高考生物二轮专题复习 第一部分 专题5 第1讲 基因工程与克隆技术课件

两个核苷酸之间的两个核苷酸之间的_作用作用部位部位携带目的基因进入携带目的基因进入_拼接拼接DNA 片段，形片段，形成成_切割切割_和载体和载体作用作用载体载体DNA 连接酶连接酶限制酶限制酶目的基因目的基因重组重组DNA受体细胞受体细胞磷酸二酯键磷酸二酯键质粒、质粒、噬菌体的衍生噬菌体的衍生物、动植物病毒等物、动植物病毒等Ecoli DNA 连接连接酶、酶、T4 DNA 连连接酶接酶EcoR 限制限制酶酶 Sma 限制限制酶酶常用常用类型类型能在宿主细胞内稳能在宿主细胞内稳定存在并大量复制定存在并大量复制有多个有多个_具有特殊的具有特殊的_Ecoli DNA 连连接酶只能连接接酶只能连接_T4 DNA 连接连接酶能连接酶能连接_和平末端和平末端识别双链识别双链DNA 分子的某分子的某种种_在特定位点在特定位点上切割上切割作用作用特点特点(条件条件)载体载体DNA 连接酶连接酶限制酶限制酶特定核苷酸特定核苷酸序列序列黏性末端黏性末端限制酶切割限制酶切割位点位点黏性末黏性末端端标记基标记基因因目的基因目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在与单链相应互补序列结合，然后在_作用下延伸作用下延伸PCR技术技术扩增扩增以以RNA为模板，在为模板，在 作用下人工合成作用下人工合成反转录法反转录法已知核苷酸序列的已知核苷酸序列的 ，直接利用，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板合成仪用化学方法合成，不需要模板化学合成化学合成人人工工合合成成从自然界已有的物种中分离，如从从自然界已有的物种中分离，如从_中获取中获取直接分离直接分离具体操作具体操作方法方法基因文库基因文库较小基因较小基因逆转录酶逆转录酶DNA聚合聚合酶酶原核细胞原核细胞_受精卵、体细胞受精卵、体细胞受体受体细胞细胞_法法(用用Ca2处理处理)_技术技术_法、法、基因枪法、基因枪法、_法法常用常用方法方法微生物细胞微生物细胞动物细胞动物细胞植物细胞植物细胞花粉花粉管通道管通道显微注射显微注射感受态细胞感受态细胞受精卵受精卵农杆菌转化农杆菌转化过程过程动物胚胎或出生不久的幼龄动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织动物的器官或组织植物幼嫩部位植物幼嫩部位取材取材动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养项目项目蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产皮肤移植材料的培育皮肤移植材料的培育检测有毒物质检测有毒物质生理、病理、药理学的研究生理、病理、药理学的研究植株快速繁殖植株快速繁殖脱毒植株的培养脱毒植株的培养人工种子人工种子生产药物、杀虫剂等生产药物、杀虫剂等转基因植物的培育转基因植物的培育应用应用无菌、无毒无菌、无毒营养，血清等营养，血清等温度和温度和pH气体环境：气体环境：O2、CO2无菌无菌营养营养适宜条件适宜条件条件条件新的细胞，不形成个体，不体新的细胞，不形成个体，不体现全能性现全能性获得植株个体，可以体获得植株个体，可以体现全能性现全能性结果结果动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养项目项目过程过程细胞膜的细胞膜的_细胞膜的细胞膜的 _、细胞、细胞的的_原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交流动性流动性流动性流动性全能性全能性 突破了有性杂交方法的局突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能限，使远缘杂交成为可能克服了远缘杂交的克服了远缘杂交的_，获得杂种植株，获得杂种植株意义意义杂交细胞杂交细胞 杂种植株杂种植株结果结果除物理法和化学法外还可除物理法和化学法外还可以用以用_诱导诱导物理法：离心、电激、物理法：离心、电激、振动；振动；化学法：聚乙二醇等试化学法：聚乙二醇等试剂诱导剂诱导融合方法融合方法_或胶原蛋白酶或胶原蛋白酶纤维素酶和纤维素酶和_相关酶相关酶动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交果胶酶果胶酶 胰蛋白酶胰蛋白酶 灭活的病毒灭活的病毒 不亲不亲 和性和性