新生儿溶血病血清学检查操作规程

遵医附院输血科主题：血清学技术操作规范编号：01-3 内容：新生儿溶血病血清学检查操作规程第1页 共 3 页 版本2008 修订颁布日期：2008年8月修订日期：2008年7月新生儿溶血病血清学检查操作规程原理新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统（网状内皮系统）受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。目的规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性和有效性。职责输血科技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。适用范围母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。支持文件中国输血技术操作规程（血站部分）.天津：天津科学技术出版社1997输血技术学第2版.北京：人民卫生出版社，2002输血科（血库）工作手册莞市中心血站2006材料或设备1、 材料 抗-A、抗-D定型试剂、抗球蛋白试剂、ABO反定型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本2、 设备 血清雪专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、显微镜、小试管、滴管、小玻棒操作步骤一、 血标本采集及处理采集患儿及其父亲与母亲血标本各3-5ml，分离出血清，配制3%-5%红细胞盐水悬液。如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下面的红细胞悬液。二、 患儿血标本具体操作执行ABO和Rh血型鉴定操作规程。ABO血型测定只做正定型。1、 直接抗球蛋白试验具体操作执行抗球蛋白操作试验规程中的直接抗球蛋白试验部分。2、 游离抗体检测1、 取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，每管加患儿血清2滴，再分别加入3%-5%的A、B、O、反定型试剂红细胞悬液1滴。2、 37致敏1h后取出，若发生凝集，不必继续往下做。3、 若不凝集，用盐水充分洗涤3次反应物后加入抗球蛋白血清1滴。1300g离心15s，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。若肉眼不见凝集，以显微镜检查。按表一析结果。3、放散实验依据结果，采用合适的放散方法进行放散试验，具体操作执行放散试验操作规程，放散试验结果判断见表二三、 患儿母亲血标本1、 血型鉴定（执行ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程）2、 IgG抗-A（B）效价测定具体操作执行IgG抗-A（B）效价测定规程3、 抗体筛选、鉴定试验具体操作执行红细胞血型抗体筛选、鉴定操作规程四、 患儿父亲血标本ABO和Rh（D）血型鉴定。具体操作执行ABO和Rh（D）血型鉴定操作规程五、根据表三，分析结果表一患儿血清中游离抗体检查结果意义指示红细胞意义Ac Bc Oc+ - - + -+ + -+/- +/- +- - -游离的抗-A游离的抗-B游离的抗-A、抗-B或者抗-AB游离的ABO系统以外抗体无游离抗体表二患儿红细胞抗体释放试验意义指示红细胞意义Ac Bc Oc+ - - + -+ + -+/- +/- +- - -放散出IgG抗-A放散出IgG抗-B放散出抗-AB，或同时放散出IgG抗-A或抗-B放散出ABO血型以外的抗体没有放散抗体表三新生儿溶血病检测结果判断直抗试验 游离试验 释放试验 结论 - - - 不能证实为血型免疫引起的新生儿溶血 + - - 可疑为新生儿溶血 - + - 可疑为新生儿溶血 - - + 能证实为血型免疫引起的新生儿溶血 + - + 能证实为血型免疫引起的新生儿溶血 + + - 能证实为血型免疫引起的新生儿溶血 - + + 能证实为血型免疫引起的新生儿溶血 + + + 能证实为血型免疫引起的新生儿溶血 注意事项1、 新生儿血标本要求比较高，要求采集血液4-5ml，分为大约相等的两份，一份不抗凝，另一份采用EDTA抗凝。2、 如果只有不抗凝血标本，不宜在试管中用竹签挤压血块。3、 脐血标本不宜作为检测标本，尤其对ABO新生儿溶血病容易出现无临床意义的阳性指标。4、 一旦怀疑为新生儿溶血病时，应立即尽送检，5天后采集的血标本检出阳性率的机会很少。5、 母亲IgG抗-A抗-B效价高低具有参考价值说法不一，刘达庄主编免疫血液学2002上海科学技术出版社P137 为64以上有参考意义。王培华主编输血技术学P233效价256以上有参考意义；512以上有明显临床症状的较多；Rh（D）溶血抗D效价大于32有临床意义。6、 采集患儿父亲血标本的主要目的是，当新生儿血型鉴定困难时，可以根据双方的血型推断新生儿血型。