《DNA的粗提取与鉴定》活动单

优选精品文档欢迎下载选用DNA的粗提取和鉴定知识要点：1.DNA的物理化学性质，尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1:DNA存在于真核生物细胞的哪些部位？思考2:提取生物大分子的一般思路是什么？1、DNA的性质:DNA和蛋白质的溶解性、对酶、高温和洗涤剂的耐受性在NaCl溶液中的溶解度对蛋白酶的耐受性对高温的耐受性对洗涤剂的耐受性DNA蛋白质溶解度DNA粗提取的原理有些哪些？i、DNA在mol/LNaCl溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液，而蛋白质等能够溶解2、DNA鉴定的原理：在的条件下，DNA遇会被染成。二、DNA粗提取的主要步骤：1、材料选择：适于作实验材的材料：选用的生物材料；如鸡（红）血，其适宜作为实验材料的原因：鸡血（红）细胞核的DNA含量丰富，材料易得；鸡血细胞极易吸水胀破。哺乳动物红细胞呢？2、主要实验步骤（以鸡血红细胞为例）：方法：将510mL鸡血细胞液加入20mL中；用玻棒同方1*向搅拌5min;用34纱布过滤，以除去颗粒较大的杂质过滤；:破碎细胞，释放J西徉；,收集i*CNA.（格物质？.*:目的：破坏细胞，释放核物质I注意：搅拌不能用力过大，以防止打碎DNA分子；方法：向滤液中加入2倍体积的mol/LNaCl溶液，搅拌1min;：溶解细胞核;过滤获取：内DNAX目的：使与DNA结合的解聚，释放出;DNA溶解于高溶液NNaCl溶液中、注意：按同一方向搅拌方法：沿烧杯壁向滤液中缓慢加入蒸储水，并轻轻按同一方向搅拌，使DNA析 DNA :析出：出，直到;可以在玻棒上收集到黏稠物（或过滤或离心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液浓度达到mol/L左右，使DNA析出k注意：加入的蒸储水不能过多，使NaCl溶液浓度过低，DN取会尸方法：向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向搅拌3min,使DNA充分溶解；过滤，收集滤液；向滤液中贴壁缓慢加入50mL冷冻的95%乙醇，并用玻棒按同一方向缓慢、均匀地搅拌，在玻棒上收集白色丝状物（DNA）L原理：DNA不溶于中，而蛋白质能溶于史二归纳：本实验中几次过滤？过滤的目的是什么？过滤一：过滤二：过滤三：本实验中几次加入蒸储水的目的各是什么？第一次：向鸡血细胞液中加入蒸储水，目的：第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸储水，目的:拓展：1、以菜花为材料进行实验时，如何获得核物质？取材、剪碎一加入洗涤剂、食盐一研磨、过滤加洗涤剂的目的：加入食盐的目的：2、分析教材中方案一、二、三的原理。万案一：万案一：方案二：3、探究不同方法、洗涤剂、食盐用量对DNA粗提取量的影响（说说实验思路）三、DNA的鉴定：1、方法：取甲、乙两支试管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；向甲试管中加入粗提取的DNA,并搅拌使DNA溶解；向两支试管中各加入4mL（等量）二苯胺试剂，混匀，沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两支试管的颜色（蓝色）变化。2、注意点：实验中需要对照，目的：证明四、实验结果分析与评价1、实验结果评价：是否提取到DNA?观察提取的DNA颜色：如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定：出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备。2、粗提取得到的丝状物为什么略带黄色？实验提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。3、影响丝状物总量的因素有哪些？实验材料种类和数量、溶解核DNA时的NaCl溶液浓度、实验方法、搅拌方法（搅拌不当可能破坏DNA）五、案例：（快速阅读、理解步骤原理）以菜花为实验材料进行DNA的粗提取【实验材料准备】将新鲜菜花和体积分数为95%的乙醇溶液放入冰箱冷冻室24h【提取DNA的具体步骤】1、取材称取30g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。教材中建议采用洗发香波、洗涤剂等一些去污剂，使植物细胞膜破碎，释放DNA。学生可以设置对照实验，比较哪一种方法可以提取到纯度更高的DNA。一般实验室提取高纯度的DNA都采用一种阳离子去污剂一十六烷三甲基澳化俊分离缓冲液，使细胞膜破碎，同时将DNA与植物中多糖等杂质分开，再用氯仿一异丙醇混合液（体积比为24：1）抽提去除杂质蛋白，得到高纯度的DNA。3、过滤在漏斗中垫上尼龙纱布，将菜花研磨液过滤到烧杯中（有条件的学校可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000r/min的转速，离心25min,取上清液放入烧杯中）。在4c冰箱中放置几分钟后，再取上清液。4、沉淀将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的预冷乙醇溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液（玻璃棒不要直插到烧杯底部）。沉淀35min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，将絮状物缠绕在玻璃棒上。六、训练题：1 .在DNA粗提取的过程中，两次向烧杯中加入蒸储水的作用分别是A.稀释血液；冲洗样品B.使血细胞破裂；降低氯化钠的浓度C.使血细胞破裂；增大DNA的溶解度D.使血细胞破裂；冲洗样品2 .下列实验中所用试剂错误的是A.在观察植物细胞有丝分裂实验中，使用醋酸洋红溶液使染色体着色B.在提取叶绿体色素实验中，使用丙酮提取色素C.在DNA的粗提取与鉴定实验中，使用氯化钠溶液析出DNAD.在蛋白质的鉴定实验中，使用苏丹出染液鉴定蛋白质3 .NaCl的物质量为多少mol/L时，DNA的溶解度最小A.0.12B.0.13C,0.14D,0.154 .在提取的细胞核物质的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是A.溶解杂质B.溶解蛋白质C.析出DNAD.溶解DNA5 .从细胞核中提取DNA所用的提取溶液是A.NaCl溶液B.酒精C.蒸储水D.柠檬酸钠6 .提取含杂质较少的DNA所用的溶液A.NaCl溶液B.冷却90%的酒精C.加热95%的酒精D.冷却95%的酒精7 .DNA遇二苯胺(沸水浴)时，会染成A.砖红色B.红色C.紫色D,蓝色8 .可以鉴定DNA的物质是A.斐林试剂B.95%的酒精C.甲基绿溶液D.二苯胺溶液9 .破译生物基因组DNA的遗传信息或进行基因操作，首先要提取细胞核DNA。下列不适宜彳乍为DNA提取的实验材料是A.鸡血细胞B.蛙的红细胞C.人的成熟红细胞D.菜花10 .(多选)下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述.正确的是试齐操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸储水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸储水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应11 .(多选)下列关于DNA粗提取与鉴定的说法不正确的是A.洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，需要控制的变量是洗涤剂和植物细胞C.常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色D.将滤液放在6075c的恒温水浴箱中保温1015分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同12 .如图所示是关于“DNA的粗提取和物理性状观察”实验:(1)实验材料选用鸡血球液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血球液中含有较高含量的。(2)在图A所示的实验步骤中加蒸储水的目的是，通过图B所示的步骤取得滤液，再在溶液;图中燕中加入2mol/LNaCl溶液的目的是C所示实验步骤中加蒸储水的目的是DNA ,可滴加成O(3)为鉴定实验所得丝状物主要成分是果丝状物被染优选精品文档欢迎下载选用