《食品安全地方标准 植物源性食品中α-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉烯酮的测定 液相色谱-质谱质谱法》 标准文本

备案号： 吉林省食品安全地方标准 32 2012 食品安全地方标准 植物源性食品中 液相色谱 质谱法 in of S 送审稿 ) 2012布 2012施 吉林省卫生厅 发布 020 前 言 本标准按照 准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写和 准编写规则 第 4部分 :化学分析方法 给出的规则起草。 本标准由吉林省 卫生厅 提出并归口。 本标准起草单位： 吉林省农业科学院。 本标准起草人： 宋志峰、魏春雁、蔡玉红、张之鑫、孟繁磊、何智勇、牛红红、樊慧梅、仇建飞、武巍、马虹、王巍巍、杨建、张国辉、蔡红梅、刘笑笑。 附录 A、 020 食品安全地方标准 植物源性食品中 测定 液相色谱 1 范围 本标准规定了 植物源性食品中 质谱 /质谱 的 测定方法。 本标准适用于 成品粮及其加工制品（ 面粉、淀粉 等）、 食用植物油脂及其加工制品 等中 性确证和定量 测定 。 本标准 方法 的检出限 见附录 2 规范性引用文件 下列文件对于本 标准 的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 6682 分析实验室用水规格和试验方法 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 出口粮油、饲料检验 抽样和制样方法 5524 植物油脂检验 取样、扦样法 3 原理 试料 中 用碱性水溶液 萃取并调至中性后，再经二氯甲烷 萃取后，使用液相色谱 质谱仪测定，外标法 量 。 4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 6682规定的一级水。 氯甲烷（ 氯甲烷（ 水硫酸钠（ 化钠（ 氧化钠（ 水合柠檬酸（ 2O）。 020 醇（ 色谱纯。 腈（ 色谱纯。 准品： 36455玉米赤霉烯酮（ 17924纯度均大于 99%。 和 氯化钠 溶液： 称取 36 g 氯化钠（ 溶于 100 中。 %氢氧化钠溶液： 称取 20 g 氢氧化钠（ 用水溶解并定 溶 至 1 L。 06 g/L 柠檬酸溶液： 称取 106 g 一水合柠檬酸（ 用水溶解并定 溶 至 1 L。 腈 1+1，体积比）： 取 500 腈（ 500 混合。 醇 1+1，体积比）： 取 500 醇（ 500 混合。 准储备液：分别准确称取 量（精确至 g）用 乙腈溶解，配制成浓度为 1 000 的标准储备液。 0 4 避光保存，有效期为 6 个月。 准中间液：准确量取标准储备液 1 100 量瓶中，用乙腈 容至刻度，混匀备用。 0 4 避光保存，有效期为 1 个月。 。 合标准工作液：分别准确量取 一组容量瓶中，用乙腈 释至刻度，配制成浓度为 ng/ng/ng/10.0 ng/0.0 ng/标准工作液。此溶液现用现配。 膜：孔径为 m，有机相 型 。 5 仪器 与设备 相色谱 质谱仪。 析天平：感量 g 和 g。 转蒸发仪。 吹仪。 荡提取器。 涡混合器。 液漏斗： 125 验室常用玻璃器皿。 。 6 分析步骤 样制备与保存 根据不同类型的样品，分别按 5524 的要求制备试样。 固体样品粉碎后全部通过 标准网筛 。 取 称取试料 10 g（精确至 g）于 100 塞锥形瓶中。 固体样品 加入 50 氯甲烷（ 植物油脂样品加入 35 氯甲烷（ ， 盖紧塞子， 于振荡提取器上（ 振荡提取 30 化 使用中速滤纸过滤提取液（ 并用三氯甲烷定容至 50 1)。 吸取 25.0 取液 ( 125 ，加入 5 和氯化钠溶液（ 混匀，再 加 入 25 %氢氧化钠（ 液，剧烈振荡 1 静置分层，弃去三氯甲烷层。 再用 25 氯甲烷 重复 萃取一次，弃去三氯甲烷层。加入 25 檬酸溶液（ ， 混匀。 再 加入 25 氯甲烷（ 剧烈振荡 1 020 置分层。 将 二氯甲烷层溶液通过装有 5 g 无水硫酸钠（ 漏斗。 再用 25 氯甲烷重复萃取一次，操作同上。 另用 5 氯甲烷冲洗无水硫酸钠，合并二氯甲烷萃取液 至 浓缩瓶中， 40 以下于旋转蒸发仪上浓缩至 近干 。残 留 物用 5 氯甲烷溶解并转移至玻璃离心管中，于 40 以下用微弱氮气吹干，残留物用 1.0 腈 解， 于漩涡混合器上（ 漩涡混匀后，过 膜 （ ，供仪器测定 。 白试验 除不加试料外，采用完全相同的分析步骤 。 定 器参考条件 谱参考条件 色谱参考条件如下： a） 色谱柱： 谱柱， 100 .1 径 m，或性能相当者 ； b） 柱温： 40 ； c） 流动相、流速及洗脱梯度：流速 0.3 mL/脱梯度见表 1； d） 进样量： 30 L。 表 1 流动相、流速及洗脱梯度 时间 /速 /（ mL/ A 相：水 /% B 相：乙腈 /% 0 50 5 75 100 100 00 0 00 0 谱参考条件 质谱参考条件如下： a）电离方式：电喷雾电离； b）扫描方式：负离子扫描； c）检测方式：多反应监测（ d）离子源温度： 350 ； e）干燥气流量： 10 L/ f）监测离子、去簇电压及碰撞能量：见表 2。 表 2 玉米赤霉烯酮监测离子、去簇电压及碰撞能量 化合物名称 监测离子 去簇电压 碰撞能量 319/275a； 319/160 15； 米赤霉烯酮 317/175a； 317/131 25； a 定量离子 性分析 按照 器参考条件对标准溶液和样品进行测定，如果样品的色谱峰与标准物质色谱峰保留时间 偏差 5 %范围内、 定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相对丰度 偏差在允许范围内（ 相对020 丰度偏差不超过表 3 的规定 ） ，则可判定样品 中存在相应的测定物。标准溶液的 谱图见附录 A。 表 3 定性离子相对丰度最大允许偏差 单位： % 相对离子丰度 50 20 50 10 20 10 最大允许偏差 20 25 30 50 量测定 按浓度由小到大的顺序，依次分析混合标准工作液（ 照 器参考条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。同时按相同条件对样品测定液进行测定，利用标准曲线对样品中被测组分按照外标法进行定量。高浓度样品应适当 稀释，保证被测组分在标准曲线范围内。 7 结果计算 料中分析物的含量，按式（ 1）或用仪器数据处理机计算。 231 (1) 式中： X i 试料中 被测组分 的含量 ， 单位为毫克每千克（ mg/ 从标准曲线上得到的试样溶液中 分析物的含量 ，单位为纳克每毫升（ ng/ 提取 液定容的 体积，单位为毫升（ 吸取 三氯甲烷 提取液的 体积，单位为毫升（ 试样溶液最终体积，单位为毫 升（ m 试料的质量，单位为克（ g）。 行测定结果用算术平均值表示， 数值修约按照 8170执行，保留 两位 有效数字。 8 回收率及 精密度 回收率及精密度测定数据见附录 B。 复性 在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 15%。 现性 在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的 20%。 9 检出限和定量限 以样品取样量为 10 g，确定 mg/mg/量限分别为 mg/mg/ 020 A A 附 录 A （资料性附录） 标准溶液多反应监测（ 谱图 图 .5 ng/准溶液 谱图 1 2 玉米赤霉烯 酮020 附 录 B （ 资料 性附录） 实验室内回收率及重复性测定 数据 表 验室内回收率及重复性测定 数据 样品名称 被测组分 添加浓 度 /(g/回收率范围 /% 相对标准偏差 （ 米赤霉烯酮 豆 米赤霉烯酮 稻 米赤霉烯酮 生 米赤霉烯酮 米淀粉 米赤霉烯酮 020 表 ） 样品名称 被测组分 添加浓度 /(g/回收率范围 /% 相对标准偏差 （ 米赤霉烯酮 豆油 米赤霉烯酮 米色拉油 米赤霉烯酮 麻油 米赤霉烯酮 验室 间 回收率及重复性测定 数据 样品 项目 添加水平 /(g/不同实验室 平均测定回收率 /% 平均值 /% A B C D 玉米 赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 020 表 ） 样品 项目 添加水平 /(g/平均测定回收率 /% 平均值 /% 吉林省 质检院 吉林商检 长春市 质检院 本所 大豆 赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 大米 赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 玉米油 赤霉烯醇 12 60 玉米赤霉烯酮 60 _