凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应

实验内容实验内容介绍：免疫学检测技术介绍：免疫学检测技术示教：单扩、双扩、火箭电泳示教：单扩、双扩、火箭电泳操作：对流免疫电泳、玻片凝集操作：对流免疫电泳、玻片凝集报告：三张图、两实验原理及结果报告：三张图、两实验原理及结果一、抗原抗体反应的原理一、抗原抗体反应的原理 1、基础：抗原决定基、基础：抗原决定基抗体的互补决定区抗体的互补决定区 2、特点：抗原抗体反应的特异性、特点：抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可逆性抗原抗体反应的可逆性 抗原抗体反应的可见性抗原抗体反应的可见性二、抗原或抗体的检测方法二、抗原或抗体的检测方法凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、免疫标记技术免疫标记技术凝集反应凝集反应概念：抗原概念：抗原 + 抗体抗体 凝集团块凝集团块直接凝集：颗粒性抗原直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体抗体 凝集团块凝集团块 玻片法、试管法玻片法、试管法间接凝集：可溶性抗原包被于载体间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体抗体 凝集团块凝集团块反向间接凝集：抗体包被于载体反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原抗原 凝集团块凝集团块协同凝集：抗体结合金葡菌协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原抗原 凝集团块凝集团块抗球蛋白试验：抗原抗球蛋白试验：抗原 + 不完全抗体不完全抗体 + 抗球蛋白抗体抗球蛋白抗体 凝集团块凝集团块沉淀反应沉淀反应概念：可溶性抗原概念：可溶性抗原 + 抗体抗体 沉淀物沉淀物单向免疫扩散、火箭电泳：抗原定量试验单向免疫扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）双向免疫扩散、对流免疫电泳：抗原分析、双向免疫扩散、对流免疫电泳：抗原分析、 抗原定性试验等抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向）抗原、抗体同时扩散（自由、定向）单向免疫扩散单向免疫扩散单向免疫扩散试验是一种定量试验。单向免疫扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。径与抗原含量成正比。主要用于测定血清各种主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量和补体成分的含量单向定量免疫电泳（火箭电泳）单向定量免疫电泳（火箭电泳）将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿，但需时较短。敏感度与单扩相仿，但需时较短。双向免疫扩散双向免疫扩散在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统，可出现多条沉淀线。抗体系统，可出现多条沉淀线。可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分对流免疫电泳w材料n电泳仪n缓冲液n琼脂板1块/2人，打孔器2个/组，n抗AFP血清 已知AbnAFP阳性血清 阳性Agn对照阴性血清 阴性Agn待检血清：标本1 未知Ag 标本2 未知Ag对流免疫电泳对流免疫电泳打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为距离为4毫米至毫米至5毫米。毫米。加样：抗加样：抗AFP血清加于抗体孔内；病人血清、血清加于抗体孔内；病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。板电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电20分钟。分钟。观察：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。观察：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。玻片刮去琼脂后交到讲台方盘内。玻片刮去琼脂后交到讲台方盘内。对流免疫电泳w方法 打孔 加样 电泳20min AgAbAgAb45mm45mm5mm5mm阴性阳性标1阴性标2阳性对流免疫电泳w结果判定: 在相应抗原抗体孔之间可以白色沉淀线。*把琼脂片上的琼脂刮掉入杂物盆，玻片放在讲台前的盘子里直接凝集反应玻片凝集w材料：玻片1张/1人，1号、2号菌液，诊断血清，接种环w方法：取菌液34环，后加血清2环 轻摇玻片，12分钟后观察w结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应*玻片扔在后面的玻片缸里1号菌液诊断血清2号菌液诊断血清实验报告实验报告三张图：单扩、双扩、火箭电泳三张图：单扩、双扩、火箭电泳原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集（结果可用图示）（结果可用图示）