饲料中霉菌毒素快速检测技术

饲料中霉菌毒素快速检测技术 防止饲料中霉菌毒素最好的方法就是检测饲料及其原料中霉菌毒素的含量，并且要对谷物的收获到最终产品全过程进行检测。目前，对霉菌毒素检测的方法包括侧流式免疫吸附分析（胶体金法）、酶联免疫方法（ELISA）、薄层色谱法、微柱筛选法、高压液相色谱法等。但是在世界范围内应用最广泛的是酶联免疫方法和侧流式免疫吸附分析法 。 针对于饲料及其原料,美国NEOGEN公司提供霉菌毒素检测、微生物检测和疯牛病检测等三类检测方案。其中：l霉菌毒素检测-黄曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、伏马毒素、赭曲霉毒素、组胺等检测试剂盒；l微生物检测-沙门氏菌快速检测试剂盒;l疯牛病检测-饲料及肉骨粉中牛羊源性蛋白快速检测试剂盒侧流式免疫吸附分析原理 首先,向样品检测卡小孔中加入一部分处理后样品。样品通过毛细作用流经试剂区，试剂区中含有针对于目标物质且交联了有色颗粒的抗体。如果目标物质存在，它的抗原就会结合到与颗粒交联的抗体上。 抗原-抗体-颗粒复合物离开试剂区并沿膜迁移。膜中含有一个抗目标物质的抗体的区域，用于捕捉这一复合物，并呈现出一可见的有色条带。剩余的样品继续迁移而进入废液储槽里。 试剂区还含有不管目标物质存在与否都会被样品液释放的对照免疫复合物。对照交联物经膜在对照区形成可见的有色条带。不管目标物质存在与否，都会在对照区形成对照条带，以确保检测过程正确无误。Reveal黄曲霉毒素快速检测试剂盒第一步 样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取10g到20ml 70%甲醇中,震荡3分钟; 3-静止,过滤.第二步 检测 1-取200ul样品稀释液到样品杯中； 2-取200ul样品滤液到样品杯，混匀； 3-将呕吐毒素检测条的末端浸入样品杯中； 4-反应3分钟； 5-读数Reveal呕吐毒素快速检测试剂盒第一步 样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取10g到50ml蒸溜水中,震荡3分钟; 3-静止,过滤.第二步 检测 1-取300ul样品稀释液到样品杯中； 2-取100ul样品滤液到样品杯，混匀； 3-将呕吐毒素检测条的末端浸入样品杯中； 4-反应5分钟； 5-读数酶联免疫分析原理 每个检测试剂盒都含有针对于目的物质的特异性抗体包被的微孔板。 首先，样品和标准品加入到各自的混合孔中，然后加入酶结合物。样品/标准品和酶结合物混合并转移到包被抗体的微孔中，样品/标准品和酶结合物竞争有限的抗体结合位点。样品中目的物质越多，酶结合物结合到微孔上的就越少 温育之后，洗涤微孔以除去没有结合的目的物质或酶结合物。 然后向微孔中加入当酶结合物存在时可改变颜色的底物。再次温育之后，在微孔中出现蓝色，颜色的深浅与酶结合物及目的物质的数量呈比例关系:结合的酶结合物越多，蓝色就越深，表明目的物质含量越低。 观察读取结果。蓝色越浅，表明检测到的目的物质越多。结果可通过酶标仪来准确测定。Veratox黄曲霉毒素试剂盒(美国农业部指定使用产品USDA认证号#2005-102)Veratox黄曲霉毒素试剂盒(美国农业部指定使用产品,USDA认证号#2005-102)第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 70%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液;第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育2分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育3分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数Veratox 黄曲霉毒素试剂盒检测线:5-50ppb检测结果Veratox 呕吐毒素试剂盒 (美国农业部认证,#2002-106)Veratox DON 5/5试剂盒(美国农业部认证, #2002-106)第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取10g到100ml水中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液.第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品滤液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育5分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育5分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。Veratox呕吐毒素试剂盒检测线:0.25-3ppm检测结果Veratox 玉米烯酮试剂盒(美国AOAC官方方法,#994.01)第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 70%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液; 4-用水1：4稀释（1ml滤液+4ml蒸溜水）。第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育5分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育5分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。 Veratox 玉米烯酮试剂盒(美国AOAC官方方法,#994.01)检测线:25-500ppb检测结果Veratox伏马毒素试剂盒(美国农业部认证,#2001-102)第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 70%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液; 4-取100ul到样品稀释液瓶(试剂盒提供)中,混匀。第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育10分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育10分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。Veratox 伏马毒素试剂盒检测线1-6ppm和50-600ppb检测结果Veratox T-2毒素试剂盒第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 50%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液;。第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育5分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育5分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。Veratox T-2毒素试剂盒检测线25-500ppb检测结果Veratox赭曲霉毒素试剂盒第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取5g到25ml 50%甲醇溶液中,震荡3分钟; 3-静止2-3分钟,过滤，收集滤液;。第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中加入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育10分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育10分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。Veratox 赭曲霉毒素试剂盒检测线2-25ppb检测结果Veratox组胺检测试剂盒第一步第一步 样品处理样品处理 1-取代表性的样品,粉碎,使75%的样品过20目筛; 2-取10g到90ml 蒸溜水中,强力摇动10-15秒钟; 3-静止5分钟,再强力摇动10-15秒钟; 4-再静止5分钟,强力摇动10-15秒钟; 5-静止30秒钟; 6-过滤，收集滤液; 7-取100ul滤液到10ml的样品提取稀释缓冲液(试剂盒提供)中,混匀。第二步第二步 检测检测 1-向每个红色微孔中入100ul酶结合物溶液； 2-再分别加入100ul标准品和样品处理液，混匀； 3-从红色微孔中取100ul到抗体孔中，室温下温育10分钟； 4-洗涤3-5次； 5-每孔加入100ul底物，室温下温育10分钟； 6-每孔加入100ul终止液，混匀； 7-在酶标仪上读数。Veratox 组胺检测试剂盒检测线2.5-50ppm检测结果NEOGEN公司ELISA试剂盒特点1-操作简单,速度快-所有的霉菌毒素检测只需移液器和酶标仪就可以获得准确结果,并且所有试剂盒操作步骤几乎一样;大部分试剂盒的前期样品处理时间不超过3分钟,检测时间不超过20分钟,同传统方法相比有明显的优势;2-使用广泛-世界各地普遍使用,适合于目前中国大多数饲料企业实验室检测;3-质量可靠-试剂盒灵敏度和重复性非常高,其它公司产品无法达到;黄曲霉毒素试剂盒是美国农业部指定使用产品,呕吐毒素试剂盒是世界同类产品金标准,玉米烯酮试剂盒为AOAC官方方法;Reveal沙门氏菌快速检测试剂盒 (美国AOAC认证,#960801) 初步培养初步培养 用用200ml 42 1 C 无菌水溶解一瓶无菌水溶解一瓶Revive培养基，培养基， 加入加入25g样品，在样品，在36 1 C下培养下培养4小时。小时。 二步培养二步培养 用用200ml 36+1 C 无菌水溶解一瓶无菌水溶解一瓶RV培养基培养基， 在在Revive中样品培养中样品培养4小时后，加入小时后，加入 200 mL RV 培养基到培养基到Revive中，在中，在42 1 C下培养下培养16-24 小时小时使用检测卡 加入加入5滴（滴（120ul）培养过的样品到检测卡的样培养过的样品到检测卡的样 品区中，在品区中，在15分钟内读取和记录结果。分钟内读取和记录结果。将一瓶将一瓶Revive培养基倒入无菌袋中培养基倒入无菌袋中Reveal检测沙门氏菌的过程用用200ml 42 1 C 无菌水溶解无菌水溶解Reveal 检测沙门氏菌的过程Reveal检测沙门氏菌的过程加入加入25g样品，在样品，在36 1 C下培养下培养4小时小时将RV培养基倒入无菌袋Reveal检测沙门氏菌的过程Reveal检测沙门氏菌的过程用用200ml 36+1 C 无菌水溶解一瓶无菌水溶解一瓶RV培养基培养基 在在Revive中样品培养中样品培养4小时后，加入小时后，加入 200 mL RV 培养基到培养基到Revive中，在中，在42 1 C下培养下培养16-24 小时小时Reveal 检测沙门氏菌的过程加入加入5滴（滴（120ul）培养过的样品到检测卡的加样孔中培养过的样品到检测卡的加样孔中Reveal检测沙门氏菌的过程Reveal检测沙门氏菌的过程15分钟内读结果饲料中反刍动物副产品检测试剂盒(美国AOAC 认证,#010405) 称10克样品至广口瓶中 取100ml提取溶液 (试剂盒提供) 沸水加热10分钟 取0.5ml液体至小试管 放入检测试纸 15分钟内读取结果 饲料中反刍动物副产品快速检测试剂盒检测结果检测结果谢谢谢谢!