人教版高中生物选修1专题5课题2《多聚酶链式反应扩增dna片段》导学案

人教版高中生物选修1专题5课题2多聚酶链式反应扩增dna片段word导学案一、基础知识1.PCR原理填写下列表格参与的组分在DNA复制中的作用解旋晦DNA母链合成子链的原料DNA聚合酶引物DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为,而磷酸基团的末端称为。DXA聚合酶不能开始合成DNA,而只能,因此，DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是,在DNA的复制过程中，复制的前提是o在体外可通过操纵来实现。在的温度范畴内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，那个过程称为oPCR利用了DNA的原理，通过操纵温度来操纵双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来的DNA聚合酶的发觉和应用，大大增加了PCR的效率。PCR反应需要在一定的缓冲溶液中提供：,同时通过操纵温度使DNA复制在体外反复进行。2.PCR的反应过程PCR一样要经历循环，每次循环能够分为、和三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，同时由延伸而成的DNA单链会与.结合，进行DNA的延伸，如此，DNA聚合酶只能,使这段固定长度的序列成指数扩增。3一实验操作在实验室中，做PCR通常使用，它是一种薄壁塑料管。具体操作时，用微量移液器，按PCR反应体系的配方，在:中依次加入各组分，再参照下表的设置设计好PCR仪的循环程序即可。4.操作提示为汇光外源DNA等|，、|或沟小兔，PCRg哈中使用的、以及蒸噩水等在使用前必须进行PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在一储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融解。在微量离心管中添加反应成分时，移液管上的枪头要。疑难点拨1.PCR技术简介PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的D叫拷贝。这项技术有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的咨询题，被广泛的应用于遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆和DXA序列测定等各方面。2.细胞内参与DNA复制的各种组成成分及其作用解旋酶：打开DNA双链DA母链：提供DX丸复制的模板4种脱氧核甘酸：合成子链的原料DXA聚合酶：催化合成DNA子链引物：使DNA聚合酶能够从引物的3.端开始连接脱氧核甘酸（引物是一小段DNA或RNA,它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。用于PCR的引物长度通常为2030个核昔酸）3.DNA的合成方向DNA的两条链是反向平行的，通常将DXA的羟基末端称为3-端，而磷酸基团的末端称为51端。DXA聚合酶不能从头开始合成DXA,而只能从3.端延伸DNA链，因此，DXA复制需要引物。当引物与DXA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的51端向3端延伸。4. PCR的反应过程PCR一样要经历三十多次循环，每次循环能够分为变性（当温度上升到90以上时，双链DNA解聚为单链）、复性（温度下降到50左右，,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合）和延伸（温度上升到72左右，溶液中的四种脱氧核甘酸在DNA聚合酶的作用下，依照碱基互补配对原则合成新的DNA链）三步。从第二轮循环开,始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，同时由引物【延伸而成的DNA单链会与引物II结合，进行DNA的延伸，如此，DXA聚合酶只能特异的复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列成指数扩增。5. PCR技术与DNA的复制PCR反应是通过操纵温度使DXA复制在体外反复进行。PCR反应的实质确实是DNR复制，因此有关PCR反应的题目与DNA复制的原理相同，运算方法也大体相同。例如：PCR反应中的目的片段一样以2n的方式积存，其中n为反应循环次数。一个DNA片段在30次循环后反应物中大约有10亿个如此的片段。（280）