浙大生物化学试题

浙江大学2001年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号555 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 一 是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP 生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二 写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三 名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四 综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要 求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异 同 3 请对中心法则加以阐述 4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,请说明其工作原理并简述用该法分离 蛋白质的实验操作步骤 浙江大学2002年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号570 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 一 是非题1/20 1 所谓肽单位就是指组成蛋白质的氨基酸残基 2在竞争性抑制剂存在的情况下,即使加入足够量的底物,酶仍不能达到其催化的最大反应 速度 3 一级结构决定空间结构,所以蛋白质合成中新生肽链的折叠无须其他蛋白质的帮助. 4 Sanger反应(二硝基氟苯法)用以鉴定多肽链羧基末端氨基酸,而Edman反应(苯异硫氰酸 酯法)则用以鉴定多肽链氨基末端氨基酸. 5 与胆固醇的化学结构最相近的维生素是维生素B12. 6 在某些生物中,RNA也可以是遗传信息的基本携带者 7 生长激素释放抑制因子是一个14肽 8 维生素B1的辅酶形式是TPP 9 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 10 肾上腺素和胰高血糖素都通过cAMP很快地对机体组织发挥作用 11 呼吸链电子载体是按照其标准势能逐步下降而氧化还原电势逐步增加的方向排列的 12 CO对氧化磷酸化的影响主要是抑制ATP的形成过程,但不抑制电子传递过程 13 花生四烯酸广泛存在与植物中,它是哺乳动物的必需脂肪酸 14 即使在饥饿状态下,肝脏也不利用酮体作为燃料分子,而大脑组织在血糖供应不足时会 利用酮体作为燃料分子供能 15 不同生物对氨基氮的排泄方式不同,如鱼类以氨的形式直接将氨基氮排出体外;鸟类以 尿酸形式,植物和动物以尿素形式将氨基氮排出体外 16 紫外辐射引起的DNA损伤可通过光复活作用修复. 光复活酶虽然在生物界分布很广,从 低等单细胞生物直到鸟类都有,但高等哺乳类中却没有 17 逆转录酶存在与所有RNA病毒中,在RNA病毒复制中起作用 18 遗传密码字典在生物界并非完全通用,像原生动物纤毛虫就有例外 19 糖基化是真核生物蛋白质修饰的一种重要方式,内质网和高尔基体两种亚细胞器都能 对蛋白质进行糖基化修饰 20 真核生物中同一转录单位可以通过不同的拼接而产生不同的蛋白质合成模板mRNA 二 用化学结构式完成下列酶促反应4/20 1异柠檬酸裂解酶 2 丙酮酸羧化酶 3 磷酸戊糖异构酶 4 烯脂酰辅酶A水化酶 5 丙氨酰tRNA合成酶 三 综合题10/60 1 什么是蛋白质的二级结构?稳定二级结构的主要作用力是什么?多肽链中存在的脯氨酸 对螺旋的形成有何影响,为什么?哪种蛋白质完全由螺旋构成? 2 电泳是分离生物大分子的主要方法之一,简述其原理;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以测定 蛋白质的分子量,其原理是什么? 分子量不同的蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁 移率与其分子量有什么关系? 3 何谓酶促反应动力学?底物浓度,温度和PH值对酶促反应速度各有什么影响?试分析之. 如果希望反应初速度达到其最大速度的90%,底物浓度应为多大? 4 何谓核酸变性?引起核酸变性的因素有哪些?何谓DNA的熔解温度(Tm)?其大小与哪些因 素有关? 5从结构和功能两大方面比较E.coli DNA 聚合酶III和RNA聚合酶 6 Jacob 和Monod在上个世纪60年代初提出乳糖操纵子模型,开创了基因表达调节研究的 新领域,具有划时代意义.请你试述乳糖操纵子理论. 浙江大学2003年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效一 是非题1/201 氧化磷酸化作用是ATP的生成基于与相偶联的磷酸化作用.( )2 酶的化学本质是蛋白质.( )3 多肽链结构中,一个氨基酸残基就是一个肽单位.( ) 4 FMN和FAD的组成中有核黄素.( )5 在细菌的复制中起主要作用的是DNA聚合酶I( )6 DNA变性后其粘度增大( )7乙醛酸循环在所有的高等植物中都存在.( )8 EMP途径本身只产生还原剂,而不产生高能中间产物.( )9酶促反应的能量效应是降低反应的活化能.( )10 与胆固醇的化学结构最相近的维生素是维生素B12.( )11 CoQ只能作为电子传递的中间载体.( )12 DNA双螺旋结构的稳定性主要来自碱基对之间的氢键( )13 组成蛋白质的所有氨基酸中,由于含有的-碳原子属于不对称碳原子,因此都具有旋光性.( )14 mRNA的3端polyA结构是由DNA的非编码区转录的.( )15 糖酵解的限速酶为丙酮酸激酶.( )16 乙酰辅酶A是进入TCA循环还是生成酮体,主要由草酰乙酸浓度调控.( )17 E.coli RNA 聚合酶的 亚基与转录的终止识别有关.( )18 氧化还原电对中,电子从电势较低的电对流向电势较高的电对,这是自由能降低的现象.( )19 葡萄糖和果糖都具有还原性.( ) 20 如果加入足够量的底物,即使有竞争性抑制剂存在,酶催化的最大反应速度Vmax是可以达到的( )二 写出下列物质的结构式2/101 Ser 2 U 3 草酰乙酸 4 ATP 5 D-glucose 三 写出下列酶催化的生化反应式( 不要求写结构式)3/301 磷酸果糖激酶 2 磷酸甘油变位酶 3 丙酮酸脱氢酶系 4 顺乌头酸酶5 异柠檬酸裂解酶 6 脂酰辅酶A脱氢酶 7 谷丙转氨酶 8 鸟氨酸转氨甲酰酶9 DNA合成酶 10 氨酰tRNA合成酶四 综合题15/901 简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理,你使用该技术分离和检测过何种物质?主要操作步骤有哪些?2 质粒是基因工程中最常用的载体,为获得某质粒(如pUC18)DNA,请你设计一个简单的实验过程(步骤).3 谈谈你所了解的生物化学近年来的新进展.4 DNA双螺旋模型是哪年由谁提出的?简述其基本内容.为什么说该模型的提出是分子生物学发展史上的里程碑,具有划时代的贡献?5 何谓变性,那些因素可以引起蛋白质的变性?何谓别构(变构)?举一例说明.6 试述三羧酸循环是如何沟通糖类,脂类和蛋白质三大有机物的代谢的?浙江大学2004年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学名词解释50)1 埃德曼降解2 抗体3 诱导契合学说4 热力学第二定律5 补救途径6 荷尔蒙7 竞争性抑制8 细胞膜9 DNA聚合酶10 基因表达问答题:1 根据国际分类法将酶分成哪几大类,分别叙述它们的酶反应特征 (15)2 对生物体转录和复制的特征进行说明比较 (15)还有几份数学试卷,可不知道怎么上传压缩文件,如果想要,望告之方法3 叙述基因文库和cDNA文库的制作步骤并进行它们的特征比较 (20)4 用图表示说明生物体内三羧酸循环ATP产生的途径和它们的调控机理 (20)5 比较说明SDS-PAGE(SDS-聚丙烯酰胺电泳)和琼脂糖凝胶电泳的物质分离原理和特点 (30)2004浙江大学分子试题1 阐述PCR技术原理 (15)2 描述一种研究基因表达的方法 (15)3 阐述蛋白质生物合成途径 (25)4 阐述一条真核细胞信号转导途径(从信号接受到调控基因表达) (25)5 阐述一条反向遗传克隆功能基因的途径 (20)6 A,B和C三个基因都决定矮牵牛花的花色,当基因型为A-B-C-时表型为红色,其余为白 色.AaBbCc的个体与三种纯系(系1系2和系3)杂交.分别的红色:白花1:3,1:7 和1:1的分离比.问:系1和系2杂交,F1基因型和表型如何,F2的基因型和表型如何 系3和系2杂交,F1基因型和表型如何,F2的基因型和表型如何 (要写出分离比) (25)7 什么是染色体重排和基因重排 它们在发育中有和作用 它们在进化中有和作用(25)06浙江大学分子生物学试卷一、名词解释：(25%) 1、RFLP:限制性片段长度多态性，是由DNA变异(产生新的酶切位点或消除原有的酶切位点)导致在限制性核酸内切酶酶切时产生不同的长度片段。可借助Southern Blotting或PCR的方法进行检测。2、SSR：简章序列重复多态性，引物是根据微卫星DNA重复序列两翼的特定短序列设计，用来扩增重复序列本身。由于重复的长度变化极大，所以是检测多态性的一种有效方法。其特点包括：一般检测到的是一个单一的多等位基因位点，共显性遗传，故可鉴别杂合子与纯合子；得到的结果重复性很高。3、EST：表达序列标签，是指从不同的组织构建的cDNA文库中，随机挑选不同的克隆，进行克隆的部分测序所产生的cDNA序列。随着高通量测序技术的进步，使人们越来越相信，大规模地产生EST，结合生物信息学的手段，将为人们提供一种快速有效的发现新基因的方法。4、STS：序列标签位点，是由特定引物序列所界定的一类标记的统称，短的在基因组上是可以被唯一操作的序列，因而可以确定在物理图谱上的特定位置。5、CAP: CAP即分解代谢物基因活化蛋白是一种激活蛋白，因为细菌的许多启动子为弱启动子，本身与RNA聚合酶的作用较弱，在有CAP蛋白这类激活蛋白存在下，可使RNA聚合酶与启动子的亲和力增强，CAP蛋白的活性强烈依赖cAMP。 6、AFLP：扩增片段长度多态性，其特点是把RFLP和PCR结合了起来。其基本步骤是：把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3?端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3?端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。7、SNP：单核苷酸多态性，是一种较为新型的分子标记，其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异，因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。8、FISH：荧光原位杂交技术，是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。9、Genome：基因组，有机体或细胞中的所有DNA，包括核中的染色体和线粒体中的DNA。10、RNA in situ hybridization：RNA原位杂交，是利用cDNA为探针来检测与其互补的mRNA链在细菌或其他真核细胞中的位置，是检测基因组织特性表达的常用方法。11、单克隆抗体：每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。12、基因芯片：所谓基因芯片，是指将大量探针分子固定于支持物，上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上，所以一次可以对大量的DNA分子或RNA分子进行检测分析，从而解决了传统核酸印迹杂交，技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低，等不足，而且，通过设计不同的探针阵列，用一定的分析方法，还可以用于序列分析，称作杂交测序。二、描述cDNA文库构建原理与方法（25%）：（1）cDNA获得方法，（2）克隆方法，（3）文库质量定义。答： cDNA：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA(complementary DNA，cDNA)，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受菌体，扩增为cDNA文库(cDNA library)，然后再采用适当方法从cDNA文库种筛选出目的cDNA。与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包括了细胞全部mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。 （1） cDNA获得方法：Total RNA的提取；mRNA的分离；cDNA双链合成：Superscipt IIRT合成第一链，cDNA第二链的合成，双链cDNA末端补平，EcoR I adaptor 加接，双链cDNA末端的磷酸化及Xho I酶切，胶回收cDNA。（2） 克隆方法：载体制备：pBlueScriptII的提取，pBlueScriptII的双酶切消化，载体去磷酸化，载体效率检测；cDNA双链和载体的连接：连接，检测（PCR方法）；电转化：电转化感受态细胞的制备，连接产物纯化，电转化；快速鉴定、菌落PCRpBlueScript cDNA文库扩增。（3） 文库质量定义：评价一个文库是否有实用价值主要在于文库的含量和插入片段的大小两个方面。所构建的文库中必须有足够多的克隆数, 这样才能确保基因组cDNA 中的每一个序列至少有一个拷贝存在于重组文库中, 为达到这一要求, 文库的容量应不小于1.7105 , 同时为保证cDNA片段的完整性, 插入片段的平均大小应不小于1kb。三、阐述基因突变的概念及引起突变的可能途径(25%)：（1）化学诱变，（2）物理诱变，（3）T-DNA插入，（4）缺失、插入，（5）无意突变概念，（6）碱基修复概念答：基因突变 属分子水平上的变异,是指染色体上个别基因所发生的分子结构的变化，基因突变在自然界普遍存在。基因突变的方式很多，主要有：（1）化学诱变，基因突变可以由某些化学物质所引起，这些化学物质称为化学诱变剂。现已知很多的化学诱变剂，它们诱变的机制是不同的。在DNA复制过程由于碱基类似物的取代，碱基的化学修饰以及碱基的插入和缺失都会引起突变。（2）物理诱变，利用物理因素引起基因突变的称物理诱变，如X射线、紫外线、电离辐射等物理因素可造成 （3）T-DNA插入，改变读码或变成假基因。（4）移码突变：基因中插入或者缺失一个或几个碱基对，会使DNA的阅读框架（读码框）发生改变，导致插入或缺失部位之后的所有密码子都跟着发生变化，结果产生一种异常的多肽链。移码突变诱发的原因是一些像吖啶类染料分子能插入DNA分子，使DNA复制时发生差错，导致移码突变。（5）无意突变，由于一对或几对碱基对的改变而使决定某一氨基酸的密码子变成一个终止密码子的基因突变。（6）碱基修复：DNA损伤的修复系统主要有以下几个：损伤碱基的直接修复；切除修复，包括碱基切除修复、核苷酸切除修复和DNA交链的切除修复；错配修复；重组修复，又称复制后修复；跨损伤DNA合成，这是一种利用损伤核苷酸为模板，通过DNA聚合酶I使碱基掺入到复制终止处进行DNA合成，从而延长DNA链的修复。基因突变的特点为：第一，基因突变在生物界中是普遍存在的。第二，基因突变是随机发生的。第三，在自然状态下，对一种生物来说，基因突变的频率是很低的。第四，大多数基因突变对生物体是有害的，由于任何一种生物都是长期进化过程的产物，它们与环境条件已经取得了高度的协调。第五，基因突变是不定向的。四、阐述一条反向遗传克隆功能基因的途径(25%)答：反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上，通过对靶基因进行必要的加工和修饰，如定点突变、基因插入缺失、基因置换等，再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组，让其装配出具有生命活性的个体，研究生物体基因组的结构与功能，以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容。比较典型的反向遗传克隆功能基因的途径如RNAi。RNAi的机制可能是细胞内双链RNA在Dicer酶的作用下，可形成-22 bp大小的小干扰RNA(small interfering RNAs，siRNAs)，siRNAs可进一步掺入多组分核酸酶并使其激活，从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA，完全抑制了该基因在细胞内的翻译和表达(下略)。