细菌检查与防治课件

课程名称课程名称：医医 学学 微微 生生 物物 学学教学内容教学内容： 学学 时：时： 学时学时教学目的教学目的： 掌握掌握临床细菌标本的采集、送检原则临床细菌标本的采集、送检原则,革兰染革兰染色法的步骤色法的步骤 熟悉熟悉病原菌的检验程序、常用血清学试验的病原菌的检验程序、常用血清学试验的原理原理 了解了解细菌学检查在临床诊断中的重要性细菌学检查在临床诊断中的重要性教学方法教学方法：理论：理论教学重点、难点、关键教学重点、难点、关键：病原菌的检验程序病原菌的检验程序细菌学诊断细菌学诊断 (bacteriological diagnosis)示踪性检测示踪性检测l形态学检查形态学检查 l分离培养分离培养l生化试验生化试验 l血清学鉴定血清学鉴定致病力和药敏测定致病力和药敏测定l动物实验动物实验l毒力检测毒力检测l药物敏感试验药物敏感试验临床细菌标本的采集、送检原则临床细菌标本的采集、送检原则1.无菌操作无菌操作:避免人为污染避免人为污染 2.选准部位选准部位:根据疾病种类和病程不同根据疾病种类和病程不同, 采集不同标本采集不同标本(specimens) 如如: 伤寒伤寒 第一周第一周 取血取血 第二、三周第二、三周 取大、小便、骨髓取大、小便、骨髓3.早期取材早期取材 (1)疾病早期疾病早期 (2)使用抗菌药物之前使用抗菌药物之前,如已用抗生素如已用抗生素,应停应停 用用12天天 (3)机体免疫因素形成之前机体免疫因素形成之前 (4)未出现合并或继发感染之前未出现合并或继发感染之前4. 快速送检快速送检 : 大多数细菌低温送检大多数细菌低温送检,但奈瑟球菌但奈瑟球菌须须30-40保温送检保温送检 标本采集的准确性是检查结果标本采集的准确性是检查结果可靠性的保证可靠性的保证、(一一) 、病原菌分离鉴定的一般程序：病原菌分离鉴定的一般程序： 一、形态学检查(1)不染色标本的检查不染色标本的检查 主要用于观察病原菌的某些形态特点主要用于观察病原菌的某些形态特点及运动性及运动性 ?常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法 如如: :用压滴法观察霍乱弧菌的用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动鱼群样运动”(2)染色标本的检查染色标本的检查染色染色单染单染复染复染正染正染负染负染 (negative staining)单染色单染色:只用一种染料进行染色只用一种染料进行染色. 可分为可分为: 正染正染:标本着色标本着色,背景不着色背景不着色 负染负染:标本不着色标本不着色,背景着色背景着色 用于形态的观察用于形态的观察,不能鉴别染色性不能鉴别染色性复染色复染色:用两种或两种以上的染料进行用两种或两种以上的染料进行 染色染色目前常用的有目前常用的有:既可观察形态结构既可观察形态结构,又可鉴别染色性又可鉴别染色性革兰染色法步骤革兰染色法步骤:制片制片: 涂片涂片染色染色:结晶紫初染结晶紫初染1分钟分钟水冲洗水冲洗碘液媒染碘液媒染1分钟分钟水冲洗水冲洗95%乙醇脱色乙醇脱色30秒左右秒左右水冲洗水冲洗稀释复红复染稀释复红复染30秒秒水冲洗水冲洗干后油镜下观察干后油镜下观察干燥干燥固定固定 涂涂 片片 干干 燥燥固固 定定 染染 色色镜镜 检检结果结果: 染成染成紫色紫色称革兰染色阳性称革兰染色阳性 G G+ + 染成染成红色红色称革兰染色阴性称革兰染色阴性 G G- -原理原理: (1)等电点学说等电点学说 结晶紫为碱性染料结晶紫为碱性染料(2)化学学说化学学说 GG+ +含有核糖核酸镁盐含有核糖核酸镁盐, ,能与结晶紫能与结晶紫形成牢固的复合物形成牢固的复合物(3)通透性学说通透性学说 G G+ + G G- -P I 23 46核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐 + -+ -通透性通透性 小小 大大脂质脂质 少少 多多意义意义 : (1)鉴别细菌鉴别细菌 (2)指导临床用药指导临床用药 (3)了解细菌的致病性了解细菌的致病性二二、分离培养分离培养纯培养：纯培养： 根据不同标本采取不同培养基。根据不同标本采取不同培养基。 分离化脓性球菌如链球菌、肺炎球菌分离化脓性球菌如链球菌、肺炎球菌可采用血平板；分离脑膜炎球菌可采用巧可采用血平板；分离脑膜炎球菌可采用巧克力平板克力平板 菌落形态观察菌落形态观察: 大小、表面、透明度、边大小、表面、透明度、边缘、高度、色素、溶血等缘、高度、色素、溶血等三三、生化反应：生化反应： 通过检测细菌代谢产物的生化反应通过检测细菌代谢产物的生化反应鉴定细菌的种类鉴定细菌的种类 乳糖发酵试验、甲基红试验、硫化氢试验等。乳糖发酵试验、甲基红试验、硫化氢试验等。 四四 、血清学鉴定血清学鉴定:(serological identification)： 用已知抗体检测标本中分离得到用已知抗体检测标本中分离得到的病原菌的血清型别，采用玻片凝集的病原菌的血清型别，采用玻片凝集法。法。 原理：原理： 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。呈负相关。 五五 、药敏试验：药敏试验： 抑菌圈抑菌圈 或抑菌环或抑菌环原理：原理： 聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时加入加入100l100l浓度为浓度为10105 5 CFU/ml CFU/ml的菌液，盖上盖板，的菌液，盖上盖板，3535161620h20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度，通过通过CLSICLSI标准判断其敏感和耐药。再取标准判断其敏感和耐药。再取0.01ml0.01ml容量接种容量接种环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代培养，经培养，经3535过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死99.999.9原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)(MBC)。 用微量加样器接种用微量加样器接种100l100l 到到9696孔中，盖上盖板。孔中，盖上盖板。 同时作阳性、阴性对照。同时作阳性、阴性对照。 手工看浊度或仪器自动手工看浊度或仪器自动 判读。按照判读。按照CLSICLSI标准报标准报 告细菌对某抗菌药物为告细菌对某抗菌药物为 敏感、耐药和中介。敏感、耐药和中介。 原理：原理： E试条是一条试条是一条5mm50mm无孔试剂载体，一面无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长稀释抗菌药物，另一面有读数和判别的刻度。抗菌药物的梯菌药物，另一面有读数和判别的刻度。抗菌药物的梯度可覆盖有度可覆盖有20个个MIC对倍稀释浓度的宽度范围。将对倍稀释浓度的宽度范围。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的最小抑菌浓度，对照对照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。标准判断其敏感、耐药、中介。 E-TEST 孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交 处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。六、细菌成分的检测六、细菌成分的检测(detection of bacterial antigens)： 目前应用最为广泛的是细菌抗原的检测目前应用最为广泛的是细菌抗原的检测 如如: 协同凝集试验、间接凝集试验、协同凝集试验、间接凝集试验、 荧光抗体法、酶免疫法、核酸杂交、荧光抗体法、酶免疫法、核酸杂交、 聚合酶链反应等聚合酶链反应等 七、检测细菌相应抗体七、检测细菌相应抗体 均为免疫学方法均为免疫学方法 经典方法如经典方法如: 凝集试验、沉淀反应、补体结合试验凝集试验、沉淀反应、补体结合试验 现代快速方法主要是免疫标记技术现代快速方法主要是免疫标记技术 通常采用取双份血清，其间间隔通常采用取双份血清，其间间隔12周。后一份血清抗体效价比前一份升高周。后一份血清抗体效价比前一份升高4倍倍以上有诊断意义。以上有诊断意义。 病原微生物感染的防治原则病原微生物感染的防治原则 微生物感染所导致的感染性疾病微生物感染所导致的感染性疾病的控制由预防和治疗两方面组成的控制由预防和治疗两方面组成预防预防:对病原微生物传播的各个环节进对病原微生物传播的各个环节进 行控制行控制治疗治疗:是通过抗微生物药物和新医疗技是通过抗微生物药物和新医疗技 术来控制传染病的扩散和发展术来控制传染病的扩散和发展病原微生物感染的防治原则病原微生物感染的防治原则 3.3.氨基糖苷类（氨基糖苷类（aminoglycosidesaminoglycosides） 4.4.四环素类（四环素类（tetracyclinetetracycline） 喹诺酮类喹诺酮类林可霉素类林可霉素类氨基糖苷类氨基糖苷类酮康唑酮康唑环丝氨酸环丝氨酸利福平利福平红霉素红霉素制霉菌素制霉菌素杆菌肽杆菌肽甲氧苄胺嘧啶甲氧苄胺嘧啶四环素类四环素类两性霉素两性霉素B万古霉素万古霉素磺胺药磺胺药氯霉素氯霉素多粘菌素类多粘菌素类-内酰胺类内酰胺类核酸合成核酸合成细胞蛋白合成细胞蛋白合成细胞膜渗透性细胞膜渗透性细胞壁细胞壁(三三)1.产生水解酶和钝化酶产生水解酶和钝化酶2.改变细胞膜的通透性改变细胞膜的通透性3.改变药物作用位点改变药物作用位点4.主动外排泵的作用主动外排泵的作用5.生物膜形成生物膜形成(四四)控制控制1.合理用药合理用药2.严格执行消毒隔离制度严格执行消毒隔离制度3.研制新的抗菌药物研制新的抗菌药物 4.破坏耐药基因破坏耐药基因药敏实验等指导药敏实验等指导 传染病控制传染病控制三大原则三大原则:1.查明和控制传染源查明和控制传染源2.切断传播途径切断传播途径3.提高健康人群的免疫力提高健康人群的免疫力消毒与灭菌是控制传染源的重要手段消毒与灭菌是控制传染源的重要手段消毒与灭菌消毒与灭菌 消毒消毒（disinfection）：）： 杀死物体上病原杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽孢微生物的方法，并不一定能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。的细菌或非病原微生物。灭菌（灭菌（sterilization）: 杀死物体上所有微生物的方法。杀死物体上所有微生物的方法。 包括致病菌、非致病菌、繁殖包括致病菌、非致病菌、繁殖体和芽胞。体和芽胞。 抑菌：抑菌： 抑制体内或体外细菌的生长。抑制体内或体外细菌的生长。 防腐：防腐： 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法 无菌（无菌（asepsis）：）： 没有活菌的意思。没有活菌的意思。无菌状态是灭菌的结果。无菌状态是灭菌的结果。 无菌操作（无菌操作（antiseptic technique）：）： 防止细菌进入人体或其他物品防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。的操作技术。 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法一、热力灭菌法一、热力灭菌法热力灭菌法有干热灭菌和湿热灭菌两大类热力灭菌法有干热灭菌和湿热灭菌两大类 在同一温度下，后者比前者的效力在同一温度下，后者比前者的效力大。大。 这是这是因为因为： *湿热中菌体蛋白较易凝固。湿热中菌体蛋白较易凝固。 *湿热的穿透力比干热大。湿热的穿透力比干热大。 *湿热的蒸汽有潜热存在湿热的蒸汽有潜热存在。为什么为什么湿热灭菌比干热灭菌效力大湿热灭菌比干热灭菌效力大干热灭菌干热灭菌 ： 干热的杀菌作用是通过脱水干热的杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性。干燥和大分子变性。 1.焚烧法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。焚烧法：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。 是一种彻底的灭菌方法。是一种彻底的灭菌方法。 适用于废弃物品或动物尸体。适用于废弃物品或动物尸体。 2.烧灼法：烧灼法：直接用火焰灭菌直接用火焰灭菌。 适用于接种环，试管口等的灭菌。适用于接种环，试管口等的灭菌。 3.干烤法：将物品置干烤箱内，加热至干烤法：将物品置干烤箱内，加热至 160170 0C 2h。 适用于高温下不变质、不损坏、不适用于高温下不变质、不损坏、不 蒸发的物品。蒸发的物品。 4.红外线：利用电磁波的热效应灭菌。红外线：利用电磁波的热效应灭菌。 110 m波长的热波长的热效应最强。效应最强。 适用于医疗器械的灭菌。适用于医疗器械的灭菌。 湿热灭菌：湿热灭菌： 利用热蒸汽的高温使微生物利用热蒸汽的高温使微生物的蛋白质变性。的蛋白质变性。 1.巴氏消毒法：巴氏消毒法： 用较低温度用较低温度61.162.80c c ，30min; 71.70c c , 1530s杀灭液体中的病原杀灭液体中的病原 微生物或特微生物或特 定的微生物，而仍保持物品中所需的不定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。耐热成分不被破坏的消毒方法。 用于牛乳制品、酒类等的消毒用于牛乳制品、酒类等的消毒 2.煮沸法煮沸法: 100 0c c , 水浴，30min30min。 食具、一般外科器械消毒。食具、一般外科器械消毒。 杀死芽胞需杀死芽胞需13小时。小时。 3.流动蒸气消毒法：流动蒸气消毒法： 100 0c ,c ,汽浴，30min30min 可杀死细菌繁殖体，但不能杀死芽胞可杀死细菌繁殖体，但不能杀死芽胞。 4.间歇蒸汽灭菌法：间歇蒸汽灭菌法： 100 0c c,汽浴,30min/30min/次次 流通蒸汽消毒法重复三次，每次间歇期流通蒸汽消毒法重复三次，每次间歇期置置3737温箱过夜，促使芽胞发芽变为繁殖体，温箱过夜，促使芽胞发芽变为繁殖体，被下一次蒸汽灭菌时杀灭。被下一次蒸汽灭菌时杀灭。 主要用于营养培养基的灭菌，可杀死芽主要用于营养培养基的灭菌，可杀死芽胞。胞。 5.高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法： 121.3 0c c 汽浴（汽浴（103.4kPa），），1520min可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物可杀灭包括细菌芽孢在内的所有微生物 用于培养基、生理盐水、手术敷料用于培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的灭菌。等耐高温、耐湿物品的灭菌。 灭菌效果最好、应用最广泛的灭菌方法。灭菌效果最好、应用最广泛的灭菌方法。 二、辐射杀菌法二、辐射杀菌法（一）紫外线（一）紫外线（ultraviolet ray，UV）杀菌杀菌 波长波长200300nm的紫外线有杀菌作用，的紫外线有杀菌作用， 其中以其中以260266nm最强。最强。*杀菌机制：杀菌机制：干扰干扰DNA的复制与转录。的复制与转录。 *杀菌作用特点：杀菌作用特点：杀菌作用强杀菌作用强,穿透力弱。穿透力弱。 *适用范围：适用范围： 手术室、传染病房、细菌实手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒验室的空气消毒,或不耐热物品的表或不耐热物品的表面消毒面消毒。（二）电离辐射二）电离辐射 ：高速电子、射线、高速电子、射线、r r射线等。射线等。应用范围：一次性医用塑料制品；食品。应用范围：一次性医用塑料制品；食品。 三、过滤除菌法（三、过滤除菌法（filtration） 用物理阻留的方法将液体或空气用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以达到无菌的目的。中的细菌除去，以达到无菌的目的。 血清、抗生素、抗毒素等除菌。血清、抗生素、抗毒素等除菌。 四、干燥与低温抑菌法四、干燥与低温抑菌法 保存菌种保存菌种:冷冻真空干燥法冷冻真空干燥法 lyophilization 五、超声波杀菌法五、超声波杀菌法第二节第二节 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法一、化学消毒剂的杀菌机制一、化学消毒剂的杀菌机制二、消毒剂的主要种类二、消毒剂的主要种类 醇类醇类-乙醇（乙醇（7075%） 碘酒碘酒 2%2.5% 、 新洁尔灭新洁尔灭 0.05%0.1%第三节第三节 影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素一、消毒剂的性质、浓度与作用时间一、消毒剂的性质、浓度与作用时间二、微生物的种类与数量二、微生物的种类与数量三、温度三、温度 四、酸碱度四、酸碱度 五、有机物五、有机物 级别级别处理对象处理对象一级一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。人、动植物致病的致病因子。二级二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。三级三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。预防治疗措施。四级四级 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施。子。没有预防治疗措施。要求掌握：要求掌握：1、掌握掌握钩端螺旋体的致病性及防钩端螺旋体的致病性及防治原则；治原则；2、熟悉熟悉梅毒螺旋体的致病性，检梅毒螺旋体的致病性，检验方法及防治原则；验方法及防治原则；3、了解了解螺旋体的概念，对人类有螺旋体的概念，对人类有致病性的螺旋体属。致病性的螺旋体属。一、概念一、概念螺旋体螺旋体（spirochete）是一类是一类细长、柔软、呈螺旋形弯曲，运细长、柔软、呈螺旋形弯曲，运动活泼的原核细胞型微生物。动活泼的原核细胞型微生物。二、种属：二、种属：螺旋体属名螺旋体属名螺旋特征螺旋特征代表株代表株致致 病病疏螺旋体属疏螺旋体属(Borrelia)3-10不规则不规则伯氏螺旋体回伯氏螺旋体回归热螺旋体归热螺旋体流行性回流行性回归热归热密螺旋体属密螺旋体属(Treponema)8-14规则细密，规则细密，两端尖直两端尖直苍白螺旋体苍白螺旋体雅司螺旋体雅司螺旋体梅毒梅毒钩端螺旋体钩端螺旋体属属(Leptospira)规则更多更细密，规则更多更细密，一端或两端钩状一端或两端钩状问号钩端螺旋问号钩端螺旋体体钩端螺旋钩端螺旋体病体病一、生物学性状一、生物学性状 1 1、形态、结构及染色、形态、结构及染色 细长，螺旋密而规则细长，螺旋密而规则 一端或两端弯曲呈钩状，呈一端或两端弯曲呈钩状，呈C C、S S形形 外膜与肽聚糖层之间有两根轴丝（与运动外膜与肽聚糖层之间有两根轴丝（与运动 有关）有关） 革兰阴性，着色难，常用于革兰阴性，着色难，常用于FontanaFontana镀银镀银 染色染色（棕褐色）（棕褐色）第一节钩端螺旋体第一节钩端螺旋体 （钩体）（钩体） 2 2、培养特性、培养特性 钩体是目前钩体是目前唯一唯一能人工培养的螺能人工培养的螺旋体旋体 常用常用Korthof （柯索夫）（柯索夫）培养基培养基 生长最适温度为生长最适温度为2830，2周后周后出现云雾状出现云雾状 动物培养（小鼠）动物培养（小鼠）3 3、抵抗力、抵抗力 对热敏感，对热敏感，5656，1010分钟即死亡分钟即死亡 对消毒剂敏感对消毒剂敏感 对对青霉素青霉素、金霉素敏感，治疗首选、金霉素敏感，治疗首选二、致病性二、致病性 1、致病物质、致病物质 溶血毒素溶血毒素 细胞毒性因子细胞毒性因子CTF 内毒素样物质（脂多糖样物质）内毒素样物质（脂多糖样物质） 细胞致病作用（细胞致病作用（CPE）物质）物质 其他酶类（脂酶，脱氢酶其他酶类（脂酶，脱氢酶）2、所致疾病、所致疾病钩端螺旋体病（钩体钩端螺旋体病（钩体 病）俗称打谷黄，属自然疫源病）俗称打谷黄，属自然疫源 性疾病。性疾病。 传传 染染 源：源：鼠、猪（我国是幼猪）鼠、猪（我国是幼猪） 传播途径：传播途径：经健康或破损皮肤粘膜经健康或破损皮肤粘膜3、致病机制：、致病机制：钩体钩体经皮肤粘膜进入人体经皮肤粘膜进入人体在局部迅速繁殖在局部迅速繁殖引起钩体血症、败血症引起钩体血症、败血症向全身毛细血管内皮细胞扩散向全身毛细血管内皮细胞扩散至肝、肾、心肺、脑、肌肉损害至肝、肾、心肺、脑、肌肉损害 4 4、表现：、表现： 起病急、高热、乏力、头痛、全身酸起病急、高热、乏力、头痛、全身酸痛、眼结膜充血、腓肠肌触痛、浅表淋巴痛、眼结膜充血、腓肠肌触痛、浅表淋巴结肿大，严重者、有出血、黄疸、休克、结肿大，严重者、有出血、黄疸、休克、DIC、伴心、肾功能不全。、伴心、肾功能不全。 寒热酸痛一身乏寒热酸痛一身乏 眼红腿痛淋巴大眼红腿痛淋巴大5、临床类型：、临床类型： 黄疸出血型黄疸出血型-最常见最常见 流感伤寒型流感伤寒型 肺出血型肺出血型-最严重最严重 脑膜脑炎型脑膜脑炎型 肾功能衰竭型肾功能衰竭型 三、微生物学检查三、微生物学检查 1 1、病原体检查、病原体检查 直接镜检：直接镜检：暗视野观察活体、镀银染色片暗视野观察活体、镀银染色片 分离培养：分离培养：标本接种于标本接种于KorthofKorthof培养基培养基 动物接种：动物接种： 核酸检测：核酸检测：PCRPCR、DNADNA探针探针 2 2、血清学诊断、血清学诊断 显微凝集试验（凝集溶解）：显微凝集试验（凝集溶解）： 已知钩体已知钩体+ +血清血清 小蜘蛛样凝集小蜘蛛样凝集 血清中补体含量高血清中补体含量高 凝集稍后溶解凝集稍后溶解 1:4001:400，4 4倍倍 补体结合试验：补体结合试验： 1:201:20四、防治原则四、防治原则 （一）控制传染源（一）控制传染源 （1）灭鼠）灭鼠 （2）加强家畜管理保护水源）加强家畜管理保护水源 （二）接种疫苗（二）接种疫苗 （三）治疗青霉素首选（三）治疗青霉素首选一、生物学特性一、生物学特性 1、形态结构、形态结构（同前、略）（同前、略） 2、培养特性：、培养特性：不能进行人工培养不能进行人工培养 3、抵抗力：、抵抗力：极弱，对温度、干燥、极弱，对温度、干燥、 化学消毒剂、抗生素等均敏感化学消毒剂、抗生素等均敏感与人类疾病密切相关的代表株是引起与人类疾病密切相关的代表株是引起梅毒梅毒的的苍白螺旋体苍白螺旋体苍白亚种。苍白亚种。二、致病性二、致病性 1、梅毒螺旋体在自然情况下只感染人，、梅毒螺旋体在自然情况下只感染人，人是梅毒螺旋体的人是梅毒螺旋体的唯一宿主唯一宿主，也是梅毒的，也是梅毒的唯唯一传染源。一传染源。 2、梅毒按传播途径分梅毒按传播途径分先天梅毒先天梅毒（胎传梅（胎传梅毒）和毒）和后天梅毒后天梅毒（获得性梅毒）。（获得性梅毒）。 3、获得性梅毒，经获得性梅毒，经性接触传播性接触传播，以反复，以反复隐伏和再发为特征，临床分为三期。隐伏和再发为特征，临床分为三期。期梅毒（初期）又称初疮期梅毒（初期）又称初疮 破坏性小，破坏性小，感染性极强感染性极强 感染后感染后3周左右，局部出现，周左右，局部出现，无痛性硬结无痛性硬结称称“硬下疳硬下疳” 多见于外生殖器多见于外生殖器 48周后，不治自愈周后，不治自愈期梅毒期梅毒 硬下疳自愈后，经过硬下疳自愈后，经过2323个月无症状潜伏个月无症状潜伏期后进入期后进入期期 破坏性小，感染性强破坏性小，感染性强 出现苍白亚种螺旋体血症出现苍白亚种螺旋体血症 全身皮肤粘膜梅毒疹全身皮肤粘膜梅毒疹 全身淋巴结肿大，并向骨、关节、眼和全身淋巴结肿大，并向骨、关节、眼和其他脏器扩散其他脏器扩散期梅毒期梅毒 发性于感染后发性于感染后2 2年左右，也有长达年左右，也有长达10151015年之久年之久 感染性小，破坏性大感染性小，破坏性大 病变播及全身组织器官（皮肤、肝、病变播及全身组织器官（皮肤、肝、脾、骨骼）脾、骨骼） 慢性肉芽肿，损害进展和消退常交替慢性肉芽肿，损害进展和消退常交替出现出现 严重者危及生命严重者危及生命4、先天梅毒（胎传梅毒）、先天梅毒（胎传梅毒）多发于在妊娠多发于在妊娠4个月之后个月之后 引起胎儿全身感染导致引起胎儿全身感染导致流产流产、早产早产和和死胎死胎 出生梅毒婴儿，出生梅毒婴儿，可表现为可表现为马鞍鼻马鞍鼻、锯齿形牙锯齿形牙，间质性角膜炎、先天，间质性角膜炎、先天性耳聋等。性耳聋等。三、微生物学检查三、微生物学检查（一）标本（一）标本期梅毒期梅毒硬下疳渗出物硬下疳渗出物期梅毒期梅毒梅毒疹渗出物，淋梅毒疹渗出物，淋巴结抽取液巴结抽取液（二）方法（二）方法、显微镜检查、显微镜检查2、血清学诊断、血清学诊断 非特异性血清学试验非特异性血清学试验 抗原抗原为（正常牛心肌的心脂质）为（正常牛心肌的心脂质） 血清中的反应素为抗脂质血清中的反应素为抗脂质抗体抗体。 方法方法有有VDRL（性病研究实验室试验）（性病研究实验室试验） Veneral Disease Research Laboratory RPR（快速血浆反应素试验）（快速血浆反应素试验） Rapid Plasma Reagin 适用于大量筛选适用于大量筛选特异性血清学试验特异性血清学试验抗原抗原为（为（NicholsNichols株螺旋体）株螺旋体）抗体抗体为螺旋体特异性抗体为螺旋体特异性抗体方法方法有有FTA-ABSFTA-ABS试验（荧光梅试验（荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验）毒螺旋体抗体吸收试验）优点：优点：特异性强，可用于梅毒螺特异性强，可用于梅毒螺 旋体旋体证实试验证实试验要求掌握：要求掌握：1、掌握支原体的概念、形态结构特点、掌握支原体的概念、形态结构特点及培养特性；及培养特性；2、掌握主要病原性支原体的传播途径、掌握主要病原性支原体的传播途径及所致疾病；及所致疾病；3、熟悉支原体与、熟悉支原体与L型细菌的区别。型细菌的区别。第一节第一节 支原体的概念及种类支原体的概念及种类一、概念：一、概念： 支原体（支原体（MycoplasmaMycoplasma）是一类是一类无无细胞壁细胞壁、形态上呈、形态上呈多形性多形性、可、可通过除菌通过除菌滤器滤器、能在无生命的、能在无生命的培养基中生长培养基中生长繁殖繁殖的的最小最小的的原核细胞型微生物原核细胞型微生物。支原体属于柔膜体纲中的支原体目，下支原体属于柔膜体纲中的支原体目，下分三个科：分三个科：支原体科支原体科Mycoplasmataceae螺原体科螺原体科Spiroplasmataceae无胆甾原体科无胆甾原体科Acholeplasmataceae支原体科支原体科支原体属支原体属64个种个种脲原体属脲原体属2个种个种对人类主要致病性支原体包括：对人类主要致病性支原体包括： 支原体支原体 致病性致病性肺炎支原体肺炎支原体 Mpneumoniae 肺炎、支气管炎肺炎、支气管炎人型支原体人型支原体 Mhominis 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染生殖支原体生殖支原体 Mgenitalium 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染穿透支原体穿透支原体 Mpenetraus 多继发于艾滋病多继发于艾滋病溶脲脲原体溶脲脲原体 Uurealyticum 泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染二、生物学性状二、生物学性状（一）形态结构（一）形态结构 体体 积：积：最小最小0.20.3m，能能通过除菌滤器通过除菌滤器 形形 态：态：球形、丝状等球形、丝状等 肺炎支原体肺炎支原体 结结 构：构：细胞膜由三层含蛋白质和脂细胞膜由三层含蛋白质和脂 质成分构成，内外两层为蛋白质，中层质成分构成，内外两层为蛋白质，中层 为脂质为脂质 （含固醇）细胞膜外有荚膜（致（含固醇）细胞膜外有荚膜（致 病因素），还有特殊的顶端结构（具有病因素），还有特殊的顶端结构（具有 粘附细胞），微丝粘附细胞），微丝网（与运动有关）网（与运动有关） 染染 色色 性：性：革兰染色革兰染色阴性阴性，Giemsa染染 色呈色呈淡紫色淡紫色。（二）培养特性（二）培养特性 营养要求比细菌高（人和动物血浆）营养要求比细菌高（人和动物血浆） 生长缓慢，数日至数周后出现菌落生长缓慢，数日至数周后出现菌落 油煎荷包蛋样菌落油煎荷包蛋样菌落 、“T”株株（三）生化反应（三）生化反应支原体名称支原体名称葡萄糖葡萄糖精氨酸精氨酸尿素尿素肺炎支原体肺炎支原体+人型支原体人型支原体+生殖支原体生殖支原体+穿透支原体穿透支原体+溶脲脲原体溶脲脲原体+（四）抵抗力（四）抵抗力 对抑制对抑制细胞壁细胞壁合成的抗生素耐受合成的抗生素耐受 对干扰对干扰蛋白质蛋白质合成的抗生素敏感合成的抗生素敏感（五）支原体与（五）支原体与L型细菌的区别型细菌的区别性状性状支支 原原 体体L-型细菌型细菌细胞壁细胞壁没没 有有缺缺 少少分分 布布自然界广泛自然界广泛多在诱导因素下形成多在诱导因素下形成胆固醇胆固醇生长时需要生长时需要不需要不需要遗传性遗传性与细菌无关与细菌无关与原细菌有关与原细菌有关变异性变异性不能变异不能变异可回复为原菌可回复为原菌所致疾病所致疾病支原体肺炎支原体肺炎重点要求：重点要求：1、掌握立克次体的概念，主要种类、掌握立克次体的概念，主要种类及致病特点及致病特点2、熟悉立克次体的共同特点、熟悉立克次体的共同特点一、概念一、概念立克次体立克次体（Rickettsia）是一类是一类严格活细胞内寄生，以节肢动物为严格活细胞内寄生，以节肢动物为传播媒介的原核细胞型微生物。传播媒介的原核细胞型微生物。二、特点二、特点1、大小介于细菌与病毒之间，多形态，、大小介于细菌与病毒之间，多形态，革兰阴性；革兰阴性；2、含、含RNA和和DNA两种核酸；两种核酸；3、缺乏酶系统，严格、缺乏酶系统，严格活细胞内寄生活细胞内寄生；4、以、以二分裂二分裂方式繁殖；方式繁殖；5、以、以节肢动物节肢动物为媒介；为媒介；6、多为、多为自然疫源性自然疫源性疾病；疾病；7、对多种、对多种抗生素敏感抗生素敏感。致病机制致病机制致病物质：致病物质：致病机制：致病机制：病理部位：病理部位：内毒素、磷脂酶内毒素、磷脂酶A节肢动物节肢动物叮咬或粪便叮咬或粪便局部（淋巴组织、小血管）局部（淋巴组织、小血管）全身小血管内皮细胞全身小血管内皮细胞高热、头痛、皮疹高热、头痛、皮疹血管血管第一次菌血症第一次菌血症第二次菌血症第二次菌血症（R.prowazekii）传染源：传染源：病人病人传播媒介：传播媒介：体虱体虱 人虱人虱人虱人虱人虱人虱人人人人流行性斑疹伤寒流行性斑疹伤寒传播方式传播方式恙虫病立克次体恙虫病立克次体（R.tsutsugamushi）恙虫病恙虫病的的传播方式传播方式传播媒介，储存宿主：传播媒介，储存宿主：恙螨恙螨鼠等鼠等幼虫幼虫卵卵成虫成虫稚虫稚虫稚虫稚虫成虫成虫卵卵稚虫稚虫(第二代第二代)人等人等莫氏立克次体莫氏立克次体（R.typhi）地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）地方性斑疹伤寒（鼠型斑疹伤寒）传播方式传播方式鼠鼠鼠虱鼠虱鼠鼠鼠蚤鼠蚤鼠蚤鼠蚤人人 种类种类 传染源传染源 媒介昆虫媒介昆虫 主要临床表现主要临床表现 免疫力免疫力 普氏普氏立克次体立克次体 人人 人体虱人体虱 发热、头痛、皮疹发热、头痛、皮疹 持久持久（流行性（流行性斑疹伤寒）斑疹伤寒） 神经系统、心血管神经系统、心血管 系统损伤系统损伤莫氏立克氏体莫氏立克氏体 鼠等鼠等 鼠蚤鼠蚤 发热、头痛、皮疹发热、头痛、皮疹 持久持久（地方性（地方性斑疹伤寒）斑疹伤寒）恙虫病立恙虫病立克次体克次体 鼠等鼠等 恙螨恙螨 局部黑色焦痂局部黑色焦痂 持久持久（恙虫热）（恙虫热） 发热、头痛、皮发热、头痛、皮 疹疹 内脏损害内脏损害主要病原性立克次体主要病原性立克次体外斐反应外斐反应（Weil-Felix reaction）立克次体立克次体变形杆菌菌株变形杆菌菌株OX19OX2OXK普氏立克次体普氏立克次体+-斑疹伤寒立克次体斑疹伤寒立克次体+-恙虫病立克次体恙虫病立克次体-+外斐反应外斐反应（Weil-Felix reaction） 部部分立克次体的脂多糖分立克次体的脂多糖与与变形菌变形菌OX19、OX2、Oxk等的菌体抗原有等的菌体抗原有共共同成分同成分。由于变形菌抗原易于制备，。由于变形菌抗原易于制备，其凝集反应结果又便于观察，因此常其凝集反应结果又便于观察，因此常用这类变形菌抗原代替立克次体抗原用这类变形菌抗原代替立克次体抗原进行进行非特异性凝集反应非特异性凝集反应。用于检测血。用于检测血清中有无相应抗体，供清中有无相应抗体，供立克次体病立克次体病的的辅助诊断。此试验称为辅助诊断。此试验称为外斐试验外斐试验要求掌握：要求掌握：1、衣原体的概念、衣原体的概念2、沙眼衣原体亚种和所致疾病、沙眼衣原体亚种和所致疾病3、衣原体的独特繁殖周期、衣原体的独特繁殖周期一、概念一、概念衣原体衣原体（Chlamydia）是一类是一类严格严格真核细胞内寄生真核细胞内寄生，具有，具有独特发育周期独特发育周期，能能通过细菌滤器通过细菌滤器的的原核细胞型微生物原核细胞型微生物。l对多种抗生素敏感对多种抗生素敏感l革兰阴性，圆形或椭圆形体革兰阴性，圆形或椭圆形体l具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似l含有含有DNADNA和和RNARNA两类核酸两类核酸l有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢l专性细胞内寄生专性细胞内寄生，二分裂方式繁殖，二分裂方式繁殖l有独特的发育周期有独特的发育周期始体始体（initial body , IB）或或 网状体网状体（reticulate body, RB）：）：二、生物学特性二、生物学特性（一）形态染色：（一）形态染色：原体原体（elementary body, EB）: 形态小而致密者形态小而致密者形态大而疏松者形态大而疏松者包涵体包涵体易感细胞内含繁殖的易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡始体和子代原体的空泡原原 体体始始 体体大大 小小较小较小0.20.4较大较大0.51.0结结 构构有致密类核结构有致密类核结构密度较低密度较低有细胞壁有细胞壁无细胞壁无细胞壁染色性染色性Giemsa染色呈紫红色染色呈紫红色深兰色深兰色 Macchiavello染色呈红色染色呈红色兰兰 色色繁殖能力繁殖能力无无代谢活跃，二分裂繁殖代谢活跃，二分裂繁殖胞外稳定性胞外稳定性强强弱弱感染性感染性有毒力，感染性强有毒力，感染性强无毒力，无感染性无毒力，无感染性（二）培养特性二）培养特性专性细胞内寄生，常用鸡胚、小鼠和细胞培养专性细胞内寄生，常用鸡胚、小鼠和细胞培养四种衣原体性状比较四种衣原体性状比较沙眼衣原体沙眼衣原体(chlamydia trachomatis)是是引起人类沙眼的病原体。引起人类沙眼的病原体。一、致病特点：一、致病特点：1、传播方式：、传播方式：眼眼眼，眼眼，眼手手眼；眼；2、传播媒介：、传播媒介：毛巾、玩具、扶手等。毛巾、玩具、扶手等。3、感染方式：、感染方式：原体原体眼结膜上皮细胞眼结膜上皮细胞形成包涵体形成包涵体局部炎症反应局部炎症反应感染感染增殖增殖4、临床表现：、临床表现：早期早期流泪、有粘液脓性分泌物、流泪、有粘液脓性分泌物、 结膜充血及滤泡增生结膜充血及滤泡增生中期中期 眼睑内翻、倒睫、角膜炎症眼睑内翻、倒睫、角膜炎症 晚期晚期角膜血管翳、云翳、致盲角膜血管翳、云翳、致盲引起泌尿生殖道感染称引起泌尿生殖道感染称“非淋非淋”。 男性：男性：腹股沟淋巴结炎症腹股沟淋巴结炎症慢性淋巴肉芽慢性淋巴肉芽 肿肿瘘管。瘘管。 女性：女性：会阴会阴肛门肛门直肠，导致狭窄或梗直肠，导致狭窄或梗 阻、直肠瘘管。阻、直肠瘘管。淋巴组织损害淋巴组织损害二、微生物学检查二、微生物学检查标本：标本： 眼结膜刮片眼结膜刮片 眼穹隆部或眼结膜分泌物眼穹隆部或眼结膜分泌物 生殖道拭子或宫颈刮片生殖道拭子或宫颈刮片 病灶部活组织病灶部活组织 方法：方法： 直接涂片、染色、镜检：直接涂片、染色、镜检：查包涵体查包涵体 分离培养分离培养 : 鸡胚卵黄囊或传代细胞鸡胚卵黄囊或传代细胞 抗原检测：抗原检测：免疫荧光，酶免疫法免疫荧光，酶免疫法 核酸检测核酸检测三、防治原则三、防治原则 注意个人卫生注意个人卫生 抗生素、眼药水抗生素、眼药水 拨睫毛拨睫毛 睑外翻术睑外翻术 角膜移植角膜移植待过滤的液体 滤膜接负压吸引抽滤机A:螺旋状菌丝螺旋状菌丝 B:球拍状菌丝球拍状菌丝 C:结节状菌丝结节状菌丝D:鹿角状菌丝鹿角状菌丝 E:梳状菌丝梳状菌丝 B:关节状菌丝关节状菌丝 真菌菌落图图2. 细菌菌落细菌菌落菌落：菌落：在固体在固体培养基上，由培养基上，由单个细菌生长单个细菌生长繁殖形成的肉繁殖形成的肉眼可见的细菌眼可见的细菌集落称为集落称为菌落。菌落。 油煎荷包蛋样菌落油煎荷包蛋样菌落主主 讲讲主主 讲讲