医疗机构临床基因扩增检验工作导则

附件医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则一、临床基因扩增检验实验室的设计（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。 原则上 临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准 备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。这 4 个区域 在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间 上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空 气的直接相通。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。例 如使用实时荧光 PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并； 采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析 仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。各区 的功能是：1. 试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和 扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存 和准备。2. 标本制备区：核酸（RNA DNA提取、贮存及其加入 至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全 二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。3. 扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。4. 扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂 交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。(二) 临床基因扩增检验实验室的空气流向。 临床基因 扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区T标 本制备区T扩增区T扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺 空气气流进入扩增前的区域。可按照从试剂储存和准备区T 标本制备区T扩增区T扩增产物分析区方向空气压力递减 的方式进行。可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行 的方式实现。(三) 工作区域仪器设备配置标准。1. 试剂储存和准备区。(1) 28C和-20 C以下冰箱。( 2)混匀器。(3) 微量加样器(覆盖卩I )。( 4)可移动紫外灯(近工作台面)。(5)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头。( 6)专用工作服和工作鞋 (套)。( 7)专用办公用品。2. 标本制备区。(1) 2-8 C冰箱、-20 C或-80 C冰箱。( 2 )高速离心机。(3)混匀器。( 4)水浴箱或加热模块。(5)微量加样器(覆盖卩I )。( 6)可移动紫外灯(近工作台面)。( 7)生物安全柜。( 8)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头(带滤芯)。( 9)专用工作服和工作鞋 (套)。( 10)专用办公用品。(11)如需处理大分子 DNA应当具有超声波水浴仪。3. 扩增区。( 1 )核酸扩增仪。(2)微量加样器(覆盖卩I ),(视情况定)。( 3)可移动紫外灯(近工作台面)。( 4)消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加 样器吸头(带滤芯)。( 5)专用工作服和工作鞋。( 6)专用办公用品。4. 扩增产物分析区。 视检验方法不同而定，基本配置如下：(1)微量加样器(覆盖卩I )。( 2)可移动紫外灯(近工作台面)（ 3）消耗品：一次性手套、加样器吸头（带滤芯）。（4）专用工作服和工作鞋。（5）专用办公用品。 上述各区域仪器设备配备为基本配备，实验室应当根据 自己使用的扩增检测技术或试剂的特点，对仪器设备进行必 要的增减。二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则（ 一 ） 进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区T标本制备区T扩增区T扩增产物分析区。（ 二） 各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的 设备、物品不得混用。（ 三） 不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜 色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。（四）实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区T标本制 备区T扩增区T扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区 域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。（ 五） 工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。工作区 的实验台表面应当可耐受诸如次氯酸钠的化学物质的消毒 清洁作用。实验台表面的紫外照射应当方便有效。由于紫外 照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可 移动紫外灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上 6090cm内照射。由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp）,对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时 间，最好是照射过夜。（ 六 ） 实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有 操作符合实验室生物安全通用要求（ GB19489-2008）。三、临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项（ 一 ） 试剂储存和准备区。贮存试剂和用于标本制备的消 耗品等材料应当直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过扩 增检测区，试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在该 区，应当保存在标本处理区。（ 二 ） 标本制备区。由于在样本混合、核酸纯化过程中可 能会发生气溶胶所致的污染，可通过在本区内设立正压条 件，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的 交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应 管。对具有潜在传染危险性的材料，必须在生物安全柜内开 盖，并有明确的样本处理和灭活程序。（ 三 ） 扩增区。为避免气溶胶所致的污染，应当尽量减少 在本区内的走动。必须注意的是，所有经过检测的反应管不 得在此区域打开。（ 四） 扩增产物分析区。核酸扩增后产物的分析方法多种 多样，如膜上或微孔板或芯片上探针杂交方法（放射性核素 标记或非放射性核素标记） 、直接或酶切后琼脂糖凝胶电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、 Southern 转移、核酸测序方法、质谱 分析等。本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意 避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。在使用 PCR-ELISA 方法检测扩增产物时，必须使用洗板机洗板，废 液必须收集至 1 mol/L HCl 中，并且不能在实验室内倾倒， 而应当至远离PCR实验室的地方弃掉。用过的吸头也必须放 至 1 mol/L HCl 中浸泡后再放到垃圾袋中按程序处理，如焚 烧。由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质 如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故应当注意 实验人员的安全防护。