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动物细胞工程多莉动物细胞工程的成果口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗、乙型肝炎疫苗、及干扰素、凝血因子和、生长激素、免疫球蛋白以及单克隆抗体等。 人耳鼠动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术基础基础为什么要进行动物细胞培养?什么是动物细胞培养?如何进行细胞培养?动物细胞工程之一 -动物细胞培养 从动物机体中取出相关组织，将它们分散从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。这些细胞生长和增殖。一、动物细胞培养一、动物细胞培养发展历史发展历史: : 20 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。争论。19071907年，美国生物学家哈里森年，美国生物学家哈里森(Harrison)(Harrison)从蝌从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。动物细胞培养的概念：动物细胞培养的概念： 动物细胞培动物细胞培养就是从动物有养就是从动物有机体中取出相关机体中取出相关的组织的组织,将它分散将它分散成单个细胞成单个细胞,然后然后,放在适宜的培养放在适宜的培养基中基中,让这些细胞让这些细胞生长和增殖生长和增殖.(一一)动物细胞培养过程：动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制胰蛋白酶胰蛋白酶传代培养传代培养单个细胞单个细胞加加培养液培养液动物组织细胞间隙中动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织定弹性和韧性的组织和器官。和器官。（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）动物细胞的培养过程动物细胞的培养过程 幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础关键词:接触抑制细胞贴壁原代培养传代培养接触抑制(CONTACT INHIBITION) 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。有关概念有关概念 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第养的第1代细胞与传代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养代培养。细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限无限传代传代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞株细胞株细胞系细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖:遗传物质改变遗传物质改变有关概念有关概念细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至10代左右细胞代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到活到4050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞系：细胞株传代至细胞株传代至50代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。容易传代培养。思考讨论：在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶思考讨论：在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？用胃蛋白酶行吗？对取出的动物组织进行处理？用胃蛋白酶行吗？ 胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 （二）动物细胞培养的条件（二）动物细胞培养的条件1.无菌无毒的环境无菌无毒的环境2.营养营养3.温度和温度和pH4.气体环境气体环境 (二二)动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件无菌、无毒的环境无菌、无毒的环境:培养液和所有培养用具进行无菌处理培养液和所有培养用具进行无菌处理措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液营养营养:糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、激素等）和动物血清生素、激素等）和动物血清温度和温度和PH: 气体环境气体环境:36.50.5 7.2-7.4O2 CO2 95空气空气 5的的CO2思考：思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体发育成新的动物个体（三）动物细胞培养技术的应用（三）动物细胞培养技术的应用 1 1、蛋白质生物制品的生产、蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2 2、基因工程离不开动物细胞培养、基因工程离不开动物细胞培养 3 3、用于检测有毒物质、用于检测有毒物质 4 4、细胞的生理、药理、病理研究、细胞的生理、药理、病理研究 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植 培养病变细胞用于研究培养病变细胞用于研究细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系、细胞株、细胞系、细胞产品细胞产品植物体、细胞产品植物体、细胞产品培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或 细胞分泌产物细胞分泌产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等用途用途葡萄糖、葡萄糖、动物血清动物血清蔗糖、蔗糖、 植物激素植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体、半固体固体、半固体培养基培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、概念、概念 动物核移植是将动物的一个细胞的细动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核胞核,移如入一个已经去掉细胞核的卵母细移如入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎使其重组并发育成一个新的胚胎,这这个新的胚胎最终发育为动物个体个新的胚胎最终发育为动物个体.2、类型、类型 体细胞核移植体细胞核移植 胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植核移植技术核移植技术3.克隆羊培育过程克隆羊培育过程黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另另一头绵羊的子宫一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利胚胎移植技术胚胎移植技术 供体供体体细胞体细胞卵巢卵卵巢卵母细胞母细胞细胞培养细胞培养体细胞体细胞去核去核减减中期中期无核卵无核卵母细胞母细胞细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞重组胚胎重组胚胎胚胎移植胚胎移植代孕动物代孕动物的子宫的子宫克隆动物克隆动物3、过程：、过程：遗传物质与供体相同，性状基本相同遗传物质与供体相同，性状基本相同体积大易操作，营养物质丰富；含有体积大易操作，营养物质丰富；含有促进细胞核全能性表达的物质。促进细胞核全能性表达的物质。细胞细胞培养培养注入注入4.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景4、体细胞核移植技术的应用前景、体细胞核移植技术的应用前景 加速家畜遗传改良，促进优良畜群繁育。加速家畜遗传改良，促进优良畜群繁育。 保护濒危物种。保护濒危物种。 生产医用蛋白。生产医用蛋白。 治疗人类疾病：转基因克隆动物细胞、组织和治疗人类疾病：转基因克隆动物细胞、组织和器官可作为异种移植的供体。器官可作为异种移植的供体。 了解胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的发了解胚胎发育及衰老过程，追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。展过程和治疗疾病。5.体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题成功率低成功率低克隆动物存在健康问题克隆动物存在健康问题克隆动物食品的安全性问克隆动物食品的安全性问题存在争议。题存在争议。1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术的基础是（、动物细胞工程技术的基础是（ ）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD 3 3、动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于、动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A.A.培养基不同培养基不同 B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株A4 4、下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是、下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是A.A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B.B.将所取的组织先用胰蛋白酶进行处理使其分散成单个细将所取的组织先用胰蛋白酶进行处理使其分散成单个细胞胞C.C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液成悬浮液D.D.动物细胞培养只能传动物细胞培养只能传5050代左右，所培养的细胞就衰老死代左右，所培养的细胞就衰老死亡亡D苏丹红是一种人工色素（工业染料），它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员以小鼠为实验材料，用“动物细胞培养技术”对苏丹红毒性进行了检测。（1）该方法检测有毒物质毒性的指标是 。（2）请完善检测苏丹红毒性的实验。主要实验步骤： 第一步，取大小相同的六只培养瓶依次编号为l6，分别加入等量相同的培养液和小鼠细胞；第二步： ；第三步： 。结果如下表：结论： 。变异细胞占全部培养细胞的比例向1号瓶中加入适量的水，向26号瓶中加入等量不同浓度的苏丹红添加剂。培养一段时间后，取样制成临时装片，观察记录变异细胞的数目。低浓度的苏丹红毒性很小，随浓度增加毒性逐渐增强。继哺乳动物乳腺发生器研发成功后，膀胱生物发生器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培养出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答：（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是 。（2）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的细胞中特异表达。（5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠细胞的 转入 细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为 。该重组细胞发育的过程中还应用了技术。显微注射法膀胱上皮细胞核 去核的卵母细胞细胞核移植动物细胞培养动物细胞培养技术的应用?一、动物细胞融合一、动物细胞融合 细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用二、动物细胞融合二、动物细胞融合4.诱导融合的方法：诱导融合的方法：1.概念：概念： 指两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。指两个或多个动物细胞结合成一个细胞的过程。3.融合的具体过程：融合的具体过程：仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染活性（不感染细胞）丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）保留融合活性（诱导细胞融合）2.原理：细胞膜的流动性原理：细胞膜的流动性物理法、化学法、灭活病毒物理法、化学法、灭活病毒杂交细胞杂交细胞先是细胞质融合，先是细胞质融合，细胞核的融合是在细胞核的融合是在第一次有丝分裂时第一次有丝分裂时完成的。完成的。细胞细胞A细胞细胞B杂交细胞杂交细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 细胞融合技术应用于哪些方面？细胞融合技术应用于哪些方面？突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能成为研究细胞遗传、细胞免疫肿瘤和生物新品种培成为研究细胞遗传、细胞免疫肿瘤和生物新品种培育及制备单克隆抗体等。育及制备单克隆抗体等。5.意义：意义：二、单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞（浆细胞）产生抗体。淋巴细胞（浆细胞）产生抗体。B淋巴细胞与抗体淋巴细胞与抗体B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。动物体内的动物体内的B淋巴细胞可以产生淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。原具有特异性免疫作用。每一个每一个B淋巴细胞只能分泌一种淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体。特异性抗体。单克隆抗体：单克隆抗体： 由单个由单个B淋巴细胞经过无性繁殖淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的（克隆），形成基因型相同的细胞群细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。异性强的抗体称为单克隆抗体。 如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞交瘤细胞 1、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体用特定的选择性培养基，选出杂交瘤细胞用多孔细胞培养板，利用特异抗原思考：思考：1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有骨髓瘤细胞分泌抗体的能力，而且还有骨髓瘤细胞无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体细胞无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体.细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。3 3、骨髓瘤细胞是癌细胞吗、骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ?有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。4 4、整个制备过程为何要经过两次筛选、整个制备过程为何要经过两次筛选? ?第一次：选择性培养基筛选得到第一次：选择性培养基筛选得到杂交瘤细胞杂交瘤细胞（多种多种）第二次：需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交第二次：需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异能产生特异性抗体的细胞群。性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是以产生的抗体必然是化学性质单一化学性质单一的，的，特异性强特异性强的单的单克隆抗体（这里的克隆抗体（这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，克隆的含义，只不过克隆的不是只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。） 3、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用（1）杂交瘤细胞既能）杂交瘤细胞既能迅速大量增殖迅速大量增殖，又能产生，又能产生专一的抗体专一的抗体（2）与常规抗体相比，单克隆抗体）与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，特异性强，灵敏度高，产量大，产量大，优越性十分明显优越性十分明显。（1）临床诊断）临床诊断（2）作为载体，运载抗癌药物，形成）作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”治疗肿治疗肿瘤瘤资料资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内位体内“病灶病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。踪及心肌梗塞的诊断。2、特点、特点小结小结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途细胞膜的流动性和细胞膜的流动性和植物细胞全能性植物细胞全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒获得杂种植株获得杂种植株形成杂种细胞，形成杂种细胞，制备单克隆抗体制备单克隆抗体植物细胞工程植物细胞工程动物细胞工程动物细胞工程技术技术手段手段分离细分离细胞的酶胞的酶杂种细杂种细胞的培胞的培养养培养基培养基的成分的成分植物组织培养、植物组织培养、植物体细胞杂交等植物体细胞杂交等动物细胞培养、动物细胞融合、单动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、核移植技术等克隆抗体、核移植技术等纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶脱分化脱分化再再分化分化 愈伤组织愈伤组织 根、芽根、芽 植物体植物体原代培养原代培养 传代培养传代培养 细胞株细胞株 细胞系细胞系蔗糖、维生素、矿质蔗糖、维生素、矿质元素、植物激素等元素、植物激素等葡萄糖、氨基酸、无机盐、葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等维生素和动物血清等 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B 淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C4、已知细胞合成、已知细胞合成DNA有有D和和S两条途径，其中两条途径，其中D途径能被氨基嘌途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种呤阻断。人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：请回答：（1）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有 中融合细胞。中融合细胞。（2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。细胞，并说原理。方法：方法： 。原理：原理： 培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞加入氨基嘌呤后使加入氨基嘌呤后使D合成途径阻断，仅有合成途径阻断，仅有D合成途径的骨合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞中可以利用淋巴细胞中的中的S途径合成途径合成DNA而增殖。而增殖。
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