牧草营养价值评定分析方法

精选优质文档-倾情为你奉上牧草营养价值评定安排周六上午：学生进行托盘清洗，放入烘箱，进行初水分的测定讲解，学生完成采样、称重后将样品放入烘箱，讲解粗水分测定，负责人中午管理好烘箱。周六下午：u 称重烘干的样品，并分别粉碎装袋、标号u CP测定：讲解；三角瓶洗净、入烘箱，其他仪器设备的准备。讲解样品的采集与制备。u CP测定：称样并用滤纸包装好入凯氏烧瓶底部，加催化剂、浓硫酸混匀，静置过夜。周六 实验一样品的采集与制备饲草的收获、采集讲解试验二 初水分的测定1将瓷盘洗净，放入6065烘箱中烘干，取出冷却至室温称重后，再次烘1小时，冷却称重恒重。备用。2用剪刀剪碎新鲜样品，混匀后，在普通天平上用上面准备好的瓷盘称取此样品500g左右(使实验室条件下制成风干样品不少于100g)，放入120烘箱中灭酶15分钟，然后将瓷盘移入6065的烘箱中，烘56小时取出，在实验室条件下冷却24小时后称重。3再将瓷盘放入6065烘箱内，2小时后取出，按上法冷却称重，直至前后两次重量相差不超过0.1g为止，并取其最低值进行计算。计算公式：式中：W-瓷盘重加新鲜样重，W1-瓷盘重，W2-瓷盘重加风干样重4将测过初水分的样品在粉碎机上进行粉碎，并通过40-60目筛，制成风干样品。装入磨口广口瓶中备用。实验粗水分的测定（只讲解，不做）一、 原理：100-105烘箱除去风干样品中吸附水二、 仪器设备：称量瓶（2个），分析天平（感量0.0001g），恒温干燥箱（1台），干燥器（1台（用变色硅酸干燥剂）三、步骤：1、称量瓶恒重：将称量瓶洗净后置于100-105恒温干燥箱烘干1小时，取出移入干燥箱内冷却30分钟，称重m，然后再烘干30分钟，再冷却30分钟，直至两次称重之差小于0.0005g，为恒重。（按照经验烘一次即可）2、称样：向已恒重的称量瓶中加入1.5g左右被测饲料样品，迅速称重m1。3、称后放入100-105愠温干燥箱内，将称量瓶盖打开，烘干约6小时，取出移入干燥器中，冷却30分钟(盖好盖)迅速称重m2。4、恒重：称完后，按前面的操作方法继续将称量瓶放入100-105恒温干燥箱内，烘1小时，冷却、称重直到恒重（两次称重共不超过0.0005g）。（为节省时间，本步骤省略）三、 计算四、 注意事项1含脂肪高的样品，烘干时间反而会增重，乃脂肪氧化所致，应以增重前一次重量计算。2含糖分离的易分解或易焦化样品，可使用减压干燥法(7以下，600毫米汞柱以下烘干5小时)。3精密度：含水量在10%以上，允许相对偏差为1%；510%，允许相对偏差为3%；5%以下，允许相对偏差为5%。周六下午 饲草测定结果的评述与判定（讲解）周日上午：u CP测定：消化、定容；周日下午：u CP测定：蒸馏、滴定；u 讲解粗纤维的测定，学生洗净500ml烧杯，入烘箱。讲解酸洗石棉（负责人提前2天蒸馏水浸泡好）铺古式坩埚的方法（孔不漏而薄），学生铺好古式坩埚，负责人按号（三氯化铁溶液标号）放入马福炉550烘1h关闭第二天取出给学生备用。周日 实验三 粗蛋白的测定(凯氏定氮法)一、 原理：饲料中的粗蛋白指真蛋白和其他含氮化合物。凯氏定氮法是在催化剂的作用下，用浓硫酸消化样品，使样品中的含氮物都转变为氨气，氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵。加碱后用水蒸汽蒸馏使用氨逸出，用硼酸吸收，氨与酸结合成为四硼酸铵，后者用盐酸标准溶液滴定，即可测定含氮量。根据含氮量，乘以6.25可得到CP的含量。二、 仪器设备：凯氏烧瓶、量筒、100ml容量瓶、150ml三角瓶2个、蒸馏装置、酸式滴定管、电炉、分析天平、洗瓶、通风橱。三、 试剂：98%浓硫酸、混合催化剂、混合指示剂、40%NaOH、4%硼酸、HCl标准溶液四、步骤：(吸收氨气化和逸出再吸收酸滴定)1、消化：1）称取1g左右被测样品用滤纸包好装入凯氏烧瓶底部。加入2.5g混合催化剂和10ml98%浓硫酸，静置过夜。2）将凯氏烧瓶放在电炉上加热，开始加热时，先用小火，以免瓶内产生大量泡沫，溢出瓶口，当泡沫停止产生，再加强火力，使之维持微沸状态，温度保护在330左右，不可剧烈沸腾，以免（NH4）2SO4分解而损失。加热消化时应随时转动凯氏瓶、使硫酸能冲洗附着于瓶壁上的样品，直至瓶内溶液呈蓝绿色澄清液，即消化完毕，一般饲料需消化3-6小时。2、定容待凯氏烧瓶冷却后加少量蒸馏水摇动，然后将凯氏瓶中的消化液无损失地转移100ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗凯氏烧瓶数次注入容量瓶内，蒸馏水定容，混匀。3、蒸馏1）用滴定管准确放10ml2%硼酸溶液于150ml的三角瓶中，并加入甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2滴，置于蒸馏装置冷凝管下，使管口浸入硼酸溶液中。2）用移液管移取10ml消化液，于凯氏定氮仪上的小玻璃杯注入反应室内，再用少量蒸馏水冲洗。3）取10mlNaOH溶液注入小玻璃杯内，小心地轻轻提起棒状玻璃塞，使NaOH溶液流入反应室立刻将玻璃棒塞紧，并加少量水于玻璃杯内，使少量水流入反应室，以洗涤碱液，小玻璃杯内加入部分蒸馏水，以防漏气。4）接通电源煮沸蒸汽发生瓶中的蒸馏水开始蒸馏，并夹紧外层套管出口的橡皮管。5）至接收液变蓝后继续蒸馏3分钟后，撤去三角瓶。在小玻璃杯内加满水，将玻璃棒提起，使水流入反应室，并夹断气源，于是反应室的残液自动流入反应室外层中，如此反复冲洗几次后，将外层下端出口橡皮管打开，使反应室外层的废液排出，待废液排完后，夹紧橡皮管，每个消化液重复蒸馏两次作为平行。4、滴定：用0.02mol/L标准HCl溶液滴定，待溶液刚出现微灰红色，即达终点。同时做空白滴定。五、计算：五、 注意事项1.各种饲料的粗蛋白实际含氮量差异很大，荞麦、玉米用系数6.00，大豆、小麦等用系数5.70，牛奶用系数6.38。2.在实际操作中要结合饲料中实际含氮量，避免消耗大量HCl标准溶液3.精密度：CP25%,相对偏差1%CP：10%25%，相对偏差2%CP10%，相对偏差3%周一上午：CF测定：学生称样，酸、碱、醇处理、放入烘箱，中午负责人管理烘箱周一下午： NDFADF测定的滤袋、洗涤剂准备周一 实验四 NDF/ADF的测定周一上午：NDF测定：学生称样，酸、碱、醇处理、放入烘箱，中午负责人管理烘箱(1) 尼龙袋洗净、烘干、编号、称重（规格为300目，制成8cm12cm小袋；事先经65、48h烘至恒重）m1(2) 称取1g左右样品放入尼龙袋 m(3) 放入大烧杯(4) 加入中性洗涤剂(5) 在烧杯上口置凹面板(6) 在凹面板中倒入冷水起冷凝作用（防沸）(7) 将烧杯置于可调电炉上加热，在510min内煮沸，保持微沸状态1h。(8) 消煮完毕后，离火冷却10min，(9) 将尼龙袋和样品用2倍热水洗涤残渣。(10) 然后再用丙酮冲洗残渣两次至流出的丙酮为无色透明(11) 尼龙袋和样品于105烘箱内烘，直至恒重称重。m2(m2-m1)/m *100%(1) 尼龙袋和样品放入大烧杯(2) 加入酸性洗涤剂(3) 在烧杯上口置凹面板(4) 在凹面板中倒入冷水起冷凝作用（防沸）(5) 将烧杯置于可调电炉上加热，在510min内煮沸，保持微沸状态1h。(6) 消煮完毕后，离火冷却10min，(7) 将尼龙袋和样品取出，用2倍热水洗涤残渣。(8) 然后再用丙酮冲洗残渣两次至流出的丙酮为无色透明(9) 尼龙袋和样品于105烘箱内烘，直至恒重称重。M3周二 试验五ADL(木质素)含量的测定试验原理木质素在醋酸的作用下,易溶于乙醇和乙醚的混合液,在硫酸介质中用重铬酸钾氧化为二氧化碳和水,反应方程式如下：C6H10O5+4K2Cr2O7+16H2SO4=4Cr2(SO4)3+4K2SO4+6CO2+21H2O，过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠回滴,淀粉KI溶液为指示剂。其中加氯化钡溶液的作用是让溶出的木质素和硫酸钡一起沉淀。对照：滴定加入了5ml质量分数25%硫酸和0.05mol/L的重铬酸钾溶液作为空白样木质素含量按下式计算:X=K(a-b)/(n48)式中,“48”为1molC11H12O4相当于硫代硫酸钠的当量数;K为硫代硫酸钠浓度,mol/L;a为空白滴定所耗硫代硫酸钠体积,ml；b为滴定溶液所耗硫代硫酸钠体积,ml；n为干样质量,g。质量分数1%醋酸：质量分数10%氯化钡：质量分数25%的硫酸：0.05mol/L重铬酸钾溶液：14.7g重铬酸钾定容至1000ml质量分数30%KI溶液质量分数0.5%淀粉液用0.05mol/L重铬酸钾和0.2mol/L硫代硫酸钠滴定周三 试验六 粗灰分的测定饲料中的粗灰分系指饲料中的不燃烧部分，包括矿物质、无机盐等，约占饲料干物质的5%左右，主要为钾、钠、钙、镁、硫、硅、磷、铁及其他微量元素。灰分在饲料中的含量虽然不多，但在动、植物体的新陈代谢活动中都是有很重要的。测定灰分的总量，可了解不同生长期中、不同器官组织中灰分的变动情况；也可在此基础上测定灰分中组成元素的含量，作为合理配合全价日粮的参考。一、测定原理将试样放入茂福炉中，在一定温度下灼烧，使有机质燃烧，生a成二氧化碳和水而除去，剩余的不可燃部分(主要是一些矿物质氧化物)总称为粗灰分，包括样品中原先粘上的少量泥土、砂石等杂质。二、仪器设备等药品(一)仪器设备序号仪器名称数量序号仪器名称数量1234分析天平瓷坩埚，25毫升电炉量筒112115678茂福炉(高温电阻炉)坩埚钳长柄、短柄干燥器滴管1各1个1数个(二)试剂药品13% H2O2：取1份30%H2O2，加水9份混匀而成。214HCl：取1份浓盐酸，加水4份。3干燥剂：无水氯化钙或变色硅胶。4凡士林。三、测定方法1用14HCl将瓷坩埚煮沸并洗净，烘干，在茂福炉内于600下灼烧半小时，待炉温降至200以下，将坩埚移入干燥器内，冷却30分钟，称重，再灼烧，称至两次重量之差小于0.5毫克为恒重。(m0)2在此坩埚中准确称取风干样品12克(称准至0.0002克,m1)置电炉上，半开盖子，先低温小心碳化至无烟(勿着火)。3稍冷，将坩埚移入茂福炉中，慢慢升高温度至550600灼烧12小时，等炉温降到200以下，取出坩埚置于干燥器内，冷却30分钟后称重，再灼烧半小时，同样冷却称重，直至前后两次称重之差小于1毫克为恒重。(为了节省时间，本次实验采用一次连续灼烧6小时，冷却称重(m2)后即不再灼烧)4计算粗灰分(%)=四、注意事项1取样品数量(12克)，主要看样品灰分含量的高低。一般对谷类、油料、豆类等作灰分测定时，取样量可取高限或更高一点；植物的叶和饲草中因灰分含量比籽实高得多，故取样量可取下限。测草本材料时，粉碎中易产生大小不一的颗粒，应注意研磨和过筛。2一般情况下，饲料样品灼烧两小时，已足以充分灰化。难以灰化和样品量较多时，应酌情增加灼烧时间12小时。3灼烧后是否需要加水或3%H2O2处理，需看第一次灼烧是否完全(灼烧后的灰分应当是灰的颜色，蓬松状态，故当出现黑灰色或溶融则另作处理)。在取样较多，灰分含量高，灼烧器皿较小的情况下，单纯延长灼烧时间，有时难以将样品全部灰化，故需加少许水或3%H2O2进行处理，以使中间未灰化的物质露出表面(促进氧化)，以使灰化完全。4灼烧温度不得超过600，否则会使磷酸盐熔融，凝结为固形物将炭粒包埋，使其中所包含之炭粒不易氧化。此外温度过高时，钾、钠、氯等也能挥发，致使测得结果有误。5炭化开始时温度不宜过高，否则可能引起试样剧烈干馏，细小的试样颗粒易被逸出的气体带走，致使分析结果偏低。7精密度：含量范围：允许相对偏差10%以上 0.5% 510% 1% 5%以下 3%周四 实验七 Ca和P元素的测定P元素 TP(钼黄法)一、方法原理在硝酸溶液中，正磷酸根(PO4)与偏钒酸铵和钼酸铵混合试剂形成可溶性的磷钒性的磷钒钼黄色络合物，颜色很稳定。其组成为：P2O5V2O522MoO3nH2O。磷含量在040微克/毫升范围，消光值与浓度成直线关系，磷钒钼络合物最大吸收的波光在315nm处，通常选用420nm波长处测定。二、仪器设备及试药品(一)仪器设备如果使用前法测钙剩余的样品分解液，那么所需补加的仪器设备如下：1容量瓶：50毫升2吸管：10毫升372型或721型分光光度计（二）试剂药品1浓硝酸：比重1.40。211H NO3，130HNO3(V/V)(用干净NO2的HNO3配制)。3显色剂(1)钼酸铵溶液(10%)：称取钼酸铵10克，先加入小量的水加热5060左右溶解，冷却后再用水定容为100毫升混匀。(2)偏钒酸铵溶液(0.3%)：称取偏钒酸铵0.3克溶于50毫升蒸馏水中，再加入13HNO350毫升，总体积为100毫升。同时将溶液(1)徐徐倾入溶液(2)中，边加边搅拌，再加入已赶尽NO2的浓HNO318毫升，混匀。4标准磷溶液：1毫升=100微克磷。精确称取于105110烘箱中烘2小时的纯酸纯磷酸二氢钾(KH2PO4)0.4394克，用水溶解后移入1000毫升容量瓶中并用水稀释至刻度，摇匀。三、标准曲线的绘制 b取50毫升容量瓶9个，分别记上号码：0、1、2、8，在0号瓶中加少许蒸馏水。在1、2、3各瓶中依次加入0.5、1、2、37毫升标准溶液，用蒸馏水使各瓶中的体积达到20毫升左右，每瓶加入11HNO3 4毫升，显色剂10毫升，再用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置20分钟后在721型分光光度计上，选用420nm波长，用1厘米比色杯，测定各瓶溶液的消光值。以新加标准液含磷量(毫克数)为横坐标，相应的消光值为纵坐标，绘制出标准曲线。四、样品测定步骤(一)试样分解：见前节钙的测定(二)比色：精确吸取试样分解液110毫升(根据样品大约含磷量使所取的体积含磷在0.050.5毫克的范围内)，盛于50毫升容量瓶中，加入11HNO3 3毫升，显色剂10毫升，用水稀释至刻度，摇匀，放置20分钟后于721型分光光度计上选用与标准曲线制备相同的条件进行比色，由得到的消光值查标准曲线上的含量，并换算成总磷量：(三)计算公式：总磷(%)(风干样品)=式中：A为标准曲线上所查得的读数(微克)W风干样品重量(克)V1试样分解液总体积(毫升)V2吸取试样分解液量(毫升)。五、注意事项1本法测定成败的关键在于样品的消化，用湿法消化必须正确判断好消化终点，溶液呈清亮的淡黄色，不应有黑色微粒。最后HCLO4冒白烟，不应蒸干!消化的整个过程应缓慢加热。另外应根据样品消化的难易程度，改变增大加入的硝酸量。避免酸量不足发生样品着火!还可采用先一天称好样品，加入酸浸泡过夜，对有机物消化更好。2温度对显色有影响，显色最好在20左右，20分钟即可显色完全。冬天低于15，需要30分钟才能显色完全，如果温度更低，显色时间需更长，否则过早测定，将会造成误差。3显色酸度一般控制在58%的HNO3酸度为适宜，如酸度过高，会造成显色缓慢。4氢化物会阻滞显色，为此操作过程中要避免引入盐酸。5配试剂及操作用水均为蒸馏水。Ca(EDTA法)一、方法原理在pH1014的碱性溶液中，Ca与EDTA可生成稳定的无色络合物，而钙指示剂在此溶液中也可与钙离子生成紫红色络合物，但不如钙离子与EDTA的络合物稳定。在溶液pH=12，溶液中全部钙离子被EDTA络合而游离出钙指示剂时，溶液由紫红色变成纯蓝色从而指示滴定终点。二、仪器设备及试剂药品(一)仪器设备1分析天平2瓷质坩埚：25毫升3容量瓶：100(或250)、1000毫升4电炉：1千瓦5移液管：2、10毫升6碱式滴定管：50毫升7三角瓶：150毫升8漏斗：直径5厘米9滴管(二)试剂药品1钙标准液：1毫升=1毫克钙。精确称取于105110烤箱中烘烤3小时的优级纯碳酸钙(CaCO3)0.2497克，加毫升无离子水温湿润，用12盐酸慢慢滴入，使之恰好溶解为止，加热至沸，赶去CO2气体，冷却后移入100毫升容量瓶中，用无离子水稀释至刻度，摇匀(放于塑料瓶中保存为宜)。此液为1毫升=1毫克钙标准液。220%KOH溶液：称取KOH(分析纯)20克用少量水溶解后再定容至100毫升，混匀，如有混浊、零静置，过滤后使用。(此液用塑料瓶保存)。3三乙醇胺溶液：11。4盐酸羟胺。5钙指示剂：称取1克固体钙指示剂加入99克氯化钠在研钵中研细混匀，置于磨口广口瓶中保存备用，但存放时间不得超过半年。6孔雀绿指示剂：称取孔雀绿0.1克，溶于100毫升蒸馏水中。70.01MEDTA标准溶液：称取3.720克分析纯EDTA于无CO2蒸馏水中微热溶解，冷却后移入1000毫升容量瓶，用无CO2蒸馏水稀释至刻度，摇匀，保存在塑料瓶中。0.01MEDTA标准溶液的标定：精确吸取钙标准溶液(1毫升=1毫克钙)10毫升于150毫升三角瓶中，加入11三乙醇胺溶液2毫升，再加蒸馏水50毫升和1滴孔雀绿指示剂。滴加20%KOH溶液使三有瓶内溶液呈无色(pH约为12)，再加入KOH液2毫升，加入0.1克盐酸羟胺和少量钙指示剂。立即用EDTA溶液滴定，使溶液由紫红色变成纯蓝色为滴定终点，EDTA标准溶液的浓度用对钙的滴定度表示为：对钙的滴定度T(Ca毫克/毫升)=(式中为所有EDTA标准溶液的体积ml)。81+3盐酸：36%浓盐酸1份+蒸馏水3份，混匀。9浓硝酸三、测定步骤(一)试样分解：准确称取饲料样品11.5克(W)，于瓷质坩埚中，置于电炉上小心加热炭化至无烟后，待稍冷后取下坩埚入高温炉中，在550温度下灼烧3小时(或用测定粗灰分后进行)。在盛灰分坩埚中小心加入1+3盐酸10毫升和浓硝酸数滴，置电炉上小心加热至沸为止。将此溶液无损地转入100(或250)毫升(V1)的容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，此为试样分解液。可同时用于钙、磷的测定。(二)测定：准确吸取样品溶液10毫升(V2)于150毫升三角瓶中。加入11三乙醇胺溶液2毫升，再加蒸馏水50毫升和1滴孔雀绿指示剂。滴加20%KOH溶液使三有瓶内溶液呈无色(pH约为12)，再加入KOH液2毫升，加入0.1克盐酸羟胺和少量钙指示剂。立即用EDTA溶液滴定，使溶液由紫红色变成纯蓝色为滴定终点。记录耗去EDTA溶液的体积(V)。同时做试剂空白测定得试剂空白耗去EDTA溶液的体积(V0)。(三)计算：钙的含量%(风干基础)=式中：TEDTA标准溶液对钙的滴定度(毫克/毫升)V滴定样品所消耗的EDTA标准溶液(毫升)W风干样品重(克)周五 实验八 饲料中粗脂肪的测定方法1主题内容与适用范围本标准规定了饲料粗脂肪 测定方法本标准适用于各种单一、混合配合饲料和预混料。2原理索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂，脂溶性维生素，叶绿素等，因而测定结果称为粗脂肪或乙醚提取物。3试剂无水乙醚（分析纯）4仪器设备实验室用样品粉碎机或研钵分样筛：孔径0.45毫米。分析天秤：感量0.0001克。电热恒温水浴锅：室温100。恒温烘箱：50200。索氏脂肪提取仪。滤纸或滤纸筒：中速，脱脂。干燥器：用氯化钙（干燥级）或变色硅胶为干燥剂。5试样的制备选取有代表性的试样，用四分法将试样缩减为500克，粉碎至40目，再用四分法缩减到200克，于密封容器中保存。6分析步骤仲裁法：使用索氏脂肪提取器测定索氏脂肪提取器，应干燥无水，抽提瓶中有沸石数粒，在1052烘箱中烘干60分钟，干燥器中冷却30分钟，称重，再烘干30分钟，同样冷却称重，两次重量之差小于0.0008克为恒重，称取试样15克准确至0.0002克，于滤纸筒中，或用滤纸包好，放入105烘箱中，烘干120分钟，（或称水分后的干试样，折算成风干样品重）滤纸筒应高于提取器虹吸管的高度，滤纸包长度应以可全部浸泡于乙醚中为准，将滤纸包或滤纸筒放入抽提管，在抽提瓶中加入无水乙醚60100ml，在6075的水浴上加热，使乙醚回流，控制乙醚回流次数为每小时约10次，共回流约50次，含油高的试样约70次，或检查抽提管流出的乙醚挥发后不留下油迹为抽提终点。取出试样，仍用原提取器回收乙醚直至抽提瓶全部收完，取下抽提瓶，在水浴上蒸去残留乙醚，擦拭干净瓶外壁，将抽提瓶放入1052烘箱中烘干120分钟，干燥器中冷却30分钟稳重，再烘干30分钟，同样冷却称重，两次重量之差小于0.001克为恒重。推荐法，使用脂肪提取仪测定，依仪器操作说明书进行操作。7测定结果的计算：粗脂肪（%）=(m2m1)100m式中：m:风干试样的重量，gm1：已恒重的抽提瓶重量,gm2：已恒重的盛有脂肪的抽提瓶的重量,g重复性每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果。粗脂肪含量在10%以上（含10%）允许相对偏差为3%。粗脂肪含量在10%以下时，允许相对偏差为5%。 周五 实验九 无氮浸出物（NFE）的计算一、 原理：饲料中NFE主要指的是淀粉，葡萄糖、果糖、蔗糖、糊精、五碳糖胶，有机酸和不属于纤维素的其它碳水化合物。NFE的含量可通过差减计算求得，即扣除其他养分含量后求得的百分含量就是饲料中NFE的含量。二、 计算：NFE%=1H2O%CP%CF%EE%Ash%=DM%CP%CF%EE%Ash%周六上午 实验十 硝酸盐的测定 专心-专注-专业