抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的研究本科生毕业论文

本科生毕业论文（设计） 题 目：抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响 学 系： 药学系 专 业： 药 学 表一 本科毕业论文（设计）开题报告论文（设计）题目：抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响背景与意义炎症性肠病（IBD，Inflammatory bowel disease）是一组原因未明的慢性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC，ulcerative colitis）和克罗恩病(CD，Crohns disease)。大约10%的结肠炎症尚不能区分是CD或UC，在西方国家称为不明确的结肠炎。有专业医学调查机构经过随访跟踪研究，发现这些不明确结肠炎患者大多数发展称为UC，其临床症状多样化，但以腹痛、腹泻为主要肠道症状，病变可累及胃肠道任一部位，但结肠被侵犯最多。随着我国人民生活水平的不断提高，人民的生活习惯出现了质的变化，快速的生活节奏成为现今社会的主旋律，然而我国炎症性肠病病人近年来的发病率亦不断上升，但正因此溃疡性结肠炎是一种原因未明的结直肠炎性病变，随着病程延长，倘若得不到针对性的治疗，病程会不断的加重，且癌变风险也随之增加。但目前由于溃疡性结肠炎临床病例积累需较长的时间，存在一定难度，建立溃疡性结肠炎的动物模型起到了重要作用。目前关于溃疡性结肠炎动物模型较多，近年来，有研究者发现，使用TNBS诱发溃殇性结肠炎动物模型，造模成功率高，而且造模成功的动物模型出现自愈的现象低，动物模型的病症症状与人类症状相似。通常情况下，TNBS用量为100150 mg/kg体重，浓 度在50%以上的乙醇为45ml/kg体重。采用本方法复制 的模型，动物结肠炎症和溃殇至少维持78周。其中，13周为急性期改变，以中性粒细胞浸润为主;48周为慢性炎症改变，浸润细胞主要为淋巴细胞和浆细胞。病理改变主要表现为结肠组织溃殇形成，肠壁增厚，教膜及黠膜下层大量炎症细胞浸润，肉芽组织及隐窝版肿形成。在检测项目中，本模型采用的中性粒细胞髓过氧化物酶MPO是近年来临床广泛采用的一种诊断指标。在急性炎症期，肠壁主要为中性粒细胞浸润，故MPO活性增加;炎症向慢性转化后，则以淋巴细胞浸润为主，MPO活性即明显下降活性与结肠急性炎症的严重程度呈正相关，是评价急性期严重程度及鉴别急、慢性炎症的重要指标之一。在第一阶段的动物造模成功后，论文实验的第二阶段就是药物治疗阶段。本论文实验选择治疗溃疡性结肠炎模型动物的药物是受试物A，对肠壁的炎症有显著的抑制作用，但是，因为专利版权等因素，抗炎受试物A的相关信息不可公布。研究目的本论文研究中，我们通过注射100mg/kg体重的TNBS乙醇溶液建立溃疡性结肠炎的动物模型，然后对造模成功的动物进行抗炎受试物的治疗，得到相关的数据结论，并初步探究溃疡性结肠炎相关病症症状及发病机制，与抗炎受试物对溃疡性结肠炎治疗机制情况，以此为探究人类溃疡性结肠炎发病机制与治疗机制提供一定的线索。方案与材料本论文选择50只，180200g SD雄性大鼠，使用TNBS乙醇溶液灌肠复制溃疡性结肠炎模型。将造模成功的大鼠随机分为模型对照组，受试物低、高剂量组，阳性对照组，10只/组，灌胃给药，1次/d，连续10 d。取结肠组织进行MPO和病理检测。实验全过程与SPF级动物房中进行，所有实验环境与实验工具经过严格消毒使用，相关动物实验操作经过相关资质人员培训并通过测试，并且符合国家相关标准，这些实验条件由广东省医学实验动物心提供。实验过程中，每天记录大鼠体重、皮毛、精神状态、排便情况及相关日常观察。实验结束前一天动物禁食12h，不禁水。处死大鼠，截取自肛门向上10 cm的结肠，沿肠系膜纵轴剪开，用冰生理盐水反复冲洗干净，取一小部分肉眼观察病变明显的部位以福尔马林固定，进行组织病理学检查，另取一小部分肉眼病变明显的部位-80冻存，每组随机抽取6只动物的标本，检测各结肠组织MPO的变化。时间内容备注2011072020110819资料积累、实验方案编写方案编写阶段20110820接收动物、编号、称重造模阶段2011082020110822检疫观察20110823称重，禁食20110824随机分组，造模2011082820110907每天给药、称重、观察治疗阶段20110908实验结束2011090920110914酶活性测定，病理测定检测阶段2011091520110920整理资料与数据，写报告结论分析阶段预期研究成果1. 深入认识到溃疡性结肠炎的致病机制，与该病症的动物相关造模方法及TNBS造模作用机制。2. 得到造模间与治疗期间动物相关体征数据，初步探索得溃疡性结肠炎对动物体征的具体影响，与治疗药物对病情的治疗情况。3. 检测出病变炎症部位的病理情况，初步认识到各程度溃疡结肠炎对结肠的损伤程度的相关情况。4. 初步认识MPO酶活性检测的原理，与各程度溃疡性结肠炎在MPO酶活性中的体现。参考文献1. 郑威扬，溃疡性结肠炎相关性结肠癌发病机制初探，北京协和医学院，200906012. 周红光等,溃克灵对溃疡性结肠炎模型大鼠外周血和肠系膜淋巴结CD4+CD_(25)+T细胞亚群的影响J.时珍国医国药，2010(21)7.3. 周光兴等，人类疾病动物模型复制方法学. 上海科学技术文献出版社4. 叶春玲,钟玲主编药理学实验指导2003年8月 暨南大学印刷厂5. 徐淑云，药理实验方法学，第三版 人民卫生出版社6. .执行实验室资质认定评审准则（2007年7月1日）7. MIC基因与溃疡性结肠炎相关性的研究进展.学生签名： 年 月 日指导教师意见 该生对于所开课题与指导老师进行了充分的讨论，并参考较为详尽的文献，最后确定的课题论文具有一定的使用价值。本论文课题是学生所学专业知识的延续，符合学生专业发展方向，对于提高学生的基本知识与技能，对于提高学生的实验研究能力有很大的帮助。论文构思较为严密，论题较为新颖，具有一定的社会现实意义，研究方法与研究计划基本合理，难度合适，学生能够在预定时间内完成该课题的设计。 1、同意开题（ ） 2、修改后开题（ ） 3、重新开题（ ） 指导教师签名： 年 月 日表二 毕业论文（设计）过程检查情况记录表指导教师分阶段检查论文的进展情况（要求过程检查记录不少于3次）：第1次检查学生总结：方案的设定指引着整个实验的走向，每一步的实验设定都必须查阅大量相关文献作为依据，确定其可行性，确保实验顺利进行。论文课题实验已经正式开始，本阶段查阅了大量相关溃疡性结肠炎动物实验的文献资料，初步确定了实验方案，实验动物的造模方式经过对比，选用TNBS乙醇溶液灌肠复制溃疡性结肠炎模型，实验预定设计5个组别，分别为正常组，模型组，受试物低、高剂量组与美沙拉秦组，而且设定治疗时间为10日指导教师意见：该生已积极开展了论文实验，查阅了大量相关资料文献，实验方案亦有初步的定稿，实验的设计基本上符合药效性动物实验的标准，但是方案中有小部分的的设计仍有待改进，对于相关部分实验操作仍需更深入了解认识，对于实验方案中的各个部分仍需要进一步的理解。第2次检查学生总结：实验进入了造模与治疗阶段，这两个阶段是本论文实验的主体，成个流程都按照最终定下的方案进行着。在实际的操作上，因为实验动物的个体差异因素，成功造模的动物日常体征都各自有所差别。刚刚进入治疗阶段时，因为实验动物的病情较为严重，所以各项动物实验操作比预期难度增大，但仍在计划内进行。初步得到了动物日常观察数据。指导教师意见：该论文实验进入了的实际操作阶段，各种实验中的情况都出现了，这时应该仔细思考问题是出现在哪里的，再查阅各种相关资料，找出应对措施，然后作出相关的改良的操作方法。第3次检查学生总结：论文实验进入了检测与分析的阶段，整个实验的原始数据基本都得出来了，初步分析数据，跟方案预期的结果大致相同，治疗效果趋向一致。数据除了要初步分析，还需要更深入的解析分析，更细致展示论文的结果，同时也需要在结论基础上发散性的延伸相关知识，这还需要查阅更多的相关文献资料。指导教师意见：实验数据的分析与知识延伸是论文实验至关重要的一个环节，必须查阅更多的文献资料才可以撰写，做到有根有据，而且这一环节的处理情况好坏，决定着该论的层次，分析得细致准确能让该论文升华到更高的层次。应该下更多的功夫在总这一阶段，而且要不厌其烦的入分深析。第4次检查学生总结：查阅了大量资料文献后，对数据结果做出最直观的描述后，在此基础上对论文是的各个部分坐出的分析与知识的延伸，实验论文初步完成。但是仍有小部分内容需要加深解析与延伸。指导教师意见：该生积极完成论文任务，得出的论文情况去预期情况基本一致，初步完成的论文结构完整，内容也丰富，大部分结果分析到位，有小部分内容可以更加深入分析。但总体来说，论文情况达到动物实验的标准要求学生签名： 年 月 日指导教师签名： 年 月 日总体完成情况指导教师意见： 本论文属于动物药效学领域研究的课题。选题符合学生学科专业研究方向，体现了综合学科知识的集成训练目的，课题具有重要的理论意义和实用价值。学生针对课题的要求查阅与分析了大量相关文献，一学科理论为指导，运用动物学实验的方法，认真细致地分析与研究了溃疡性结肠炎的致病原理与动物造模方法，及提出了美沙拉秦药物治疗方案，完成了实验数据的描述与分析，且对造模方法，药物治疗，检测方法有进一步的延伸讨论。本课题论文撰写认真规范，基本符合科技论文的写作标准，文笔流畅，图文表配合得当，逻辑性强，工作量适中。论文成果和内容反映了作者该学生有比较扎实的基础理论和专业知识。1、按计划完成，完成情况优（ ）2、按计划完成，完成情况良（ ）3、基本按计划完成，完成情况合格（ ）4、完成情况不合格（ ）指导教师签名： 年 月 日表三 本科毕业论文（设计）成绩评定表（试行）学生姓名甘健林学号08071012专业药学成绩优 秀 良 好 中 等 及 格 不 及 格 比例成绩分级（10090分）（8980分） （7970分）（6960分）（60分）选 题 有相当强的理论与实践意义。选题有比较强的理论与现实意义。选题有一定的理论或实践意义。选题意义不大但无不妥之处。选题不当，没有意义。20%创 新 与 论 证1.用新方法进行调查研究，采用的资料较新，研究结果有独创性。2.论证思路清楚，逻辑性强；专业知识比较扎实；遵守学术规范，研究所得结论可靠。1.研究方法及视角有一定新意。2.论证思路较清楚，有一定的逻辑性；结论比较可靠。1.研究方法及视角均无创新，但尚能从他人的观点中发现问题。2.论证基本清楚，结论有一定可靠性。1.研究方法及视角均无创新之处，所得出的结论无明显价值。2.论证不够严密，超过20%的篇幅表述不清楚。1.研究方法及视角水平均一般，所得出的结论无价值。2.论证不严密，超过40%的篇幅表述不清楚。50%写 作 水 平条理清晰，文字流畅；有丰富的文献材料、充足的理论依据和数据。条理较为清楚，文字流畅；有文献材料、充足的理论依据和数据。文字流畅；有一些文献材料、理论依据和数据。文字尚算流畅；文献材料、理论依据和数据较少。基本概念不清、错别字多；文献材料、理论依据和数据少。20%格 式 规 范格式正确，完全符合学术规范及学院的要求，打印规范清晰。格式正确，符合学院论文格式的要求，打印清晰。格式正确，基本符合格式要求，打印规范清楚，但个别地方有错漏。格式大部分符合论文格式的要求，并有少量错漏。格式不符合论文格式要求，打印不清晰，错漏较多。10%指导教师签名成绩（按百分制评分）：表四 本科毕业论文（设计）答辩情况表答辩人甘健林专 业药学论文（设计）题目抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响答辩小组组长成 员答辩记录：记录人签名： 年 月 日表5本科毕业论文（设计）答辩成绩评定表（试行）学生姓名甘健林学号08071012专业药学论文题目抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响评分项内 容比例成绩论文选题有相当强的理论与实践意义。15%学术内容中心突出，逻辑严密，表述准确，有创新性且在实践中的指导作用较强。40%写作水平条理清晰，论证有力，文字流畅；有丰富的文献材料、充足的理论依据和数据。15%格式规范格式正确，完全符合学术规范及学院要求，打印规范清晰。10%答辩情况答题正确，重点突出，论述全面，紧扣主题，表达流畅，具有很强的说服力。20%答辩小组成员签名答辩成绩（按百分制成绩评分）学术诚信声明本人所呈交的毕业论文，是在导师的指导下，独立研究分析得出的，所有研究数据均由孙逸仙医院提供。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本论文的研究作出作出指导的个人和集体，均已在文中以明确的方式标明。本毕业论文的知识产权归属于培养单位。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。本人签名： 日期： 抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的影响论文摘要 背景：炎症性肠病（IBD，Inflammatory bowel disease）是病因尚未明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC，ulcerative colitis）和克罗恩病(CD，Crohns disease)。该病在西方国家比较多见，但近年在我国的发病率亦有上升趋势。因其病因不明，一直是消化科较为棘手的疾病。目的：本论文实验主要针对溃疡性结肠炎（UC），研究抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的治疗作用及其可能的作用机制。方法：实验造模由50只SD雄性大鼠，先分为正常组10只，模型组40只，模型组大鼠用塑胶管由肛门轻缓插入大鼠体内深约8 cm，按照100 mg/kg的剂量缓慢注入含三硝基苯磺酸TNBS(trinitro-benzene-sulfonic acid) 25g/L的乙醇溶液，建立大鼠溃疡性结肠炎模型。造模成功的大鼠按体重随机分为4组，每组10只，分别为正常组，模型对照组，受试物低剂量组，受试物高剂量组，美沙拉嗪控释颗粒组，每天1次分别灌胃给药，连续10 d。每天进行大鼠日常和体重观察，实验结束后取病变结肠组织病理检查，测定其MPO酶活性。结论：最后得出，抗炎受试物能降低MPO含量，显著性降低溃疡性结肠炎的病理评分（P0.05）关键词 炎症性肠病；抗炎受试物A；溃疡性结肠炎；三硝基苯磺酸；MPO酶活性 The influence of Mesalazine in ulcerative colitis ratsAbstract Inflammatory bowel disease is an nonspecific Chronic Inflammation of the bowel, and it is not yet clear about Causes of illnes. This illness Including ulcerative colitis and Crohns disease, and it is more common in western countries, however, the trend of Incidence infection is increasing in these years in our country. And The illness has been a hot potato in Digestion section for a long time. This Paper experiment mainly at ulcerative colitis, Research by test compound to investigate the effect of ulcerative colitis(rats. Molding methods 50 SD rats, the plastic tube insert rats body 8cm from fundament, with 100 mg/kg instill TNBS of 25g/L Surelease, then this is the model of ulcerative colitis rats. According to Body Weight , Made by successful SD rats were randomly divided into 5 groups: normal control group, model control group ，test compound high control group, test compound lower control group and Mesalazine positive control group, 10 rats a group, respectively through stomach for one times a day for 10 d . observe carefully the situation and Weight, for the organization of the colon to pathological examination after the paper experiment over. The results showed Subject matter can reduce the content of MPO, and reduce Pathological mark of UC markedly.Keywords Inflammatory bowel disease；Subject matter； ulcerative colitis； TNBS(trinitro-benzene-sulfonic acid) ；MPO enzymic activity 目 录引言11.实验动物21.1 动物要求21.2饲养管理21.3选用理由22.实验药品32.1抗炎受试物32.2阳性对照物32.3实验用溶媒：蒸馏水33.主要实验仪器与试剂43.1实验仪器43.2实验试剂44实验方法54.1抗炎受试物配制方法54.2阳性对照物配制方法54.3造模方法54.4检测指标55.结果统计分析76.实验结果86.1一般临床观察86.2体重86.3组织病理学检查96.4结肠组织MPO酶活性97.讨论与分析137.1造模13参考文献致谢引 言溃疡性结肠炎又名非特异性溃疡性结肠炎，系原因不明的慢性结肠和直肠黏膜炎性和溃疡性病变。其原因可能与免疫、感染、遗传和精神因素有关。溃疡性结肠炎，很多人都误把它认为是一般的肠炎。以前，此病在国内的发病率并不是很高，但近些年来，随着人们生活水平的提高，这个病也越来越多见。溃疡性结肠炎是很难根治的，严重的会导致肠穿孔、结肠癌等。现代医学认为，溃疡性结肠炎可能与肠道细菌或病毒感染、精神刺激、食物及自身免疫反应等因素相关，并与结肠癌关系密切，尤其病变范围广泛。目前由于溃疡性结肠炎临床病例积累需较长的时间，存在一定难度，建立溃疡性结肠炎的动物模型起到了重要作用。目前关于溃疡性结肠炎动物模型较多，近年来，有研究者发现，使用TNBS诱发溃殇性结肠炎动物模型，造模成功率高，而且造模成功的动物模型出现自愈的现象低，动物模型的病症症状与人类症状相似。本实验研究抗炎受试物A对溃疡性结肠炎大鼠模型的治疗作用及其可能的作用机制。实验以SD雄性大鼠，使用TNBS 灌肠复制溃疡性结肠炎模型。随机分为模型对照组，受试药低、高剂量组，阳性对照物组，10只/组，灌胃给药，1次/d，连续10 d。取结肠组织进行MPO和病理检测。本模型采用的中性粒细胞髓过氧化物酶MPO是近年来临床广泛采用的一种诊断指标。MPO主要 位于多形核白细胞嗜苯胶蓝颗粒中，其在结肠中的活性与组织中性粒细胞浸润程度呈线性关系。在急性炎症期，肠壁主要为中性粒细胞浸润，故MPO活性增加;炎症向慢性转化后，则以淋巴细胞浸润为主，MPO活性即明显下降活性与结肠急性炎症的严重程度呈正相关，是评价急性期严重程度及鉴别急、慢性炎症的重要指标之一。1 实验动物1.1 动物要求SD大鼠，雄性，50只，180200g ，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供。 并采用饱和苦味酸被毛染色法，在动物体表不同部位的被毛涂染颜色，以示不同号码。饲养箱上贴上相应的标签。对购入SD大鼠进行检疫5d。期间每日检查动物一次，未发现不健康的动物所有大鼠可进行实验。1.2饲养管理SD大鼠饲养在广东省医学实验动物中心SPF级动物房，实验动物使用许可证号：SYXK（粤）2008-0002，2010年年检合格。动物饲养条件：5只/箱，群养，饲养温度与湿度：2025，4070%，采用12h：12h昼夜间断照明；自由进食、饮水。饲养室条件始终保持稳定，以保证实验结果的可靠性。1.3选用理由根据“徐淑云，药理实验方法学，第三版”推荐使用。2 实验药品2.1抗炎受试物A因客户要求资料保密，所以详细信息不公开2.2阳性对照物名称：美沙拉嗪控释颗粒；生产单位：法国爱的发制药集团；规格：500mg/袋保存条件：密闭、干燥。2.3实验用溶媒：蒸馏水。3 主要实验仪器与试剂3.1实验仪器电子天平：BS3000A，上海友声衡器有限公司，精度：0.1g电子天平：BS223S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司，精度：0.001g紫外可见光分光光度计：UV1200，广州市正一科技有限公司电热恒温水浴箱：HWS-28，上海一恒科学仪器有限公司低速冷冻离心机：KDC-2046，科大创新股份有限公司中佳分公司轮转切片机：RM2135，德国LEICA公司生物组织全自动脱水机：TS-12N，湖北孝感医用仪器有限公司生物组织包埋机及冷冻机：BM-VII，湖北孝感医用仪器有限公司摊片烤片机：CS-VI，湖北孝感医用仪器有限公司生物组织全自动染色机：RS-18，湖北孝感医用仪器有限公司病理图像分析系统：，日本奥林巴斯3.2实验试剂三硝基苯磺酸：sigma，批号：021M5009冰醋酸：广州市中南化学试剂有限公司，批号：090103无水乙醇：广州市中南化学试剂有限公司，批号：101004MPO测定试剂盒：南京建成生物工程研究所，批号：20110721其他试剂：石蜡、二甲苯、酒精、伊红、苏木素、中性树胶4实验方法4.1抗炎受试物A配制方法受试物A高剂量溶液：称取受试物225 mg，碾碎，加蒸馏水至45mL，得5mg/mL受试物A高剂量药液45mL；低剂量溶液：取5mg/mL受试物高剂量药液9mL，加蒸馏水稀释至36mL，得1.25mg/mL受试物低剂量药液36mL。4.2阳性对照物配制方法准确称取美沙拉嗪控释颗粒1g，碾碎，加蒸馏水至33mL，得0.03g/mL美沙拉嗪药液33mL。4.3造模方法动物分组：将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、受试物低、高剂量组，阳性对照组，10只/组。造模用药配制方法：三硝基苯磺酸溶液25g/L：取50g/L的三硝基苯磺酸溶液 (TNBS)与无水乙醇以体积11配成25g/L的混合液。SPF级SD大鼠，雄性，50只。检疫合格后，随机分为正常对照组10只，模型组40只。模型组大鼠乙醚麻醉，将一直径2.0 mm、长约12 cm的塑胶管由肛门轻缓插入大鼠体内深约8 cm，按照100mg/kg体重的剂量缓慢注入含TNBS的乙醇溶液。然后注入约0.1mL的空气，将留在塑胶管内的药物排入肠内。给药完毕，缓慢拔出塑胶管，用手捏住肛门，提起大鼠尾部，持续倒置1min，使造模剂充分渗入大鼠肠腔内。正常对照组注入等量的生理盐水。造模3天后，将模型组大鼠随机分为模型对照组、受试物A低、高剂量组，美沙拉嗪控释颗粒组，10只/组。灌胃给药，1次/d，连续10d，模型对照组及正常对照组给予等量蒸馏水。4.4检测指标4.4.1日常观察从实验开始至实验结束，每日观察并记录各组大鼠精神状态、进食、活动、腹泻情况及粪便性状。每天测量各大鼠的体重。4.4.2病理检查实验结束前一天动物禁食12h，不禁水。处死大鼠，截取自肛门向上10 cm的结肠，沿肠系膜纵轴剪开，用冰生理盐水反复冲洗干净，取一小部分肉眼观察病变明显的部位以福尔马林固定，进行组织病理学检查。制片：病理组织标本经取材、固定、修块、流水冲洗、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋后，石蜡切片，HE染色、封片；镜下检查：把制作好的HE染色切片置于光学显微镜下，在低倍视野下，用OLYMPUS BX41显微镜拍照，观察溃疡性结肠炎病变程度并评分。组织学损伤评分：按溃疡有无及范围轻、中、重分别计为0、1、2、3分，病变深度(达粘膜层1分，粘膜下层2分，肌层3分、浆膜4分)，两项相加得总分。4.4.3结肠组织MPO测定MPO测试根据样本种类可以分为两种操作方法，分别为组织样本测定与血清样本测定，本论文实验测定的是动物结肠部分的组织，选用组织样本的测定方法。原理：中性白细胞中存在有髓过氧化物酶，每个细胞所含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5%，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并定量中性白细胞的数目。MPO+H2O2复合物； 复合物+AH2（供氢体）H2O+MPO+A产物通过供氢体邻连茴香胺供轻后生成黄色化合物，在460mm处通过比色测定A产物的生成量，从而推算出MPO的活力及H2O2减少量和白细胞的数目。取一小部分肉眼病变明显的部位-80冻存，每组随机抽取6只动物的标本，检测各结肠组织MPO的变化。1) 样本前处理：准确称取组织重量，以配好的试剂二溶液为匀浆介质，按重量体积比为1:19加匀浆介质制备成5%的组织匀浆，不需要进行离心。取5%组织匀浆0.9ml加3号试剂0.1ml，（如果组织匀浆量不够，可以按9:1的比例减少组织匀浆及3号试剂的用量），充分混匀后37，水浴15分钟，取出后待测。2) 操作表：试剂空白对照管测定管蒸馏水ml0.23样本ml0.20.2试剂四ml0.20.20.2显色剂ml33混匀，37水浴30分钟试剂七ml0.050.050.05混匀，60水浴十分钟，取出后立即在460nm出，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值注： 试剂四试剂七与显色剂为测试盒内厂家提供的试剂3) 计算酶活力单位定义：每克组织湿片在37的反应体系中H2O2被分解1mol为1个酶活力单位。公式：MOP单位/克湿片=*注：11.3为斜率的倒数*注：取样中所含组织湿片的量（克）5 结果统计分析各组大鼠的体重、MPO表达值的数据均采用（）表示，不同组间的比较采用SPSS16.0 One-Way ANOVA单因素方差分析。6 实验结果6.1一般临床观察：正常对照组：整个实验过程10只动物未见异常。模型对照组：10只动物精神萎靡不振，步态为匍匐行走，偶见扭体，稀便，体重逐日减轻；第4天死亡一只动物。第5天开始观察到有两只动物腹部胀大，实验结束后大体解剖可见，这两只动物病变部位及病变以上部位肠腔胀大，内有大量肠内容物堆积，而病变以下部位直肠狭窄，肠内容物无法正常排出，沿纵轴剖开冲洗掉肠内容物后可见病变部位肠壁增厚，肠腔扩大，黏膜溃疡病损明显。受试低剂量组：整个实验过程的临床症状与模型对照组相似。受试物高剂量组、美沙拉嗪控释颗粒组：前6天的动物临床症状情况与模型对照组相似，第6天开始动物精神恢复，部分动物稀便开始减轻，至第8天动物状态已基本恢复，观察不到稀便，直至实验结束动物未见明显异常。6.2体重（见表1）：模型对照组动物体重增长缓慢，与正常对照组比较具有显著性差异（P0.05）。表1 抗炎受试物对溃疡性结肠炎大鼠体重的影响（g，）时间正常对照组模型对照组美沙拉嗪控释颗粒对照组受试物A低剂组受试物A高剂组剂量(mg.kg-1d-1)30012.550n1010101010给药后1天193.78.0163.415.9*164.616.0158.69.3158.716.6给药后2天207.17.4169.218.0*179.117.6169.89.3169.719.8给药后3天218.110.2180.522.6*195.518.5179.413.9184.620.9给药后4天227.09.8189.722.1*205.719.3191.420.1193.924.9给药后5天234.09.8197.524.4*217.621.2199.724.0203.329.6给药后6天246.510.5205.226.5*228.724.5208.728.1212.232.3给药后7天249.112.2216.426.8*237.822.3218.632.0221.435.9给药后8天255.810.6222.427.5243.419.2222.634.7226.937.9给药后9天268.610.6235.430.0*258.017.8235.737.4237.040.1给药后10天279.610.8246.429.1*268.218.5247.340.0248.939.4注： *与正常对照组比较差异显著，P0.05。6.3组织病理学检查：（见表2）表2 各组SD大鼠溃疡性结肠炎病变评分组别n溃疡性结肠炎病变评分正常对照组100.00.0模型对照组106.21.0*阳性对照组102.62.2#受试物A低剂量组103.63.0#受试物A高剂量组103.02.9#注： *与正常对照组比较差异显著，P0.05；#与模型对照组比较差异显著，P0.05模型对照组大鼠的溃疡性结肠炎病变评分与正常对照组比较显著升（P0.05），提示溃疡性结肠炎大鼠造模成功。各治疗组SD大鼠溃疡性结肠炎病变评分与模型对照组比较显著降低（P0.05），但显示升高的趋势；阳性对照组大鼠MPO值与模型对照组相比较显著性降低（P0.05）。表3抗炎受试物对溃疡性结肠炎大鼠结肠酶活性的影响（）组别剂量(mg.kg-1d-1)nMPO(单位.克湿片-1)正常对照组60.340.03模型对照组60.360.03阳性对照组30060.310.02#受试物A低剂量组12.560.360.05受试物A高剂量组5060.360.04注： #与模型对照组比较差异显著，P0.05。7 讨论与分析本次实验中，与正常对照组比较，模型对照组大鼠体重显著性下降（P0.05）。模型对照组大鼠结肠组织溃疡性结肠炎病理评分显著升高（P0.05），显著性降低溃疡性结肠炎的病理评分（P0.05），而抗炎受试物A效果更加明显，抗炎受试物A组动物体重到实验后期有明显正常回升，结肠内脏相对受试物组别，溃疡程度明显减轻，而M酶活性程度下降趋势更加明显。可得出，受试物A组与美沙拉嗪颗粒组都有治愈大鼠溃疡性结肠炎病症的的效果，抗炎受试物A高剂量的治疗效果比低剂量组的更佳。7.1造模溃疡性结肠炎是一种发生于结肠粘膜的炎症及溃疡性疾病。临床最典型的特征是血性腹泻，病理学变化主要表现为粘膜上皮细胞下的网织纤维变性，毛细血管阻塞以及固有层浆细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、肥大细胞和中性粒细胞进行性浸润，最后导致隐窝脓肿、上皮坏死和粘膜溃疡。造模成功与否的观测和评价指标包括:结肠称重，结膜损伤肉眼观测评分，组织形态学检查、中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)活性测定。黏膜损伤较为严重，充血水肿明显，有多个溃殇产 生，肠腔变狭，镜下溃殇较深，深达肌层。因此，本实验溃疡性结肠炎大鼠模型造模成功。比较医学显示三硝基苯磺酸TNBS诱发溃殇性结肠炎动物模型的确切机制尚未阐明，可能为当将溶于乙醇的TNBS溶液注人结肠时，乙醇作为有机溶剂溶解了肠和膜表面的新液，破坏了肠教膜屏障，使教膜对肠腔内TNBS的通透性增高，由于肠道免疫系统不能将大量进入的TNBS彻底清除，导致后者与结肠上皮细胞的赖氨酸共价结合，从而改变了表面蛋白质，形成自身抗原，导致发生针对肠粘膜的一系列免疫反应。所以，TNBS与乙醇的联合使用对本模型的成功复制是至关