5.1《DNA的粗提取与鉴定》活动单李百胜

DNA的粗提取和鉴定知识要点：1. DNA的物理化学性质，尤其是DNA的溶解性;2二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。、DNA的粗提取的原理思考1 : DNA存在于真核生物细胞的哪些部位？思考2 :提取生物大分子的一般思路是什么？1、DNA的性质:在NaCI溶液中的溶解度对蛋白酶的耐受性对高温的耐受性对洗涤剂的 耐受性DNA蛋白质DNA和蛋白质的溶解性、对酶、高温和洗涤剂的耐受性DNA粗提取的原理有些哪些？i、 DNA 在 mol/L NaCI溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液，而蛋白质等能够溶解2、DNA鉴定的原理：在的条件下，DNA遇会被染成cTSmol/L 度、DNA粗提取的主要步骤：1 材料选择：适于作实验材的材料：选用 的生物材料；如鸡（红）血，其适宜作为实验材料的原因：鸡血（红）细胞核的易 DNA含量丰富，材料易得；鸡血细胞极 吸水胀破。哺乳动物红细胞呢？2、主要实验步骤（以鸡血红细胞为例）：厂方法：将510mL鸡血细胞液 加入20mL中；用玻棒同方向搅拌5min ;用34纱布过滤，以除去颗粒较大的杂质过滤；收破碎细胞，释放Q方法：向滤液中加入2倍体积的 工诧” *滤获取；溶解细胞核二1内 DNAK ；mol/LNaCI 溶液，搅拌1min ；过目的：使与DNA结合的_ J 高溶液NaCI溶液中解聚，释放出;DNA溶解于注意：按同一方向搅拌厂方法：沿烧杯壁向滤液中缓慢加入蒸憎水，并轻轻按同一方向搅拌，使DNA析出, DNA析出直到;可以在玻棒上收集到黏稠物(或过滤或离心收集黏稠物)目的：降低NaCI溶液浓度达到mol/L 皿V左右使DNA析出3min，使.注意：加入的蒸帼水不能过多使NaCI溶液浓度过低，DNA又会:DNA的:初步纯化：DNA充分溶解；过滤，收集滤液；向滤液中贴壁缓慢加入50mL冷冻的95% 乙醇，并用玻棒按冋一方向缓慢、均匀地搅拌，在玻棒上收集白色丝状物 (DNA )广方法：向20mL 2mol/LNaCI溶液中加入黏稠物并按同一方向搅拌I原理：DNA不溶于中，而蛋白质能溶于归纳：本实验中几次过滤？过滤的目的是什么？中O过滤一：过滤二：过滤三：本实验中几次加入蒸馆水的目的各是什么？第一次：向鸡血细胞液中加入蒸绸水，目的： 第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCI溶液中加入蒸f留水，目的：拓展：1、以菜花为材料进行实验时，如何获得核物质？取材、剪碎7加入洗涤剂、食盐7研磨、过滤加洗涤剂的目的：加入食盐的目的：2、分析教材中方案一、二、三的原理。方案一：方案二：方案三：3、 探究不同方法、洗涤剂、食盐用量对DNA粗提取量的影响（说说实验思路）三、DNA的鉴定：1、 方法：取甲、乙两支试管，并向其中加入5mL （等量）的2mol/LNaCI溶液；向甲试管中加入粗提取的DNA并搅拌使DNA溶解；向两支试管中各加入4mL （等量）二苯胺试剂，混匀，沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管的颜色（蓝色）变化。2、注意点：实验中需要对照，目的：证明四、实验结果分析与评价1、实验结果评价：是否提取到 DNA观察提取的DNA颜色：如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定：出现蓝色说 明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备。2、粗提取得到的丝状物为什么略带黄色？实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。3、 影响丝状物总量的因素有哪些？实验材料种类和数量、溶解核DNA时的NaCI溶液浓度、实验方法、搅拌方法（搅拌不当可能破坏DNA）五、案例：（快速阅读、理解步骤原理）以菜花为实验材料进行【实验材料准备】将新鲜菜花和体积分 数为DNA的粗提取【提取DNA的具体步骤】95%的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24 h1、取材称取30 g菜花，去梗取花，切碎。2、 研磨 将碎菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液，充分研磨10 min。教材中建议采用洗发香波、洗涤剂等一些去污剂，使植物细胞膜破碎，释放学生可以设置对照实验，比较哪一种方法可以提取到纯度更高的高纯度的DNA。一般实验室提取DNA都采用一种阳离子去污剂一一十六烷三甲基澳化鞍分离缓冲液，（体积比为24 ： 1）DNA。碎，同时将DNA与植物中多糖等杂质分开，再用氯仿一异丙醇混合液使细胞膜破抽提去除杂质蛋白，得到高纯度的DNAo（有条件的学校可将25 min，取上清液放入95%的预冷乙醇溶液中，）沉淀35 min后、可3、过滤在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/mi n的转速，离心烧杯中）。在4 C冰箱中放置几分钟后，再取上清液。4、沉淀将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为并用见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。八训练题：在DNA粗提取的过程中，两次向烧杯中加入蒸憎水的作用分别是A. 稀释血液；冲洗样品B.使血细胞破裂；降低氯化钠的浓度C.使血细胞破裂；增大DNA的溶解度D .使血细胞破裂；冲洗样品2.下列实验中所用试剂错误的是A. 在观察植物细胞有丝分裂实验中，使用醋酸洋红溶液使染色体着色B. 在提取叶绿体色素实验中，使用丙酮提取色素DNAC. 在DNA的粗提取与鉴定实验中，使用氯化钠溶液析出3 D.在蛋白质的鉴定实验中，使用苏丹川染液鉴定蛋白质NaCI的物质量为多少mol/L时，DNA的溶解度最小4- A. 0.12 B . 0.13C . 0.14 D . 0.15在提嫩酌姗蔽幡苗飜网耐闵的是A.溶解杂质从细胞核中癩解蛋白质C .析出DNA.溶解DNA5.A. NaCI溶液提瑕翻OW溶液是A . NaCI溶液B .酒精C蒸憎水.柠檬酸钠6.DNA所用的溶液B .冷却90%的酒精.加热95%的酒精D .冷却95%的酒精玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液（玻璃棒不要直插到烧杯底部7.DNA遇一苯胺（沸水浴）时，会染成A .砖红色B .红色C .紫色&可以鉴定DNA的物质是蓝色 rm i iA 斐林试剂B . 95%的酒精C .甲基绿溶液D9.破译生苯胺溶液物基因组DNA的遗传信息或进行基因操作，首先要提取细胞核DNA下列不适宜作为DNA提取的实验 材料是A .鸡血细胞B .蛙的红细胞C.人的成熟红细胞D .菜花操作及其作用的表述.正10 .（多选）下表是尖于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、确的是试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸馆水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馆水加入到溶解有DNA的NaCI中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCI中产生特定的颜色反应门（多选）下列矢于DNA粗提取与鉴定的说法不正确的是A.溶液中的溶解度洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在NaCI(I )实验材料选用鸡血球液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血球(2)在图A所示的实验步骤中加蒸憎Tf5f岛昨液懸中c所示实验步娠(3)为鉴定实验所得丝状物主要成分是 溶液，结果丝B. 在探究洗涤剂对植物细胞 DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C. 常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色D. 将滤液放在6075 C的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了 DNA和蛋白质对高温耐受性的不同12 如图所示是尖于“ DNA的粗提取和物理性状观察”实验：液中含有较高含量的水的目的是，通过图B所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入2 mol/L NaCI溶液的目的是中加蒸憎水的目的是 。DNA可滴加状物被染成 少年智则国智，少年富则国富，少年强则国强，少年独立则国独立，少年自由则国自由，少年进步则国进 步，少年胜于欧洲，则国胜于欧洲，少年雄于地球，则国雄于地球。