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第八章 磺胺类和喹诺酮类药物的分析,1,第一节 磺胺类药物的分析,对氨基苯磺酰胺衍生物,N1取代物:母体结构中磺酰氨基上的一个氢原子被其它基团取代后的衍生物。 N4取代物:母体结构中对位氨基上的一个氢原子被其他基团取代后的衍生物。 N1、N4取代物:母体结构中N1和N 4上各有一个氢原子被取代的衍生物。,2,一、常用药物的化学结构及理化性质,常用药物化学结构,3,两性化合物:ArNH2显弱碱性;磺酰胺基N1上的H较活泼,即具有一定的酸性。因此可溶于酸性或碱性溶液中。 与金属离子生成沉淀:铜盐沉淀的颜色随N1取代基的不同而异,有的还有颜色变化过程,常用于磺胺类药物的鉴别。 可发生重氮化-偶合反应:产生有色沉淀,性 质,4,与芳醛在酸性溶液中缩合:生成有色的希夫碱。 N1上的芳杂环取代基具有碱性,可与有机碱沉淀剂反应:生成沉淀。 乙酰化反应:芳伯氨基经醋酐酰化后(即乙酰化),在显微镜下观察,都具有特殊的结晶形状,可做鉴别反应。,性 质,5,二、磺胺类药物的鉴别,1化学鉴别法 (1)铜盐反应,可初步区别结构类似的磺胺药,6,表8-1 磺胺类药物与铜盐的反应,7,(2)重氮化-偶合反应,8,(3)芳伯氨基与芳醛的缩合反应,芳醛: 对二甲氨基苯甲醛、香草醛、水杨醛等,如:与对二甲氨基苯甲醛在酸性溶液中生成黄色希夫氏碱。,9,N1取代基为含氮杂环,有一定碱性,可以和有机碱沉淀剂生成沉淀。,(4)N1取代基的反应,10,2红外光谱识别法,红外法具有指纹性,在一定波长下,磺胺类药物各具有其独特的吸收光谱图,可鉴别本类药物的特征官能团。,图8-1 磺胺嘧啶的红外吸收光谱,11,三、磺胺嘧啶的检查,1溶液澄清度与颜色的检查,方法:比色法 要求:澄清无色;如显色,与黄色3号标准比色液比较,不得更深。,有色的氧化产物偶氮苯化合物,12,2有关物质的检查,目的:控制药物的纯度。 方法:薄层色谱法,主成分自身对照法 杂质的限度:0.5。,3干燥失重 105干燥至恒重,减失重量0.5。,13,4酸度 取本品2.0g,加水100mL,置水浴中振摇加热10分钟,立即放冷,滤过;分取滤液25mL,加酚酞指示液2 滴与氢氧化钠滴定(0.1mol/L)0.20mL,应显粉红色。 5炽灼残渣:不得过0.1。 6重金属:不得过百万分之十。,14,四、含量测定,1亚硝酸钠滴定法 测定原理:利用磺胺类药物的N1取代物分子中含有芳伯氨基,在05低温状态下、盐酸介质中可与亚硝酸盐发生重氮化反应,测定磺胺类药物的含量。,15,取供试品约0.5 g,精密称定,置烧杯中,加水40 mL与盐酸溶液(1+2)15 mL,然后置于电磁搅拌器上,搅拌使溶解,再加溴化钾2g,插入铂-铂电极后,将滴定管的尖端插入液面下约2/3处,用亚硝酸钠液滴定液迅速滴定,随滴随搅拌。至近终点时,将滴定管的尖端提出液面,用少量的水淋洗,将洗液并人溶液中,继续缓缓滴定,直到电流计指针突然偏转,并不再回复,即为滴定终点(永停法)。每1mL的亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于25.03 mg的C10H10N4O2S。,磺胺嘧啶含量测定,16,(1)加入适量KBr (2)酸的种类及用量 芳胺盐酸12.56mol (3)室温条件下滴定 (4)滴定速度 (5)指示终点的方法 药典采用永停法,计算公式:,主要条件:,17,2非水溶液滴定法,含磺酰亚氨基SO2NHR,其N上的H具有一定酸性(R吸电子效应越强,N上的H越易失去,酸性越强),故可用非水酸碱滴定法测定。,取供试品约0.5g,精密称定,加二甲基甲酰胺40mL溶解后,加偶氮紫指示液3滴,用甲醇钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至溶液恰显蓝色,并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL甲醇钠滴定液(0.1mol/L)相当于26.73mg的C11H13N3O3S。,磺胺异噁唑,18,(1) 测定结果准确,终点明显。 (2)甲醇钠滴定溶液应临用前标定。 (3)滴定最好在隔绝空气中二氧化碳的情况下进行。,计算公式:,讨 论:,19,3紫外分光光度法,仅有单一组分或虽有多种组分,但组分间互不干扰的制剂: 直接采用紫外分光光度法,在待测组分的最大吸收波长处测定吸收度,以对照品比较法或吸收系数法计算 磺胺嘧啶片的溶出度测定 有多种组分且各组分吸收光谱互相重叠: 采用计算分光光度法 复方磺胺甲噁唑片的含量测定(2000版),20,磺胺嘧啶片的溶出度测定,取供试品照溶出度测定浆法,以盐酸溶液(91000)1000mL为溶剂,转速为100r/min,依法操作,经60min,取溶液5 mL滤过,精密量取续滤液1 mL,置50 mL量瓶中,加0.01 mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度,摇匀,在254 nm的波长处测定吸收度,按磺胺嘧啶(C10Hl0N4O2S)的吸收系数( )为866计算出每片的溶出量,限度为标示量的70,应符合规定。,计算公式如下:,检查方法:,21,复方磺胺甲噁唑片含量测定,处方组成: 磺胺甲噁唑 400mg 甲氧苄啶测定 80mg 辅料 适量 测定方法: 双波长分光光度法,22,双波长分光光度法(双波长等吸收法) 当光谱重叠时,在其光谱中选择两波长,在选定的波长处,干扰组分有相同的吸收;被测组分与干扰组分的吸收有足够大的差别。则两波长处吸光度的差值与被测组份的浓度成正比。,23,因为,所以,可见,在双波长分光光度法中吸光度的差值与干扰组份B无关。,为测定波长, 为参比波长 A为待测组分, B为干扰组分,24,磺胺甲噁唑测定:因为磺胺甲噁唑在257nm的波长处有最大吸收,甲氧苄啶在此波长处吸收较小,并在304nm波长附近有一等吸收点,故选择257nm为测定波长(2),在304nm波长附近选择等吸收波长为参比波长(1)。 甲氧苄啶测定:由甲氧苄啶紫外吸收图谱可知,在239nm波长处甲氧苄啶有较大吸收,而此波长是磺胺甲噁唑的最小吸收,且在295nm波长附近有一等吸收点,故选择239nm作为甲氧苄啶的测定波长,在295nm波长附近选择等吸收波长作为参比波长。,波长选择,25,精密称取在105干燥至恒重的磺胺甲噁唑对照品50mg与甲氧苄啶对照品10mg,分别置100ml量瓶中,各加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,分别作为对照品溶液(1) 与对照品溶液(2) 取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg与甲氧苄啶10mg),置100ml 量瓶中,加乙醇适量,振摇15分钟使磺胺甲噁唑与甲氧苄啶溶解,加乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品母液。,对照品溶液 配制,供试品母液 配制,26,稀释液的配制:精密量取供试品母液与对照品溶液(1)、(2)各1ml ,分别置50ml量瓶中,各加0.4氢氧化钠溶液稀释至刻度,摇匀,即得。 参比波长和测定波长的确定:取对照品溶液(2)的稀释液,以257nm 为测定波长(2),在304nm 波长附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为参比波长(1),要求2 1 0 。 样液的测定:再在2与1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(1) 的稀释液的吸收度,求出各自的吸收度差值()计算,即得。,磺胺甲噁唑测定,27,稀释液的配制: 精密量取上述供试品母液与对照品溶液(1)、(2)各2.5ml,分别置50ml 量瓶中,各加盐酸氯化钾溶液取0.1mol/L盐酸溶液75ml与氯化钾6.9g,加水至1000ml,摇匀稀释至刻度,摇匀,即得。 参比波长和测定波长的确定:照分光光度法取对照品溶液(1) 的稀释液,以239.0nm 为测定波长(2),在295nm 波长附近(每间隔0.2nm)选择等吸收点波长为参比波长(1),要求2-1 0 , 样液的测定:再在2 与1 波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(2) 的稀释液的吸收度,求出各自的吸收度差值(),计算,即得。,甲氧苄啶测定,28,计算公式,式中,AX为供试品溶液稀释液的吸光度差值; AR为对照品溶液稀释液的吸光度差值; mR为SMZ对照品的称量(mg) m为样品的称量(g); 为平均片重(g/片)。,29,第二节 氟喹诺酮类药物的分析,喹诺酮类药物是一类化学合成抗菌药,由于具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用安全及易于制造等优点,发展迅速。 基本母核结构:6-氟-4-喹诺酮-3-羧酸,30,一、几种常用药物的化学结构及理化性质,环丙沙星,氧氟沙星,常用药物结构,诺氟沙星,培氟杀星,31,理 化 性 质,显酸碱两性 氟喹诺酮类药物结构分子中都含有羧基及碱性氮原子 溶解性 易溶于碱和酸,在水和乙醇中极微溶解。 紫外区有特征吸收 具有共轭系统,32,二、诺氟沙星的分析,诺氟沙星:临床常用消炎药 化学名:1-乙基-6-氟-4-氧代-l,4-二氢-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸 结构:,性质:结构中有羧基显酸性,有哌嗪基显碱性,是两性化合物。,33,1鉴别试验,(1) N1为叔氨基 (2)F6显有机氟化物的性质 (3) 紫外吸收特征:5g/mL本品的0.4NaOH溶液,max273nm (4)采用红外光谱、薄层色谱、HPLC鉴别,34,2检查试验,(1)溶液的澄清度: 目的:控制碱不溶性杂质的限量 检查方法:比浊法 指标要求:5份均应澄清;如显浑浊,与2号浊度标准液比较,均不得更浓。 (2)氟: 限度:含氟量 5.4(理论5.95) 偏低原因:原料制备、副反应,35,(3)有关物质:HPLC法 限度:杂质A0.2%。其他单个杂质0.5%。其他各杂质的和1.0%。 (4)干燥失重:本品易吸收水分。 限度:105,减失重量不得过1.0% (5)炽灼残渣 铂坩埚 限度:遗留残渣不得过0.1%。 (6)重金属 限度: 15ppm。,36,3含量测定,原理:利用分子中有哌嗪基团显碱性。 测定方法:取本品约0.25g,精密称定,加冰醋酸20mL溶解后,加橙黄指示剂,用高氯酸标准滴定溶液(0.1mol/L)滴定至溶液显紫红色,并将滴定结果用空白校正。 注意事项:严格控制醋酐用量 诺氟沙星分子中哌嗪基为仲胺,容易发生乙酰化反应。,非水碱量法,37,色谱条件: 色谱柱:C18柱 流动相:0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.00.1)-乙腈(8713) 检测波长:278nm 系统适用性: 诺氟沙星峰与与环丙沙星峰和依诺沙星峰的分离度均应不小于2.0 定量方法:外标法,高效液相色谱法,38,三、环丙沙星的分析,化学名: 1-环丙基-6-氟-l,4-二氢-4-氧-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧基 结构:,与诺氟沙星的结构区别是N1上的取代基不同,39,1鉴别试验,红外光谱法:与对照的图谱一致。 TLC法:供试品所显主斑点的颜色位置与对照品的主斑点相同。 水溶液显氟化物的鉴别反应。 HPLC法:供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。,40,2检查试验,(1)结晶性:应符合规定。 (2)水分:卡尔-费休法 含水量应在4.76.7。 (3)有关物质:高效液相色谱法 杂质A0.3%,杂质B,C,D,E均0.2%,其他单个杂质0.2%,各杂质的和0.5%。,41,(4)溶液的澄清度与颜色 :比色法 应澄清无色;如显色,与黄色或黄绿色4号标准比色液比较,不得更深。 (5)干燥失重:五氧化二磷干燥法 120减压干燥6hr,减失重量1.0% (6))炽灼残渣:铂坩埚 遗留残渣不得过0.1%。 (7)重金属: 含重金属20ppm。,42,色谱条件: 色谱柱:C18柱 流动相:0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节pH值至3.00.1)-乙腈(8713) 检测波长:278nm 系统适用性:环丙沙星峰与氧氟沙星峰和杂质I峰的分离度均应符合要求。 定量方法:外标法,高效液相色谱法,3含量测定,43,(2)间接原子吸收法: 根据环丙沙星在弱酸性介质中与雷氏盐定量生成缔合物,用原子吸收法测定沉淀中的Cr含量,间接测定环丙沙星含量。 (3)紫外分光光度法: 环丙沙星在稀盐酸中有紫外吸收的特点,用紫外分光光度法测定含量。,44,
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