异齿裂腹鱼

ICS65.150B 52备案号：DB54西藏自治区地方标准DB 54/ TXXXXXXXX异齿裂腹鱼Oconnors schizothoracin点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施西藏自治区市场监督管理局发布DBXX/ XXXXXXXXX目次前言II1范围12规范性引用文件13学名与分类13.1学名13.2地方名13.3分类位置14主要形态结构特征14.1外部形态特征14.2内部结构特征35生长与繁殖35.1生长35.2繁殖46遗传学特性56.1细胞遗传学特性56.2生化遗传学特性57检测方法67.1抽样67.2性状测定67.3年龄鉴定67.4染色体检测67.5血清乳酸脱氢酶（LDH）检测68检验规则与结果判定7附录A（资料性附录）生长方程、体长与体重关系式8附录B（规范性附录）同工酶试剂的配制9前言本标准按照GB/T 1.1的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由西藏自治区农牧厅提出。本标准由西藏自治区农牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：华中农业大学、西藏自治区畜牧总站、四川律贝生物技术有限公司。本标准的主要起草人：覃剑晖、马宝珊、谢从新、马徐发、尼玛群宗、边巴卓玛、格桑达娃、林少卿、旦增旺久、尼玛次仁、张鑫宬、胡程鹏。本标准为首次制定。10异齿裂腹鱼1 范围本标准给出了异齿裂腹鱼（Schizothorax oconnori Lloyd）的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性、检测方法和检验规则。本标准适用于异齿裂腹鱼的种质检测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分：检验规则GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分：性状测定GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第13部分：同工酶电泳分析3 学名与分类3.1 学名异齿裂腹鱼（Schizothorax oconnori Lloyd ）。3.2 地方名棒棒鱼。3.3 分类位置硬骨鱼纲（Osteichthyes），鲤形目（Cypriniformes），鲤科（Cyprinidae），裂腹鱼亚科（Schizothoracinae），裂腹鱼属（Schizothorax）。4 主要形态结构特征4.1 外部形态特征4.1.1 外形体延长，略侧扁，背腹缘均隆起。头锥形。吻圆钝。口下位，横裂。吻钝圆。下颌具锐利角质前缘，其内侧角质亦较发达。唇发达，下唇完整，其游离缘略内凹，呈弧形；表明具发达乳突；唇后沟连续。须两对，较短，口角须稍长于吻须，其长度为眼径的1/22/3倍。吻须末端后伸达约达鼻孔后缘之垂直下方。口角须末端后伸达眼中部之垂直下方。体被细鳞，排列不整齐，自峡部后之胸部具明显鳞片。侧线完全。背鳍最后一根不分支鳍条粗硬，其后缘下1/24/5部分每侧具1120枚强壮锯齿；背鳍起点到吻端的距离大于到尾鳍基部的距离，其末端后伸达胸鳍起点至腹鳍起点之间距离的2/3处。胸鳍末端后伸达胸鳍起点至腹鳍起点之间距离的1/22/3处。腹鳍起点位于背鳍起点之前下方。尾鳍叉形，上下叶末端均钝。腹部银白色，背侧青灰色，体侧、背鳍、尾鳍有黑色斑点。异齿裂腹鱼的外形见图1。图1 异齿裂腹鱼外形图4.1.2 可数性状4.1.2.1 背鳍鳍式D.iii-78。4.1.2.2 臀鳍鳍式A.iii-5。4.1.2.3 鳞式 。4.1.2.4 第一鳃弓鳃耙数外侧鳃耙数：24枚33枚；内侧鳃耙数：35枚44枚。4.1.3 可量性状体长93mm470mm的个体可量性状变动值见表1。表1 异齿裂腹鱼可量性状比例值比例性状平均值（范围）比例性状平均值（范围）体长/体高4.80（3.905.68）头长/吻长3.20（2.50-3.50）体长/头长4.80（4.405.40）头长/眼径6.20（4.206.80）体长/尾柄长6.20（5.007.50）头长/眼间距2.20（2.002.70）体长/尾柄高8.70（8.3010.00）尾柄长/尾柄高1.50（1.202.00）4.2 内部结构特征4.2.1 鳔鳔分三室。中室最大(体长150mm以下个体此特征不明显)，后室最小。4.2.2 下咽齿下咽齿4行，1.2.3.5/5.3.2.1，少数为1.2.3.4/4.3.2.1。下咽骨宽阔，咽齿顶端呈斜截状。4.2.3 脊椎骨脊椎骨总数42枚43枚。4.2.4 腹膜黑色。5 生长与繁殖5.1 生长雌鱼最大年龄50龄，雄鱼最大年龄40龄。主要年龄组的体长和体重实测值见表2。表2 不同年龄组的鱼体长和体重实测值年龄年雄鱼雌鱼体长平均 标准差mm体重平均 标准差g体长平均 标准差mm体重平均 标准差g317868.717978.64218.817.4145.525.3196.823.1105.336.15244.322.8202.363.1243.026.0214.467.86272.430.1281.593.0274.430.7291.4102.07292.431.0356.6115.4304.232.8403.1147.58322.424.9482.6114.9336.237.9549.2175.79340.629.8570.1159.5366.635.0714.5214.610353.425.1647.3169.5396.037.7919.9271.811360.430.5684.3181.4417.228.21095.0259.312375.429.1783.1264.7425.634.21131.8290.413380.329.5800.6180.3442.231.21278.8307.614394.615.7888.072.3438.633.41253.4323.415391.816.3767.9124.6430.331.11214.0266.416399.330.7913.1161.6446.836.91303.2309.217399.59.7921.065.5461.022.91420.8283.118401.718.8948.1152.8465.525.21527.7268.919411.028.1955.2182.6451.626.21363.9295.620405.021.91024.0253.6464.134.11478.0279.021405.810.8981.0122.9453.030.91393.5343.222406.024.7987.6209.5471.322.71483.9247.823409.515.2979.4123.0456.015.91394.2178.224399.415.9931.4121.5463.527.11540.5577.625386.513.4834.258.3454.921.71392.8284.426398930.6454.330.51409.3305.827411.331.6991.7153.6474.235.01670.5576.528399.313.6964.5105477.534.41667.6571.529449.418.81283.2160.6304441252.4467.232.31511.5301.931460.035.41531.4502.6324541306.9334311012.3463.513.41327.736.734463.719.01357.7198.935466.624.21506.1226.836476.536.11354.8177.937447.530.41315.1334.15.2 繁殖5.2.1 性成熟年龄雌鱼为9 龄，雄鱼为7龄。5.2.2 产卵类型性腺一年成熟一次，一次产出。5.2.3 繁殖期繁殖期从2月持续到4月，3月为高峰期。5.2.4 怀卵量不同年龄组个体怀卵量见表3。表3 异齿裂腹鱼不同年龄组的个体怀卵量年龄年体重范围g怀卵量（均值标准差）粒/尾101188.21289.8141948336111036.11472.4200935202121172.01550.9204753360131047.31777.3195235626141326.91873.522667902915870.11379.7154013401161495.02621.7298937273171242.61606.6189286165181452.01945.1251628856191245.81440.4157362481201478.61927.9209238575211223.62040.4266688620221140.81652.8213273654231206.61456.7185144798241263.112403251100.11604.4197464781261168.81582.9209853385271302.52475.42498411231281256.82982.6205204708291041.51409.5186482987301398.11442.923028219311395.62329.423028112456 遗传学特性6.1 细胞遗传学特性染色体数：2n=92，核型公式：30m+26sm+20st+16t；臂数（NF）：=148。染色体核型见图2。图2 异齿裂腹鱼核型图6.2 生化遗传学特性血清乳酸脱氢酶（LDH）酶电泳图谱见图3。图3 异齿裂腹鱼血清LDH酶电泳图谱扫描图7 检测方法7.1 抽样按GB/T 18654.2的规定执行。7.2 性状测定按GB/T 18654.3的规定执行。7.3 年龄鉴定采用耳石鉴定年龄。方法按SC 1037的规定执行。7.4 染色体检测按GB/T 18654.13的规定执行。7.5 血清乳酸脱氢酶（LDH）检测7.5.1 试剂及配制方法同工酶各种试剂的配制见附录A。7.5.2 样品的采集与制备血清制备，从尾静脉抽取2ml血，于4、1000r/min离心6min，取上清备用。7.5.3 制胶先将混匀的6.5%分离胶液倒入模板约3/4高度，注入双蒸水，置于36左右30min。待凝胶聚合好以后，倒掉上面的水，将混匀的3.0%浓缩胶倒入模板，插好梳子，置于36左右30min，待凝胶聚合好以后，置于冰箱中备用。7.5.4 点样点样量为20L。吸取20L样与2L3L加样指示剂混匀，一起加到样孔中。7.5.5 电泳分离1) 采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳。分离胶浓度6.5%，浓缩胶浓度3.0%。2) 电极缓冲液：pH为8.3的Tris-甘氨酸。3) 电泳：稳压280 V（起始电流约1824mA）电泳0.5h后，将电压调到220v，继续电泳5 h6h（溴酚蓝跑出胶后2h以上）。4) 染色：电泳结束后，放入预先配好并在37恒温箱中保温的同工酶染色液中染色。8 检验规则与结果判定按GB/T 18654.1的规定执行。AA附录A （资料性附录）生长方程、体长与体重关系式A.1 体长和体重生长方程雌性和雄性群体的体长和体重生长方程见式（A.1）、（A.2）、（A3）和（A.4）：雌性： Lt = 576.9 (1 e0.081 (t + 0.946) （A.1） Wt = 2666.2 (1 e0.081 (t + 0.946)3.080（A.2）雄性： Lt = 499.7 (1 e0.095 (t + 0.896) （A.3） Wt = 1748.1 (1 e0.095 (t + 0.896)3.090（A.4）式中：Ltt龄时鱼体体长，mm；Wtt龄时鱼体体重，g；e自然对数；t鱼的年龄。A.2 体长与体重关系式雌性、雄性和种群总体的体长与体重关系式见（A.5）、（A.6）和（A.7）：雌性：W = 8.897 106 SL3.080 （A.5）雄性：W = 8.327 106 SL3.090 （A.6）总体：W = 2.034 105 SL2.940 （A.7）式中：W鱼体体重，g；SL鱼体体长，mm。BB附录B （规范性附录）同工酶试剂的配制B.1 凝胶制备B.1.1 凝胶制备溶液配制各种凝胶制备溶液的配方及配制方法见表B.1。表B.1 各种凝胶制备溶液配方溶 液配 制 方 法凝胶缓冲液取Tris 56.75g加200mL蒸馏水，用浓盐酸调pH为8.9，加蒸馏水到250mL。4贮存。凝胶储液取丙烯酰胺33.3g，N，N-亚甲基双丙烯酰胺0.9g，四甲基乙二胺（TEMED ）338L溶于蒸馏水中定容到150mL。4贮存。AP取过硫酸铵1.5mg溶解到100mL蒸馏水水中。4贮存。B.1.2 分离胶和浓缩胶的制备用6.5%分离胶和3.0%浓缩胶制成聚丙烯酰胺垂直板凝胶，该凝胶液配方见表B.2。表B.2 凝胶制备配方6.5% 分离胶3.0浓缩胶凝胶缓冲液, mL1.5凝胶缓冲液，mL0.5凝胶储液，mL7.3凝胶储液，mL1.2AP, mL1.5AP, mL0.5TEMED，LTEMED, L4.0纯水，mL14.7纯水，mL6.8总体积，mL25总体积，mL9.0凝胶缓冲液, mL1.5凝胶缓冲液，mL0.5B.2 加样指示剂0.15溴酚蓝-50甘油：称取0.15g溴酚蓝溶于50mL蒸馏水，再加50mL甘油混匀。B.3 电极缓冲液取甘氨酸28.80g溶于800 mL水，用约4.00g的Tris调pH至8.3，加蒸馏水到1000mL。电泳时稀释10倍使用。B.4 染色液的配制B.4.1 染色用溶液配制染色用各溶液配制见表B.3。表B.3 染色用溶液配方溶 液配 制 方 法A氯化硝基四氮唑蓝（NBT）250mg辅酶1（NAD）500mg吩嗪甲酯硫酸盐（PMS）20mg氯化钠（NaCl）290mg水（H2O）200 mLB乳酸钠乳酸钠30mL水（H2O）170 mLC0.5mol/L Tris-HCl染色缓冲液（pH=7.1）取Tris 60.5g溶于800mL蒸馏水中，用盐酸调节pH至7.1，加蒸馏水到1000mL。B.4.2 染色液配方取A液10 mL，B液10 mL，C液18 mL，H2O 62 mL，混合均匀。_