工业用溶菌酶行业标准征求意见稿

69 华 人 民 共 和 国 轻工 行 业 标 准 业用溶菌酶 击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （征求意见稿） 布 施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 前 言 本标准按照 本标 准由 全国食品发酵标准化中心 提出并归口。 本标准 主要 起草单位： 本标准 主要 起草人： 工业用溶菌酶 1 范围 本标准规定了 工业用溶菌酶 的术语和定义、 产品 分类、要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输及贮存。 本标准适用于从鸡蛋清中提取 、 精制等工艺制得的 工业用 溶菌酶。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 601 化学试剂 标准滴定溶液的制备 602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 食品安全国家标准 食品中水分的测定 食品安全国家标准 食品中灰分的测定 6682分析实验室用水规格和试验方法 3 产品 分类 按 产品状态 分为 固体和液体 。 4 要求 官要求 应符合表 1的 规定。 表 1 感官要求 项 目 要 求 固体 液体 状 态 粉末 液态 色 泽 白色至淡黄色 浅黄色至深褐色 化要求 应符合表 2的规定。 表 2 理化要求 项 目 指 标 固体 液体 酶活力 /u/mg( 符合标示值 水分 /% 6 灰分 /% .3 菌 作用 合格 品安全要求 应符合 国家相关 规定。 5 试验方法 本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合 6682级 水的规格，所用试剂，在未注明其他规格时，均指分析纯 （ 分析中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂 及制品，在没有注明其它要求时，均按 601、 602、 603的规定制备。 官要求 取适量 试样 ，在自然光线下， 观察 试样 的 色泽 和 状态 ， 并记录 。 活力 法原理 溶菌酶可水解细菌的细胞壁，造成藤黄微球菌的溶解而引起溶液吸光度值的降低。 一个溶菌酶活力单位定义为 25 ， 用藤黄微球菌悬浊液在 450 剂和溶液 黄微球菌 698 或 同等分析效果 。 菌酶标准品 蛋清溶菌酶 。 .1 磷酸盐缓冲液 （ 称取 g 磷酸二氢钠（ g 磷酸氢二钠（ 2及 二胺四 乙 酸二钠 （ 于煮沸灭菌的 水 中并 稀释定容至 1000 整缓冲溶液 注：用小份缓冲溶液检查 避免缓冲溶液被污染。如果需要，通过加入更多的磷酸二氢钠溶液或磷酸氢二钠溶液调整 缓冲液可 贮 存于冰箱一个月以上 。 物溶液 称取（ 10 15 球菌，溶解于 50 ，倾斜混匀，不要晃动。使用前，底物于 37 培养 30 底物溶液室温下 可稳定 2 h。 以磷酸盐缓冲液调分光光度计零点，然后测定底物溶液的吸光度， 450 器和设备 光光度计：精度 。 注：所用的器皿应保持无菌，保证工作环境的清洁。 析步骤 样溶液 的制备 准确称取 100 .1 样，置于 50 量瓶中，用约 25 酸 盐 缓冲液（ 拌溶解并稀释定容，充分混匀。再转移 3 述 试样制 备 溶液至 100 量瓶中，用磷酸 盐 缓冲液（ 拌溶解并稀释定容 。 准溶液的制备 精确称取 50 菌酶标准品于 50 量瓶中， 用约 25 酸 盐 缓冲液（ 拌溶解并稀释定容，充分混匀 （ 如果需要，冷冻该溶液以备后续测定 ） 。转移 3 述 标准制备 溶液 至 100 磷酸 盐 缓冲液（ 拌溶 解并稀释定容 。 定 取三份标准溶液和三份试样溶液进行测定。 25室温下，将 1 色皿放入分光光度计，调整吸光度零点。吸 2.9 物溶液于比色皿，最初 450 吸光度应为 3 内初始吸光度值变化应小于等于 ，方可开始测定。吸 0.1 准溶液加入底物溶液，充分混合。记录 3 光度值的变化，每 15 s 记录一次吸光值。每分钟吸光度值变化应在 间，若不在要求范围需调整试样溶液的浓度。重复操作测定试样溶液。 反应 1 稳定，计算时忽略最初 1 读数。 果计算 酶活力 按式（ 1）计算，数值以 u/mg(示。 11 （ 1） 式中： 试样的酶活力 ， 单位为 u/mg( 试样 在 450 反应 1 的吸光度； 试样 在 450 反应 3 的吸光度； m 用于分析的 试样 制备 溶液 中的溶菌酶质量， 单位为毫克（ ； 2 获得 1 3 光度读数所用的时间 ，单位为分钟（ ； 由单位溶菌酶每分钟引起的吸光度降低的值 。 密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的 10 %。 分 按 定。 分 按 定。 5.5 仪器 和设备 酸度计：精度 备有玻璃电极和甘汞电极（或复合电极）。 析步骤 定 按仪器使用说明书调试和校正酸度计。 用新煮沸冷却的 水 配制 15 g/L 的溶菌酶待测液（液体产品直接测定） 。 用水冲洗电极探头，用滤纸轻轻吸干，将电极插入待测液中，调节温度调节器，使仪器指示温度与 待测液 温度相同，稳定后读数。 所得结果表示至一位小数。 密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的 1 %。 菌 作用 剂 和溶液 试菌 ： 金黄色葡萄球菌（ 538）、大肠埃希氏菌（ 1229） ； 蛋白胨（生化试剂） ； 脂粉（生化试剂） ； 母提取物（生化试剂）； 化钠 ； 氢氧化钠溶液 ； 菌生理盐水 。 器 和设备 子天平 ； 净工作台； 压灭菌锅； 温培养箱； 床； 持比浊计； 量移液器 ； 标卡尺 养皿（ 90 菌枪头盒（ 配有 10 L， 200 L， 1000 菌棉签； 菌打孔器 种环 ； 角涂布棒 ； 菌带棉塞试管 （ 18 180 口膜 。 析步骤 培养基 的配制 体培养基： 称取 10 g 胰蛋白胨， 5 g 酵母提取物和 10 g 氯化钠，置于烧杯中， 加入约 600 玻璃棒 搅拌使 溶解 。 用 1 氢氧化钠溶液 调节 加水定容至 1000 加入琼脂 15 g，加热融化 。 分装、加塞、包扎 ， 100 高压蒸 汽灭 菌 20 在超净台 中 将培养基倒入培养皿 ，每板约 20 度约 2 倒入后 水平放置，打开 塞子 ， 紫外 照射（ 10 15） 凝固后，用封口 膜 封边，倒置放入 30 恒温培养箱中， 2 d 后观察若 无 菌落生长 可 继续进行 试验 ，否则需重新倒平板。 体培养基： 称取 10 g 胰蛋白胨， 5 g 酵母提取物和 10 g 氯化钠，置于烧杯中， 加入约 600 玻璃棒搅拌使 溶解 。 用 1 氢氧化钠溶液 调节 水定容至 1000 分装、加塞、包扎 ， 100 高压蒸 汽灭 菌 20 冷却 后置于 4 下 保存， 一周 内使用。 试菌株活化 和 涂布 取 供试菌 置于 37水浴 解冻，不断轻微摇动，直至完全溶解（约 2 在无菌 环境 下，接种环在酒精 灯烧过冷却后，直接蘸 取 已溶解 的 菌液进行划线，接种于 体培养基， 平板倒置 放入 37恒温培养箱中培养 18 h。从 平板 中挑单菌于加有 5 B 液体培养基带棉塞的试管（ 18 180 ，置于 37、 150 床中培养至 1.0 2.0 间 ，菌液保存于 4冰箱中备用。吸取 100 液涂注入培养皿（ 90 放置 约 5 用 三角涂布棒 涂布均匀， 5 再用封口膜封边，倒置于 37恒温培养箱中培养 18 h，保存于 4冰箱中备用。 样溶液 的制备 取适量 试样 溶解 于 100 菌生理盐水 中， 移取 上述溶液 10 容至 100 到试样溶液（要求 每毫升 试样溶液 中 至少含有 20000 U 浓度的溶菌酶 ，否则需重新配制 ） 。 取 试样溶液 50 观察抑菌效果。 注 1： 用无菌生理盐水溶解 时 ， 须 将 产生的 泡沫全部洗至无菌生理盐水中。 注 2：试样溶液 严禁高温消毒。 定 在超净台里 ， 用接种环（酒精灯 烧过 后冷却 至室温 ）从 4冰箱保存的供试菌株涂布 平板 中轻刮一环菌体， 于 加有 5 菌生理盐水的试管中， 振 荡均匀，制成菌悬液。 用 无菌生理盐水调整浊度 ， 氏标准比浊管相同 （或者 手持比浊计 测 ，相当于 108 每毫升样品中含有的细菌菌落总数 ） 。 制备的菌液必须在 15 使用 。 用无菌棉 签 蘸取 供 试菌悬液， 在管壁上挤压几次 ， 去掉过多的菌液 后， 在 平板 培养基表面均匀涂抹3 次。每涂抹 1 次，平板应转动 60，最后将棉 签 绕平板边缘涂抹 2 圈，保证涂布均匀。 盖好 平板 ， 室温 下静置 30 每种 供 试菌 设两个重复平板 。 在超净台 中 用 直径为 5 菌打孔器 （不锈钢或玻璃管或塑料管）打孔 ， 用针头 挑取孔内凝胶 ，并以 酒精灯 火焰封底， 使培养基 与 培养皿充分 融合。 各 圆孔 中心之间相距 25 上，与平板的周缘 相距 15 上。 每个 平板 需要一个重复。 给每个孔标号，每孔进样 50 L，同时留一孔进 50 L 无菌生理盐水做对照组。盖好 平板 ，用 封口膜 封边， 正置 放入 4冰箱中 2 h，再 倒置 放入 37培养箱中培养， 18 h 后取出，观察结果并测量抑菌圈大小。 测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行 ， 其直径应以抑菌环外沿为界 ， 抑菌环的 外沿 以肉眼 看不见 细菌明显生长为限。溶菌 环 不圆时， 测定 最大及最小直径求其平均直径。用游标卡尺测量抑菌环的直径 （ 包 括孔洞 ） 并记录。试验结果取重复 2 次的平均值。 对照组应无抑菌环产生，否则需要重新试验。 果判定 抑菌环直径 6 为有抑菌作用； 抑菌环直径 6 为无抑菌作用。 2 次重复试验均有抑菌作用，判为合格。 6 检验规则 批 同 一班次 、同 一 工艺 、 同一包装线当天包装出厂（或入库的），质量均一的产品为一批。 样 与留样 样 样应均匀分布在整个灌装过程中，或均匀分布于灌装后的成品中。 用适宜的方法保证取样具有代表性，保证取样部位和取样瓶的清洁。对用于微生物试验的取样，应使用无菌操作。 据批量大小，按表 3 规定随机抽取样本，取样总量不少于 500 g（或 500 。 表 3 糊精抽样表 批量 /桶或箱 样本 量 /桶或袋 50 2 51 500 3 500 4 注：批量是指批中所包含的单位商品数，单位为桶或箱。样本量是指样本中所包含的样本单位数，单位为桶或袋。 样 将样品充分混合后置于 2 个洁净、干燥样品瓶中，封好。注明产品名称、批号、取样时间、取样人姓名。一瓶化验，另一瓶留样备查。 厂检验 出厂检验项目为 感官、 酶活力 、 水分 （固体） 、 灰分 、 抑菌作用 。 式检验 检验项目为本标准要 求中规定的全部项目。一般情况下，型式检验半年进行一次。有下列情况之一时，亦应进行型式检验： a）原辅材料有较大变化时； b）更改关键工艺或设备时； c）新试制的产品或正常生产的产品停产 3 个月后，重新恢复生产时； d）出厂检验与上次型式检验结果有较大差异时； e）国家质量监督检验机构按有关规定需要抽检时。 定规则 指标有一项不合格，可加倍抽样进行复验，以复检结果为准；若复检结果有一项不合格，判该批次产品为不合格。 7 标志、包装、运输、储存 志 食品 用 溶菌酶 标签 应符合 718的规 定。包装储运标识应符合 191的规定。 装 包装容器应整洁、卫生、无破损，并应符合相应的规定。 输 运输工具应清洁卫生。不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品混装、混运，应避免受潮、受压、暴晒。装卸时，应轻拿轻放，不得直接钩扎包装袋。 存 本品应储存在 阴凉、 干燥、清洁的仓库内 （ 0以下） ，严防日晒雨淋，严禁火种。不得与有毒、有害、有腐蚀性和含有异味的物品放在一起。 A _