学变化，以及伴随发生的温度、能量、或重量改变的方法a.差热分析(DTA)：在程序控制温度下测量试样与参比物之间温度差T与温度关系的一种技术b.差示扫描量热法(DSC)：在程序控制温度下测量传输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术.c.热重分析法(TGA)：应用热天平在程序控制温度的条件下测量物质的质量随温度变化，纪录变化曲线(热重曲线)从而准确测量变化和变化速度.（2）酸碱度检查法（3）物理性状检查法： 第二节 一般杂质检查一般杂质检查：检查内容：氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、干燥失重、水分、易炭化物、残留溶剂、溶液颜色、溶液澄清度。检查无机杂质对评价药品生产工艺状况有重要意义。一、氯化物检查法：1.原理：药物中微量氯化物在硝酸酸性条件下与AgNO3反应，生成AgCl胶体微粒而显白色浑浊，与一定量标准NaCl溶液在相同条件下反应产生的AgCl浑浊程度比较不得更深。2方法：样品溶解/标准氯化钠溶液(10g Cl/ml)，50mL纳氏比色管，+稀HNO310mL +水至40mL +AgNO3试液1.0mL +水至50mL ,暗处放置5min，比较.(氯化物浓度以50mL中含5080g的 Cl为宜)加稀酸排除硝酸银盐干扰。3.注意事项：(1)比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察(2)平行操作原则(3)供试品溶液如带颜色，可采用内消色法(倍量法)；外消色法：如KMnO4中氧化物的检查，可先和乙醇适量还原后再依法检查二、硫酸盐检查方法：在稀盐酸酸性条件下与氯化钡反应，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比较。铁盐检查法：铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后进行比色。三、重金属(铅)检查法：重金属概念：重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。以铅限量表示重金属的限度。第一法：硫代乙酰胺法。适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判定供试品中重金属是否符合限量规定。第二法:炽灼后的硫代乙酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物第三法：硫化钠法适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物四、砷盐检查法：古蔡氏法：原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，颜色不得更深。试验中醋酸铅棉花作用：用来吸收锌粒或供试品可能产生的硫化氢气体。注意事项：1.供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等在酸性溶液中生成HS2或SO2，与溴化汞生成黑色硫化汞或金属汞，干扰砷斑检测。应先加硝酸使氧化成硫酸盐；2供试品为铁盐，消耗还原剂，先加酸性氯化亚锡试液使高铁离子还原为低铁离子；3环状结构的有机药物要先进行有机破坏(碱和酸)；4.含锑药物，锑化氢干扰砷盐的检出(SbH3 + HgBr2SbH2(HgBr) + HBr)，改用白田道夫(Betterdorff)法五、二乙基二硫代氨基甲酸银法：原理：金属锌与酸作用产生新生态氢，与微量砷盐反应生成具有挥发性的砷，还原二乙基二硫代氨基甲酸银，产生红色胶态银，同时在相同条件下使一定量标准砷溶液呈色，用目视比色法或在510nm波长处测定吸光度进行比较。六、干燥失重测定法：主要检查药物中的水分及其他挥发性成分。干燥失重的量应恒重。干燥至恒重的第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1小时后进行.1常压恒温干燥法：适用于对热稳定的药物，如：乌苯美司，卡巴胆碱，尼莫地平.需在105下干燥至恒重.2(恒温)减压干燥法：适用于熔点低或受热易分解的供试品，常用干燥剂为：无水氯化钙、硅胶、五氧化二磷.3.干燥剂干燥法：适用于受热分解或生化的药物，常用硅胶、硫酸和五氧化二磷等七、炽灼残渣：指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。残留溶剂测定法分类：1有机溶媒毒性大，且具有致癌作用并对环境有害尽量避免使用；2有机溶媒对人有一定毒性应限量使用；3有机溶媒对人健康危险性小推荐使用；4对人或环境无足够数据证明有危害，应根据生产工艺特点制定相应限度，使其满足各种相应质量要求.；第四章 体内药物分析一、血样中蛋白质的去除：加入与水混溶(1:13)的有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃等)加入中性盐(1:2)(饱和硫酸铵，硫酸钠，Mg2+，磷酸根，枸橼酸盐等)加入强酸(1:0.6)(10%三氯醋酸，65%高氯酸，5%偏磷酸)，可用煮沸分解或加碱中和沉淀法去除.加入含锌盐(1:2)及铜盐的沉淀剂酶解法(枯草菌溶霉素)二、尿样中缀合物的水解：常用酸水解，但酶水解选择性高，很少使用被测药物或共存物降解，故优先使用蛋白质分离，纯化与浓缩：液液萃取法(LLE)选择性高，乙醚，三氯甲烷选用溶剂要求a对被测组分溶解度大，沸点低，易于挥发浓缩；b与水不相混溶c无毒，化学稳定，不易乳化.液固萃取法(LSE)a较少引入杂质，b消除了LLE中的乳化现象，c萃取率高d在组后洗脱中多采用水为溶剂系统，大大增强了安全性e处理样品速度快，并可在室温下操作.三、体内药物分析的特点:1体内样品需经分离与浓集，或经化学衍生化处理后才能进行分析，2对分析方法的灵敏度及专属性要求较高，3分析工作量大，测定数据的处理和结果的阐明比较繁杂四、定量分析方法的验证：(注：与药物分析方法验证的不同点)1.特异性：必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定.2.标准曲线和线性范围：必须至少6个浓度建立标准曲线，不许外延.建立标准曲线时应随行空白生物样品，但标准曲线不包括零点.精密度与准确度：RSD8有机弱碱性药物及其盐类，PKb8-13用本法，PKb8-10时冰醋酸作溶剂PKb10-12冰醋酸与醋酐12醋酐。也可在冰醋酸中加入甲酸使滴定突跃增大溴量法：（原料药：盐酸去氧肾上腺素 重酒石酸间羟胺）：分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、对位活泼氢能与过量的溴定量的发生溴代反应，再以碘量法测定剩余的溴，根据消耗的硫代硫酸钠滴定液的量，即可算供试品含量。紫外分光光度法及比色法：（制剂）利用分子结构中的酚羟基与铁离子络合呈色，测定盐酸异丙肾上腺素和盐酸多巴胺注射液；利用重氮化-偶合反应呈色，测定盐酸克伦特罗栓剂。4，亚硝酸钠法 5提取酸碱滴定法：游离出原药6，HPLC小结：作业：补充的练习题5min10min20min10min10min30min5min 第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类组织教学1.掌握芳胺类药物的结构与性质2.掌握芳胺类药物的鉴别、杂质检查、含量测定复习旧课引入新课一、对氨基苯甲酸酯类：苯佐卡因，盐酸普鲁卡因，盐酸氯普鲁卡因胺，盐酸丁卡因等局麻药酰苯胺类：（水解后显芳伯胺特性）盐酸利多卡因，盐酸布比卡因，盐酸罗哌卡因，对乙酰氨基酚，醋氨苯砜（一）理化性质:芳伯胺基（除盐酸丁卡因外，仲胺基）特性：显重氮化偶合反应。1.芳伯氨基：重氮化偶合反应；用NaNO2滴定可测含量，与芳醛缩合成Schiff碱；易氧化变色等。2.水解：因分子中有酯键，故易水解.水解反应速度快慢受光、热或碱性条件影响；盐酸丁卡因BABA，其余药物PABA3.弱碱性：叔胺氮原子，生物碱沉淀剂发生沉淀反应，非水溶剂滴定4.溶解性：游离碱，油状液体或低熔点固体难溶于水，易溶于有机溶剂；盐酸盐白色结晶粉末，具一点的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂5，重金属离子反应酰胺基上的N可在水溶液中与铜离子或钴离子络合，形成有色配位化合物沉淀，溶于氯仿呈色6，吸收光谱特性：苯环及相应取代基于脂烃胺侧链，有UV,IR行为。（二）鉴别反应 1、重氮化-偶合反应Ar-NH2 -Hcl、/NaNO2重氮盐OH和-萘酚橙黄-猩红色沉淀.a直接法(苯佐卡因、盐酸普鲁卡因) 橙黄-猩红色沉淀。b间接法(盐酸丁卡因无芳伯胺基酸性条件乳白色沉淀)红色.2、三氯化铁反应（对乙酰氨基酚）：具酚羟基的芳胺类药物+FeCl3蓝紫色配合物3、与重金属离子的反应a盐酸利多卡因的鉴别(具有芳酰胺结构):硫酸铜/碳酸钠试液蓝紫色配合物显黄色(溶于氯仿)/氯化钴/酸性溶液亮绿色细小钴盐沉淀b.盐酸普鲁卡因胺的鉴别(具有芳酰胺结构):浓过氧化氢/加热至沸羟肟酸 三氯化铁羟肟酸铁变紫红色，随即变为暗棕色至棕黑色.c.与汞离子反应：芳酰胺类，如盐酸利多卡因 ，硝酸汞/硝酸煮沸变黄色；对氨基苯甲酸酯类，如苯佐卡因：硝酸汞/硝酸煮沸变红色或橙黄色.4、水解产物反应：a.盐酸普鲁卡因(的鉴别)10氢氧化钠溶液白色(普鲁卡因)加热变为油状物；继续加热 蒸气(二乙氨基乙醇)能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色；加热至油状物消失放冷、加盐酸酸化白色(对氨基苯甲酸)能溶于过量的盐酸.b.苯佐卡因(鉴别)氢氧化钠试液5ml 煮沸乙醇，加入碘试液/加热 黄色并发生碘仿臭气. 5、制备衍生物测熔点：a.盐酸利多卡因/盐酸布比卡因 三硝基苯酚 (滤过，用水洗涤沉淀后105干燥)三硝基苯酚利多卡因(mp. 228232)/ (80干燥)三硝基苯酚布比卡因(mp. 194).b.盐酸丁卡因 25硫氰酸铵溶液/5醋酸溶液 白色晶体，洗涤80干燥后得丁卡因硫氰酸盐( mp. 131 )。（三）特殊杂质1盐酸普鲁卡因(对氨基苯甲酸)：a杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇 。结果导致注射液变黄、疗效下降、毒性增加。原料药及注射用灭菌粉末中杂质限量 ：0.5%。注射液中杂质限量： 1.2% b检查：（1）HPLC杂质对照品法。固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：0.1%庚烷磺酸钠的0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(6832)；检测波长：279；系统适用性试验：理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000；盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0 ；外标法以峰面积计算。（2）TLC法：硅胶H板，苯-HAc二甲氨基苯甲醛显色3有关物质和光解物检查：4-氨基-2-氯苯甲酸降解2，对乙酰氨基酚：1）乙醇溶液的澄清度与颜色2）有关物质：TLC，杂质斑点颜色，个数3 ）对氨基酚 与亚硝基铁氰化钠反应显蓝色，不得更深含量测定1亚硝酸钠滴定法：原理：芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法电位法或内指示剂法外指示剂法（KI-淀粉） 指示反应终点。 条件：A.加入适量溴化钾加快反应速度，增加NO+浓度B.加入适量盐酸加快反应速度C.反应温度越高反应越快，但温度高时重氮盐分解加快，HNO2也会挥发D.滴定速度不宜太快，滴定管尖端插入液面下滴定。示例8-5 盐酸普鲁卡因的含量测定： 取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法，在1525，用亚硝酸钠滴定液滴定。每1ml亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于27.28mg的C13H20N2O2HCl。永停滴定法：铂铂电极系统。用亚硝酸钠液滴定，终点前，溶液中无亚硝酸，线路无电流，电流计指针零。终点时溶液中有微量亚硝酸存在，电极即起氧化还原反应，线路中有电流通过，此时电流计指针突然偏转，不再回复，即为终点。2非水滴定法(盐酸丁卡因、盐酸利多卡因、盐酸妥卡因：三者结晶紫显色蓝绿 盐酸布比卡因：萘酚苯甲醇显色绿色)滴定前滴加醋酸汞溶液，以除去氢卤酸的干扰a非水滴定法中常见酸根的影响及其消除方法氢卤酸根：算性强，无法完全滴定，消除方法：加入氯化汞的冰醋酸溶液。硝酸根：滴定产生硝酸，会氧化显色剂影响显色剂显色，消除方法：改用电位法滴定。b比较直接滴定法和两部滴定法测定阿司匹林含量优缺点：直接滴定法：阿司匹林中性乙醇溶解后其中的羧基和氢氧化钠反应，酚酞指示终点。快速简便，不能排除水杨酸干扰。两部滴定法：先中和酸性杂质和羧酸，然后定量加入过量的氢氧化钠，定量与酯键反应，剩余的用酸滴定至终点即可，可消除水杨酸干扰，但操作较麻烦。第九章 二氢吡啶类药物一、二氢吡啶类理化性质：1二氢吡啶环的还原性，2硝基的氧化性，3二氢吡啶环氨基质子解离性，4稳定性，光化学反应5旋光性，6吸收光谱特性二、鉴别反应：1亚铁盐反应：硝基氧化性红棕色氢氧化铁沉淀2氢氧化钠试液：药物丙酮溶液橙红色 （鉴别硝苯地平、尼群地平、尼索地平）3沉淀反应：与金属盐形成沉淀HgCl白色 碘化铋甲 橙红色4重氮化偶合反应：苯环硝基在酸性下被锌粉还原为芳伯氨基，可用重氮化偶合反应鉴别5分光光度法：紫外红外有关物质检查：分子内部因发生光化学歧化作用，降解为硝苯吡啶衍生物及亚硝苯吡啶衍生物，大多采用HPLC法，亦分为对照品法和自身对照法.三含量测定;铈量法：利用还原性，以Ce(SO4)2为标准溶液的滴定法，Ce4+变为Ce3+。邻二氮菲为指示液，强酸条件，橙红色消失小结：作业：额外布置的作业5min15min10min10min20min25min5min 第十章 巴比妥及苯并二氮杂坐类镇静催眠组织教学1.掌握巴比妥类药物的结构与性质2.掌握丙二酰脲鉴别、钠盐鉴别、取代基鉴别3.掌握银量法测定含量复习旧课引入新课第一节 巴比妥类药物分析一、主要性质：环状酰胺类镇静催眠药1.基本母核：丙二酰脲基团决定共性.2.取代基决定个性.性质：酮式烯醇式互变.弱酸性，可用于该类药物的分离，鉴别，检查和含量测定与金属离子反应：专属性不强，用于鉴别和含量测定.A与银盐反应：在Na2CO3溶液中，最初生成白色沉淀，振摇后可溶解，之后生成白色沉淀，不再溶解.B与铜盐反应：在吡啶溶液中生成烯醇式异构体，并与铜形成稳定的配合物，巴比妥类呈紫色，含硫巴比妥呈绿色.C与汞盐呈白色沉淀(氨试液中溶解)D、与钴盐反应：无水条件下与钴盐在碱性溶液中生成紫堇色配合物.E与香草醛反应：丙二酰脲中的氨与香草醛在弄硫酸存在下缩合，生成棕红色产物.二、特殊杂质检查苯巴比妥.酸度检查，甲基橙不得显红色（控制苯基丙二酰脲）.乙醇溶液澄清.中性或碱性物质检查（2-苯基丁酰脲、2-苯基丁酰胺不溶于氢氧化钠但溶于乙醚），提取重量法测杂质含量.三、苯巴比妥含量测定：银量法、溴量法、酸碱滴定法、UV法、HPLC、GC、提取重量法.1.银量法：以硝酸银为滴定液，以沉淀反应为基础的滴定分析.此法操作简便，专属性强，巴比妥类药物的分解产物或其他一些可能存在的杂质不与硝酸银反应.采用甲醇及3%无水碳酸钠溶剂系统，采用Ag-玻璃电极系统电位法指示终点.每毫升硝酸银滴定液相当于22.63mg异戊巴比妥.2.溴量法：凡在5取代位基团中含有不饱和双键的巴比妥药物，其双键可以与溴定量发生加成反应.采用过量定量溴反应，再用KI滴定剩余溴生成碘，再用硫代硫酸钠滴定，操作简便，专属性强，针对结构中双键特征，可与其他巴比妥类药物区别第二节 苯并二氮卓类药物一、化学性质:具弱碱性，故可用非水滴定法进行滴定;水解性在强酸性溶液中本类药物可水解-二苯甲酮衍生物。二、化学鉴别方法沉淀反应：可与生物碱沉淀剂（碘化铋甲）作用生成橙红色沉淀（氯氮卓）硫酸荧光反应：本类药物溶于硫酸之后，在356nm下显不同色荧光：地西泮黄绿、氯氮卓黄色. 特征基团反应氯化物鉴别（地西泮）氧瓶燃烧法芳伯胺反应即重氮化-偶合反应（鉴别奥沙西泮、艾司唑仑）色谱法（TLC）三、特殊杂志检查 1、氯氮卓（TLC、HPLC）2、三唑仑（GC）四、含量测定1、非水溶液滴定法（碱量法、酸量法）2、紫外3、HPLC（RP）第十一章 吩噻嗪类药物一、主要理化性质：1、紫外吸收光谱特征：硫氮杂蒽母核为共轭三环伪介系统，一般在紫外已有3个吸收峰，205nm，254nm，300nm，最强峰在254nm附近.2、红外吸收光谱特征：由于R,R不同，具有不同的IR光谱，明显指纹差异.3、与金属离子配合显色：二价硫可与钯离子形成有色配位化合物，而氧化的砜与亚砜无此反应，专属性强.4、氧化显色：二价硫易被氧化.樱红-红色(鉴别).二、鉴别试验：化学法：1、与生物碱沉淀剂2、氧化显色（用于鉴定）3、与钯离子配合呈色反应（鉴别不受亚砜和砜干扰）4、与含卤素取代基反应（1、焰色反应 奋乃静（氯元素绿色）2、显色反应（F有机破坏，酸性条件与茜素锆黄色）5、Cl化物鉴别（硝酸银沉淀 MnO2氧化还原）光谱法：Uv（205nm、254nm，300nm最大吸收，避光操作），IR（主要方法）色谱法：1、TLC（加碱液减轻拖尾） 2、HPLC (盐酸氟奋乃静)其他方法：熔点测定 三、含量测定：1、酸碱滴定（非水溶液、乙醇-水溶液中氢氧化钠滴定）2、分光光度法（直接、提取后/双波长、二阶导数、钯离子比色法）3、HPLC（RP、离子对）4、LC-MS小结：作业：补充的作业5min30min25min25min5min 第十四章 抗生素类药物的分析组织教学1.掌握-内酰胺类药物的鉴别、杂质检查、含量测定2.熟悉抗生素类药物的质量分析方法3.熟悉氨基糖苷类药物的鉴别和含量测定复习旧课引入新课 第一节 概 述一、抗生素：在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特定抑制作用的化学物质的总称.二、特点（与化学药相比）：化学纯度低活性组分易发生变异稳定性差.第二节 -内酰胺类：一、基本结构青霉素：-内酰胺环和氢化噻唑环，头孢菌素：-内酰胺环和氢化噻嗪环1.性质：酸性：大多数青霉素能与无机碱或某些无机碱成盐旋光性紫外吸收：具苯环取代基的青霉素类(侧链取代基有共轭系统)，头孢菌素类(母核有共轭结构)-内酰胺类的不稳定性：-内酰胺环是最不稳定的地方，如与酸、碱、青霉素酶、羟胺及某些金属离子（铜、铅、汞和银）等作用时，易发生水解和分子重排，导致-内酰胺环的破坏而失去活性。干燥条件稳定，溶液很不稳定，但青霉素水溶液在PH66.8时较为稳定.二、鉴别试验：色谱法（HPLC、TLC）光谱法（IR、UV：水解产物的最大吸收波长鉴定法）呈色反应(i)羟肟酸铁反应(ii)双缩脲反应(iii)茚三酮反应.各种盐的反应，钾钠离子火焰反应三、特殊杂质的检查：1.HPLC法聚合物(为致敏物质，严重可影响用药安全性)(i)方法：分子排阻色谱法，离子交换色谱法，反响高效液相色谱法(ii)来源：内来源：药物自身聚合物生产贮存过程中，或使用不当产生.外来源：蛋白多肽多糖及其与药物的结合物发酵中纯化不当.(iii)定量方法：自身对照外标法.凝胶对药物的吸附作用大于对高分子杂质的吸附作用，高分子杂质先流出，一般用于Sephadex G-10凝胶色谱系统中高分子杂质的检查。主成分自身对照法，一般用于高分子杂质含量较低的品种。面积归一化法限量法，规定不得检出保留时间小于对照品保留时间的组分，一般用于混合物中高分子物质的控制。有关物质和异构体：(i)有关物质多为降解产物，中间体，影用药安全性(ii)异构体低效.无效异构体影响效价.四、含量测定：1.HPLC法：应用越来越广泛，是分离分析法，专属性强.2.酸碱滴定法（苯唑西林钠）3.紫外-可见分光光度法4.碘量法（苄星青霉素）青霉素或头孢菌素分子不消耗碘，其降解产物消耗碘。反应两步进行：一是按化学计算量进行；二是青霉噻唑烷酸在酸性条件下被碘氧化的反应受温度、pH、时间等诸多因素影响，故耗碘量没有固定的量关系。因此试验过程中要严格控制温度，同时采用与青霉素标准品平行对照测定，则可抵消上述可变因素的影响。碘与青霉噻唑酸的作用以Ph4.5，温度在2426为最好。1摩尔青霉素能吸收8摩尔的碘,故本法的灵敏度较高。5.汞量法（青霉素钠、青霉素钾）青霉素分子不与汞盐反应，而其碱性水解产物青霉噻唑酸及继续水解生成的青霉胺都能与汞盐定量反应，根据消耗的汞盐量可以计算青霉素的含量。第二节 氨基糖苷类一、化学结构：以碱性环己多元醇为苷元，与氨基糖缩合而成的苷.二、性质：溶解度及碱性：水溶解性良好具有旋光性苷的水解与稳定性，强酸，强碱均可使其溶解UV,链霉素在230nm处有紫外吸收.三、鉴别试验茚三酮反应：生成蓝紫色缩合物N-甲基葡萄糖胺反应：生成樱红色麦芽酚反应：紫红色坂口反应生成橙红色化合物硫酸盐反应.Molisch试验-蓝色色谱法：TLC、HPLC光谱法：IR、UV组分测定用HPLC法测定庆大霉素C各组分含量，其无紫外吸收，故需进行衍生化处理，采用归一化法测定庆大霉素含量，用峰高归一化法计算。四、含量测定微生物检定法和HPLC法第三节 四环素一、性质：1)为两性化合物，临床多用盐酸盐2)具有旋光性3)存在共轭体系，有紫外吸收4)稳定性：差向异构化性质：四环素类抗生素在弱酸性（Ph2.0-6.0）中发生差向异构化，四环素、金霉素产生差向四环素ETC和差向金霉素（具蓝色荧光）；土霉素、多西霉素、美他环素不发生。四环素在碱性产生异四环素。四环素降解 酸性降解：在酸性条件下（PH2）四环素、金霉素生成脱水四环素ATC和脱水金霉素。碱性降解：在碱性溶液中，生成无活性的具有内酯结构的异构体。二、鉴别实验1、HPLC 2、TLC，用硅藻土作载体，为了获得较好的分离，在黏合剂中加有甘油以及中性的EDTA缓冲液，EDTA可克服因痕量金属离子存在而引起的斑点拖尾现象。 3、IR 4、UV 5、显色法：a浓硫酸反应；b FeCl3反应.第十八章制剂分析概论一、药物制剂分析的特点 1)比原料药物分析复杂2)测定项目和要求不同：若原料中的检查项目在制剂生产.贮藏和使用过程中不再产生，则不在制剂中检查 3)杂质限量要求不同 4)分析方法的要求不同鉴别试验从化学法、光谱法、色谱法及其他方法中选用24种不同原理组成一组鉴别试验。二、片剂的常规检查项目1)重量差异：按规定称量方法测得片剂每片的重量与平均片重之间的差异程度 2)含量均匀度 对小剂量口服固体制剂、粉雾剂或注射用无菌粉针剂 每片含量偏离标志量的程度 取10片3)崩解时限：固体制剂在规定介质中，以规定的方法进行检查，崩解溶散并通过筛网所需时间的限度6片4)溶出度的检查(针对难溶性药物)：篮法、桨法、小杯法，药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速率和程度6份，5)释放度测定：第一法-缓控释制剂，第二法-肠溶制剂。三、注射剂的检查项目：1)装量：必须保证注射液注射用量不少于标志量；内容物吸尽；注入经标化的量入式量筒内2)渗透压摩尔浓度，3)可见异物-第一法灯检法，第二法光散射法，4)无菌检查：阴性、阳性对照5)热原：家兔法6）细菌内毒素检查：凝胶法、光度测定法7)不溶性微粒-第一法光阻法，第二法显微计数法.四、制剂中常见干扰及排除：片剂1)糖类：会干扰氧化还原滴定，可采用弱氧化剂硫酸铈代替高锰酸钾 2)硬脂酸镁：Mg2+会干扰配位滴定法，硬脂酸根离子可干扰非水滴定法：a加掩蔽剂掩蔽Mg2+b若主药含量大，硬脂酸镁含量小，可不考虑对非水滴定的影响c脂溶性药先有机溶剂提取 小结：作业：补充的练习题5min10min25min20min10min15min5min.