玉米赤霉烯酮ELISA快速检测试剂盒操作说明书(1)word版本

学习 - 好资料博恒 ?玉米赤霉烯酮ELISA 快速检测试剂盒操作说明书1、 简介本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELISA 原理快速定量检测谷物、饲料中的玉米赤霉烯酮（ ZearaLenone,ZEN ）。谷物 /饲料的前处理包括：提取、过滤、稀释，处理时间大约为20-40 分钟。本试剂盒的检测限为：10 ppb；谷物 /饲料中 ZEN 的回收率 80%；批内、批间变异系数15% 。2、 试剂盒组成A. 24/48/96 孔 ZEN 酶标板 :3/6/12 条 8 孔B. 20 浓缩洗涤液：25mL ( 用蒸馏水稀释20 倍使用 )1 瓶C. ZEN 抗体 : 3/6/12mL1 瓶 (红盖 )D. 酶标二抗：3/6/12 mL1 瓶 (绿盖 )E. 显色液： 3/6/12 mL1 瓶 (蓝盖 )F. 终止液 :3/6 mL1 瓶 (黄盖 )G. ZEN 标准品 :1.5/2mL/ 瓶（ 0、30、 60、200、 500ppb）各 1 瓶H. 操作说明书1 份注意 ：标准品含有低浓度 ZEN 、终止液含 2 N H 2SO4，需小心取用；勿在有效期外使用本试剂盒。3、 贮存条件与有效期2-8避光贮存，忌0以下冻存，有效期见试剂盒内盖。4、 样品处理程序实验准备：配制60%甲醇水溶液（ v/v ， 60:40）和 20%甲醇水溶液（v/v ， 20:80）。注意：请精确配制上述溶液，以免影响检测的准确性。称取 5 g 具有代表性的粉碎样品于 100 mL 带塞三角瓶内，准确加入 25 mL 60% 甲醇水溶液。将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3 分钟后，用whatman 1 号滤纸过滤，收集滤液。取滤液 2mL ，加入 6 mL 20% 甲醇水溶液，混匀，用whatman 1 号滤纸过滤，此为样品待检液。注意 ：更多精品文档学习 - 好资料? 某些样品待检液 ( 如花生等 ) 久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。?若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8避光保存。? 试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（ 20-25）进行温度平衡。试剂用完后立即将其放置回 2-8冰箱内保存。? 在每个步骤操作时， 速度要快， 不要使板孔暴露在空气中时间过久，避免酶标板变干。未用完的酶标板需密闭于自封带内，防止受潮且避光保存于2-8冰箱内。?在温育时，避免光照，建议将酶标板置于湿盒内(在有盖容器内放置一块平整湿纱布)进行温育。? 若样品数量超过 20 份，请用多通道加样器操作。5、 定量检测程序5.1 实验准备： 从冰箱取出试剂盒，恢复至室温后，打开自封袋，取出所需数量的板条插入微孔架，记录空白、ZEN 标准品号及样品的位置（可参照下表所示）。其余板条封口后放入冰箱。将20浓缩洗涤液用超纯水或蒸馏水稀释20 倍，待用。123 12A样品空白B 标准品样品C样品标准品D 标准品样品E 标准品样品F标准品样品G样品样品H样品样品5.2加样： 空白孔加入 100 L 洗涤液 (不加 ZEN 抗体 )。ZEN 标准品孔和样品孔相应地加入标准品 ( ) 和样品待检液各50 L/孔（如上表所示加入） ，再加入 ZEN 抗体 (50L/孔 )，此时各孔中溶液体积为100L。将酶标板在水平桌面上轻微振荡（注意避免液体溅出），使之混匀，放入湿盒内( 在有盖容器内放置一块平整湿纱布)， 37温育 30 分钟。注意：此操作步骤要快，尽量保持前后孔温育时间一致，每次加样须更换新的吸头。5.3洗板：甩出孔中的液体， 用洗瓶或移液器将洗涤液加入各孔中(满孔 )，再次甩出孔中液体，更多精品文档学习 - 好资料将酶标板倒置在吸水纸上拍打以除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤三次(共洗四次 )。5.4加酶标二抗： 将洗好的酶标板平放，加入酶标二抗100L /孔，置于湿盒内， 37温育30 分钟。5.5洗板： 参照 5.35.6显色： 将洗好的酶标板平放，加入显色液100 L /孔， 37显色 5 分钟 (若显色较浅，可适当延长，但不宜超过10 分钟 )。5.7终止及测定： 将显色完毕的酶标板取出，加入终止液50L/ 孔，轻微震荡混匀，以空白孔调零，在 450 nm 处测量吸光值A （在加入终止液5 分钟内读取吸光值） 。5.8结果判定： 以 ZEN 标准品浓度30ppb、60ppb、200ppb、500ppb 的常用对数值（ 1gC）为横坐标，各浓度标准品相应的吸光值A 与 0ppb 的标准品 A 值的比值 (B/B 0%) 为纵坐标 B/B 0%=标准品（或样品）的吸光值/0ppb 标准品的吸光值 100% ，绘制标准曲线。根据样品孔的吸光值计算样品的B/B 0%值，查标准曲线，可得到相应样品中ZEN 的含量 (已考虑样品提取的稀释倍数，结果无需换算)。 (或可直接用 RADEWIN等专用 ELISA分析软件对数据进行分析得出结果)。如果检测结果高于检测上限， 请将待测样品提取液用30%甲醇水（ v/v ，30:70）稀释后再检测，测定结果乘以相应的稀释倍数。6、 限量 (定性 )检测程序样品处理程序见四，适用于同时定性检测多个限量标准不同的样品，以ZEN 标准品号 (60ppb) 作参照进行定性比较，不需作标准曲线。待测样品提取液根据限量标准的不同，用 30%的甲醇水溶液按下表稀释：限量标准60ppb500ppb待检样品提取液1mL0.3mL30%的甲醇水02.2mL稀释倍数150/66.1实验准备： 从冰箱取出试剂盒，恢复至室温后，打开自封袋，取出所需数量的板条插入微孔架，记录空白、ZEN 标准品号 (60ppb)及样品的位置，其余板条封口后放入冰箱。6.2反应： 空白孔加入100 L 洗涤液 (不加 ZEN 抗体 )。ZEN 标准品孔和样品孔相应地加入标准品号 (60ppb)和稀释后的待检样品提取液各50L/ 孔，再加入 ZEN 抗体 (50L / 孔)，将酶标板在水平桌面上轻微振荡（注意避免液体溅出），使之混匀，置湿盒内，37温育 30 分钟。 注意：此操作步骤要快，尽量保持前后孔温育时间一致，每次加样须更换新的吸头。6.3洗板： 参照 5.36.4加酶标二抗： 参照 5.46.5洗板： 参照 5.56.6显色： 参照 5.66.7终止及测定： 参照 5.7 ( 目测法不加终止液 )6.8 结果判定： 目测法 ( 未加终止液前目测)：比较样品孔与标准品参照孔的颜色，若样品更多精品文档学习 - 好资料孔显色比标准品参照浅，则为阳性，样品中ZEN 的含量超出限量标准；若深者，则为阴性；若颜色接近，则需用酶标仪测吸光值比较。仪器法：酶标仪检测在450nm 波长处各孔的吸光值A ，若样品的A 值 标准参照的A 值，为阳性，表示样品中ZEN 的含量超出限量标准；若样品A 值 标准参照A 值，为阴性。7、 自备仪器及试剂酶标仪（内置450nm 滤光片）或黄曲霉毒素B1 专用测定仪20-200L 微量移液器及配套吸头恒温培养箱（0 -50）、冰箱、感量0.01g 的天平、小型粉碎机或碾钵玻璃器皿：三角瓶、烧杯、分液漏斗、蒸发皿、量筒、具塞试管、滴管、移液管等其他：甲醇、whatman 1 号滤纸、吸水纸等8、 国家标准GB/T 19540-2004饲料中玉米赤霉烯酮的测定薄板层析法和ELISA 分析法GB 2715 2005 粮食卫生标准小麦和玉米中玉米赤霉烯酮限量指标为60g/kgGB 13078.2-2006饲料卫生标准饲料和玉米中玉米赤霉烯酮的允许量500 g/kg地址：南昌市高新区火炬大道201 号江西留学生创业园邮编： 330029电话： 0791-8130250传真： 更多精品文档