人教版高中生物选修1专题5课题1《DNA的粗提取与鉴定》导学案

人教版高中生物选修1专题5课题1DNA的粗提取与鉴定word导学案一、基础知识（一）提取DNA的方法提取生物大分子的差不多思路是选用一定的或方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。关于DNA的粗提取而言，确实是要利用DNA与RNA,蛋白质和脂质等在和性质方面的差异，提取，去除其他成分。（1）DNA的溶解性：（1）DNA的溶解性： DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。 此外，DNA不溶于溶液，然而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，能够将DNA与氨白质进一步的分离。（2）DNA对酶、高温顺洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解，然而对DNA阻碍。大多数蛋白质不能忍耐6080的高温,而DNA在以上才会变性洗涤剂能够瓦解，但对DNA阻碍。（二）DNA的鉴定在条件下，DNA遇会被染成色，因此二苯胺能够作为鉴定DNA的试剂。二、实验设计（一）实验材料的选取凡是含有的生物材料都能够考虑，然而使用的生物组织，成功的可能性更大。（二）破裂细胞，猎取含DNA的滤液动物细胞的破裂比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的,同时用玻璃棒，过滤后收集滤液即可假如实验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜例如，提取洋葱的DXA时，在切碎的洋葱中加入一定的和,进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。（三）去除滤液中的杂质方案一利用DNA在京同浓度的NaCl溶液中的不同，通过操纵NaCl溶液的浓度去除杂质。方案二直截了当在滤液中加入嫩肉粉，反应1015min,嫩肉粉中的能够分解蛋白质。方案三将滤液放在的恒温水浴箱保温1015min,注意范畴（四）DNA的.析出与鉴定1、将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、的酒精溶液（体积分数为一）,静置min,溶液中会显现,这确实是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。2、取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为的NaCl溶液5ml,将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解然后，向两支试管中各加入4ml的试剂。混合平均后，将试管置于中加热5min,待试管后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变。实例：用鸡血细胞液粗提取DNA并鉴定（苏教版必修2）步骤操作图示1、提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液（已在课前配好）510mL,注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入20mL,同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min,然后，用放有纱布的，漏斗将血细胞过滤至1000mL的烧杯中，取其滤液。泰博水l投丹5血园一22、溶解细胞核内的DNA将物质的量浓度为40mL加入到滤液中，并作玻璃棒沿一个方向搅拌Imin,使其混合平均，这时DNA在溶液中呈溶解状态。2moLiL(NaC陶搅拌3、析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁慢慢加入,同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物显现.连续加入蒸饰水，溶液中显现的黏稠物会越来越多。当黏稠物不再增加时停止加入蒸馀水。蒸惚水c摸拌4、滤取含DNA的粘稠物用放多层纱布的漏斗，过滤溶液至1000mL的烧杯中。取纱布上的。1d.t5、将DNA的粘稠物再溶解取一个50mL烧杯，向烧杯内注入物质的量浓度为20mL。用钝头镒子将纱布上的黏稠物夹至NaCl溶液中，用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min,使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。丝状7/2nlML的上/NX蹄液飞&6、过滤含DXA的氯化钠溶液取一个100mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤以上溶液c取其滤液（DNA溶于中）。一1iM7、提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中，加入的、体积分数为250mL（加入时动作要慢），并作用玻璃棒沿一个方向搅拌，溶液中会显现含杂质较少的丝状物。当玻璃棒上显现丝状物缠绕时，连续慢慢搅拌，至不再增加时，用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。95%冷IV1t却酒精8、DNA的鉴定取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为5mL,将丝状物放入皿一支试管中，用玻嘀棒搅拌，使丝状物溶解然后,向两支试箔中各加入4mL的二苯胺试剂。混合平均后，将试管置于沸水中加热5min,等试管冷却后，观看同时比较两支试管中溶液颜色的变化。T7噪作提示1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g,防止o2、加入洗涤剂后，动作要、,否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要,以免加剧，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3、二苯胺试剂要,否则会阻碍鉴定的成效.四、课题成果评判1、是否提取出了DNA观看你提取的DM颜色，假如不是白色丝状物，讲明DNA中的较多：二苯胺鉴定显现蓝色讲明实验，假如不出现蓝色，可能所提取的DNA,或是实验操作中显现，需要重新制备。2、分析DNA中的杂质本实验提取的DNA粗制品有可能仍旧含有、等杂质。3、不同实验方法的比较关于不同的实验方法，本课题能够采纳分组的方法进行研究。第一选取不同的实验材料，其次同种材料还能够采纳不同方法，从多方面比较实验结果，如DA的、，二苯胺显色的等，看看哪种实验材料、哪种提取方法的成效更好.五、课题延伸本课题使用的洗涤剂是些组金的混合物，在严格的科学实验中专门少使用。实验室提取高纯度的DAN时，通常使用、或等化学试剂。（-）旁栏摸索题1 .什么缘故加入蒸储水能使鸡血细胞破裂？答：蒸储水关于鸡血细胞来讲是一种液体，水分能够大量进入血细胞内，使血细胞，再加上搅拌的,就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而开释出DNAo2 .加入洗涤剂和食盐的作用分不是什么？答：洗涤剂是一些离子去污剂，能，有利于DNA的；食盐的要紧成分是NaCl,有利于3 .假如研磨不充分，会对实验结果产生如何样的阻碍？答：研磨不充分会使细胞核内的DA开释不完全，提取的DNA量,阻碍实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。4 .此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有、和等杂质。5 .什么缘故反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质？答：用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去；用低盐浓度使DNA析出，能除去。因此，通过反复溶解与析出DA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。6 .方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对耐受性的不同，从而使蛋白质,与DNA分离。（二）讨论题图5-1是DNA在XaCl溶液中的溶解度曲线，请依照曲线图，摸索下面的咨询题1 .在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？答：在NaCl溶液浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最小：当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随着NaCl溶液浓度的升高，DNA的溶解度:当NaCl溶液浓度高于Q14mol/L时，随着NaCl溶液浓度的升高，DNA的溶解度。2 .如何通过操纵NaCl溶.液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？答：依照DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最小的特性，一样先用较高浓度的NaCl溶液使DNA溶解，然后再用蒸储水稀释至使DNA析出。（三）练习3 .答：提取蛋白质比提取DXA的难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏锐.得多，专门容易：同时蛋白质的空间结构,理化性质,使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能依照特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。【知识拓展】1 .制备鸡血细胞液时，什么缘故要在新奇的鸡血中加入柠檬酸钠？答：制备鸡血细胞液时，要在新奇的鸡血中加入抗凝剂一一柠檬酸钠，Q其原理是柠椽酸钠能与血浆中CaL发生反应，生成柠椽酸钙络合物，血浆中游离的Ca.大大减少,血液便可不能凝固。2 .鸡血离心或静置沉淀后，什么缘故要弃出上清液？答：因为上清液是,没有血细胞.DNA要紧存在于试管底部的中，因此提取鸡血中的DNA时，要除去血液中的上清液。3 .盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器，什么缘故？答：鸡血细胞破裂以后开释出的DNA,容易被玻璃容器吸附，由于细胞内DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用的烧杯和试管，如此能够减少提取过程的DA的缺失。4 .什么缘故析出DNA时要用冷却的酒精？答：预冷的酒精溶液具有以下优点，一是抑制核酸水解酶的活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出：三是低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少断裂。