龙门亮剑高三一轮人教版生物 选1全套PPT

选修选修1 生物技术实践生物技术实践 (1)运用发酵加工食品的基本方法运用发酵加工食品的基本方法 (2)测定食品加工中可能产生的有害物质测定食品加工中可能产生的有害物质 (1)制作果酒和果醋的基本原理和方法，以及制作果酒和果醋的基本原理和方法，以及发酵的条件发酵的条件 (2)设计安装简单的生产果酒、果醋的装置设计安装简单的生产果酒、果醋的装置 (3)能运用腐乳制作的原理和方法设计方案，能运用腐乳制作的原理和方法设计方案，选择材料并制卤汤，完成腐乳制作，评价质选择材料并制卤汤，完成腐乳制作，评价质量。设计方案、选择材料、完成泡菜制作，量。设计方案、选择材料、完成泡菜制作，运用比色法测定泡菜中亚硝酸盐的含量运用比色法测定泡菜中亚硝酸盐的含量 一、与传统发酵有关的几类微生物的比较一、与传统发酵有关的几类微生物的比较 酵母菌酵母菌 醋酸菌醋酸菌 毛霉毛霉 乳酸菌乳酸菌 生物学生物学 分类分类 真核生物真核生物 原核生原核生物物 真核真核生物生物 原核生物原核生物 生活生活 方式方式 异养兼异养兼 性厌氧性厌氧 异养需异养需氧氧 异养异养需氧需氧 异养厌氧异养厌氧 酵母菌酵母菌 醋酸菌醋酸菌 毛霉毛霉 乳酸菌乳酸菌 适宜适宜 温度温度 20 左右左右 3035 1518 室温室温 主要生主要生 殖方式殖方式 出芽生殖出芽生殖 二分裂二分裂生殖生殖 孢子生孢子生殖殖 二分裂二分裂 生殖生殖 主要主要 用途用途 酿酒、发酿酒、发面面 酿醋酿醋 制作腐制作腐乳乳 制作酸制作酸 奶、泡菜奶、泡菜 由于醋酸菌和乳酸菌属于原核生物，因此在由于醋酸菌和乳酸菌属于原核生物，因此在利用这两类微生物时，其环境中一定不要加利用这两类微生物时，其环境中一定不要加入青霉素等抗生素。入青霉素等抗生素。 二、亚硝酸盐二、亚硝酸盐 1与人体健康的关系与人体健康的关系 (1)在膳食中普遍存在，在人体内以“过客”在膳食中普遍存在，在人体内以“过客”的形式随尿排出，但当摄入总量较多时，可的形式随尿排出，但当摄入总量较多时，可引起中毒或死亡。引起中毒或死亡。 (2)亚硝酸盐在一定条件下可转化为能致癌、亚硝酸盐在一定条件下可转化为能致癌、致畸和致突变物质致畸和致突变物质亚硝胺。亚硝胺。 2含量的测定含量的测定 (1)原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N1萘萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，通基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，通过目测比较，大致估算其含量。过目测比较，大致估算其含量。 (2)测定操作：配制溶液测定操作：配制溶液制备标准显色液制备标准显色液制备样品处理液制备样品处理液比色。比色。 3测定亚硝酸盐含量的注意事项测定亚硝酸盐含量的注意事项 (1)标准显色液、样品处理液的制备中计量要标准显色液、样品处理液的制备中计量要精确。精确。 (2)制备样品处理液时，氢氧化铝乳液的作用制备样品处理液时，氢氧化铝乳液的作用是吸附样品滤液中的杂质，使滤液变得无色是吸附样品滤液中的杂质，使滤液变得无色透明，便于观察颜色变化。透明，便于观察颜色变化。 二、果酒、果醋、腐乳及泡菜的制作原理及二、果酒、果醋、腐乳及泡菜的制作原理及过程过程 果酒和果醋的果酒和果醋的制作制作 腐乳的制腐乳的制作作 泡菜的泡菜的制作制作 主要菌种主要菌种 果酒：酵母菌果酒：酵母菌果醋：醋酸菌果醋：醋酸菌 毛霉等毛霉等 乳酸菌乳酸菌 注意的问题注意的问题 1. 材料的选择材料的选择与处理与处理 2. 防止发酵液防止发酵液被污染被污染 3. 控制好发酵控制好发酵的条件的条件 1. 控制好材控制好材料的用量料的用量 2. 防止杂菌防止杂菌污染污染 1.泡菜坛泡菜坛的选择的选择 2.腌制的腌制的条件条件 果酒、果醋制作过程中防止杂菌污染的措施：果酒、果醋制作过程中防止杂菌污染的措施： 榨汁机和发酵瓶等都需清洗干净，且发酵榨汁机和发酵瓶等都需清洗干净，且发酵瓶要进行消毒。瓶要进行消毒。 清洗葡萄时要先清洗后除枝梗。清洗葡萄时要先清洗后除枝梗。 发酵瓶排气管用曲颈管不用直管。发酵瓶排气管用曲颈管不用直管。 生物技术在食品加工中生物技术在食品加工中 的应用十分广泛，如果酒、果醋、的应用十分广泛，如果酒、果醋、 腐乳、泡菜就是生活中常见的例腐乳、泡菜就是生活中常见的例 子。右图是果酒制果醋的发酵装子。右图是果酒制果醋的发酵装 置，分析回答下列问题：置，分析回答下列问题： (1)果酒制作的原材料通常是葡萄，但对葡萄果酒制作的原材料通常是葡萄，但对葡萄不能进行反复冲洗，其原因是不能进行反复冲洗，其原因是_ _。 (2)在图乙中遗漏了一个装置，请以文字加以在图乙中遗漏了一个装置，请以文字加以补充补充_ _。 (3)如果将该装置改为酒精的发酵装置，则温如果将该装置改为酒精的发酵装置，则温度应该控制在度应该控制在_。此时装置需要修改的。此时装置需要修改的地方是地方是_。果酒制果醋的反应式。果酒制果醋的反应式为：为：_。 (4)在果醋发酵过程中，用在果醋发酵过程中，用_检测是否有醋酸检测是否有醋酸生成。生成。 【解析解析】 (1)果酒是以葡萄为原料，通过酵果酒是以葡萄为原料，通过酵母菌发酵获得的，而酵母菌主要存在于果实的母菌发酵获得的，而酵母菌主要存在于果实的表面，所以不能对葡萄进行反复冲洗。表面，所以不能对葡萄进行反复冲洗。 (2)乙装置没有排气管道，所以应添加排气口，乙装置没有排气管道，所以应添加排气口，并连上一根长而弯曲的管子，保证酵母菌开始并连上一根长而弯曲的管子，保证酵母菌开始时进行有氧呼吸。时进行有氧呼吸。 (3)酵母菌生产酒精需进行无氧呼吸，所以生酵母菌生产酒精需进行无氧呼吸，所以生产酒精不需通入空气。酶的活性在产酒精不需通入空气。酶的活性在1825时时最高，所以装置中温度控制在最高，所以装置中温度控制在1825。 (4)用用pH试纸检测装置中培养液的试纸检测装置中培养液的pH，以检测，以检测是否有醋酸生成。是否有醋酸生成。 【答案答案】 (1)葡萄上存在酵母菌，反复冲洗，葡萄上存在酵母菌，反复冲洗，会洗去大量的酵母菌，不利于酒精发酵会洗去大量的酵母菌，不利于酒精发酵 (2)缺少一个排气口，应补上一个排气口装置，缺少一个排气口，应补上一个排气口装置，并连上一根长而弯曲的管子并连上一根长而弯曲的管子 (3)1825 不需要通入空气不需要通入空气 C2H5OH+O2CH3COOH+H2O (4)pH试纸试纸 明确果酒、果醋制作所需菌种的代谢类型是明确果酒、果醋制作所需菌种的代谢类型是解答此类题目的关键。制作果酒用酵母菌，解答此类题目的关键。制作果酒用酵母菌，需先通气后密封，而制作果醋需始终有氧气需先通气后密封，而制作果醋需始终有氧气存在。存在。 (2010年山东省潍坊市模拟年山东省潍坊市模拟)农村中泡农村中泡菜的制作方法是：新鲜的蔬菜经过整理、清菜的制作方法是：新鲜的蔬菜经过整理、清洁后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜洁后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜坛中，然后向坛中加入盐水、香辛料及一些坛中，然后向坛中加入盐水、香辛料及一些“陈泡菜水”。密封后置于阴凉处，最适环“陈泡菜水”。密封后置于阴凉处，最适环境温度为境温度为2830 。有时制作的泡菜会“咸。有时制作的泡菜会“咸而不酸”或“酸而不咸”，前者是用盐过多，而不酸”或“酸而不咸”，前者是用盐过多，后者是用盐过少。在实验室或工厂化生产泡后者是用盐过少。在实验室或工厂化生产泡菜时，还要跟踪检测泡菜腌制过程中产生的菜时，还要跟踪检测泡菜腌制过程中产生的亚硝酸盐含量。亚硝酸盐含量。 (1)用白酒擦拭泡菜坛的目的是用白酒擦拭泡菜坛的目的是_。 (2)菜坛为什么要密封？若菜坛有裂缝，可能菜坛为什么要密封？若菜坛有裂缝，可能会出现什么结果？会出现什么结果？ _。 (3)加入“陈泡菜水”的作用是加入“陈泡菜水”的作用是_。 (4)制作泡菜的过程中，有机物的干重如何变制作泡菜的过程中，有机物的干重如何变化？菜坛内有机物的种类如何变化？化？菜坛内有机物的种类如何变化？_。 (5)若要获得大量乳酸菌菌种，应选用培养基若要获得大量乳酸菌菌种，应选用培养基培养，培养基中应用培养，培养基中应用_、_、_、_和和_五大营养物五大营养物质，同时还需适宜的条件，主要有质，同时还需适宜的条件，主要有_、_。 【解析解析】 泡菜制作是应用了乳酸菌的发酵泡菜制作是应用了乳酸菌的发酵原理，提供的新鲜蔬菜是它的培养基。乳酸原理，提供的新鲜蔬菜是它的培养基。乳酸菌是厌氧型微生物，在缺氧的环境条件下发菌是厌氧型微生物，在缺氧的环境条件下发酵可产生大量乳酸，能抑制其他厌氧菌的生酵可产生大量乳酸，能抑制其他厌氧菌的生存；在有氧情况下，自身受抑制，不能进行存；在有氧情况下，自身受抑制，不能进行乳酸发酵，使需氧菌繁殖而变质。乳酸菌生乳酸发酵，使需氧菌繁殖而变质。乳酸菌生长繁殖需要消耗有机物，发酵过程中会产生长繁殖需要消耗有机物，发酵过程中会产生更多种类的有机物。更多种类的有机物。 乳酸菌属异养厌氧型，培养基中应有碳乳酸菌属异养厌氧型，培养基中应有碳源、氮源、生长因子、水、无机盐五大源、氮源、生长因子、水、无机盐五大营养物质，需要的培养条件主要有适宜营养物质，需要的培养条件主要有适宜的温度的温度(28 30 )、无氧环境，这样、无氧环境，这样菌种才能大量增殖。菌种才能大量增殖。 【答案答案】 (1)消毒消毒 (2)乳酸菌是厌氧型微乳酸菌是厌氧型微生物。密封后造成缺氧环境；菜坛有裂缝，生物。密封后造成缺氧环境；菜坛有裂缝，将导致乳酸菌不能正常生长，而一些杂菌大将导致乳酸菌不能正常生长，而一些杂菌大量繁殖，泡菜会变质量繁殖，泡菜会变质 (3)提供乳酸菌菌种提供乳酸菌菌种 (4)有机物干重减少；种类增加有机物干重减少；种类增加 (5)碳源碳源 氮氮源源 生长因子生长因子 水水 无机盐无机盐 适宜的温度适宜的温度 无氧环境无氧环境 1(2008年江苏卷年江苏卷)下列关于腐乳制作的述中，下列关于腐乳制作的述中，错误的是错误的是( ) A在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与微生物参与 B含水量大于含水量大于85%的豆腐利于保持湿度，适的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳宜制作腐乳 C加盐和加酒都能抑制微生物的生长加盐和加酒都能抑制微生物的生长 D密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染污染 【解析解析】 腐乳的制作原理是利用毛霉等微腐乳的制作原理是利用毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐中的蛋白生物产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐中的蛋白质和脂肪分解成小分子的肽、氨基酸和甘油、质和脂肪分解成小分子的肽、氨基酸和甘油、脂肪酸。一般说来，含水量为脂肪酸。一般说来，含水量为70%的豆腐最的豆腐最为适宜，水分过多则腐乳不易成形，而且会为适宜，水分过多则腐乳不易成形，而且会影响醋酸菌的有氧呼吸。影响醋酸菌的有氧呼吸。 【答案答案】 B 2(2008年江苏卷年江苏卷)图甲是果醋发酵装置。发图甲是果醋发酵装置。发酵初期不通气，溶液中有气泡产生；中期可酵初期不通气，溶液中有气泡产生；中期可以闻到酒香；后期接种醋酸菌，适当升高温以闻到酒香；后期接种醋酸菌，适当升高温度并通气，酒香逐渐变成醋香。图乙中能表度并通气，酒香逐渐变成醋香。图乙中能表示整个发酵过程培养液示整个发酵过程培养液pH变化的曲线是变化的曲线是( ) A B C D 【解析解析】 在果醋发酵过程中，首先瓶中进在果醋发酵过程中，首先瓶中进行的是有氧呼吸产生行的是有氧呼吸产生CO2，使，使pH下降；一段下降；一段时间后氧气消耗殆尽开始进行无氧呼吸，也时间后氧气消耗殆尽开始进行无氧呼吸，也可产生可产生CO2，使，使pH下降；最后进行醋酸发酵下降；最后进行醋酸发酵生成醋酸，会使生成醋酸，会使pH迅速下降，所以培养液中迅速下降，所以培养液中pH一直降低，如曲线所示。一直降低，如曲线所示。 【答案答案】 B 3(2007年山东高考年山东高考)乙醇等“绿色能源”的乙醇等“绿色能源”的开发备受世界关注。利用玉米秸秆生产燃料开发备受世界关注。利用玉米秸秆生产燃料酒精的大致流程为：酒精的大致流程为： 玉米秸秆玉米秸秆 预处理、水解预处理、水解糖液糖液发酵发酵酒精酒精 (1)玉米秸秆经预处理后，应该选用玉米秸秆经预处理后，应该选用_酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。酶进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖。 (2)从以下哪些微生物中可以提取上述酶？从以下哪些微生物中可以提取上述酶？(多多选选)_。 A酿制果醋的醋酸菌酿制果醋的醋酸菌 B生长在腐木上的霉菌生长在腐木上的霉菌 C制作酸奶的乳酸菌制作酸奶的乳酸菌 D生产味精的谷氨酸棒状杆菌生产味精的谷氨酸棒状杆菌 E反刍动物瘤胃中生存的某些微生物反刍动物瘤胃中生存的某些微生物 (3)若从土壤中分离出产生这种酶的微生物，若从土壤中分离出产生这种酶的微生物，所需要的培养基为所需要的培养基为_(按功能分按功能分)，培养基中的碳源为培养基中的碳源为_。 (4)从生物体内提取出的酶首先要检测从生物体内提取出的酶首先要检测_，以便更好地将酶用于生产实践。，以便更好地将酶用于生产实践。在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复在生产糖液的过程中，为了使酶能够被反复利用，可采用利用，可采用_技术。技术。 (5)发酵阶段需要的菌种是发酵阶段需要的菌种是_，在产生，在产生酒精时要控制的必要条件是酒精时要控制的必要条件是_。 【解析解析】 玉米的秸秆主要由纤维素构成，玉米的秸秆主要由纤维素构成，可利用纤维素酶将其转化为葡萄糖。根据微可利用纤维素酶将其转化为葡萄糖。根据微生物的利用物质和生活习性，可分析出生活生物的利用物质和生活习性，可分析出生活在腐木上的霉菌可分解利用木纤维，反刍动在腐木上的霉菌可分解利用木纤维，反刍动物瘤胃中生存的某些微生物可分解利用植物物瘤胃中生存的某些微生物可分解利用植物纤维，二者是提取纤维素酶的理想材料。从纤维，二者是提取纤维素酶的理想材料。从微生物群体中选择具有特定表型的细胞，使微生物群体中选择具有特定表型的细胞，使之进行繁殖所用的培养基称为选择培养基。之进行繁殖所用的培养基称为选择培养基。固定化细胞与固定化酶技术一起组成了现代固定化细胞与固定化酶技术一起组成了现代的固定化生物催化剂技术，可反复利用，并的固定化生物催化剂技术，可反复利用，并利于与产物分离。利于与产物分离。 酵母菌既可进行有氧呼吸，又可进行无氧呼酵母菌既可进行有氧呼吸，又可进行无氧呼吸。有氧呼吸时，把葡萄糖氧化分解为水和吸。有氧呼吸时，把葡萄糖氧化分解为水和二氧化碳，释放大量能量二氧化碳，释放大量能量(此时是酵母菌大量此时是酵母菌大量繁殖的时候繁殖的时候)；无氧呼吸时，把葡萄糖氧化分；无氧呼吸时，把葡萄糖氧化分解为酒精，释放少量能量解为酒精，释放少量能量(用于酿酒用于酿酒)。 【答案答案】 (1)纤维素纤维素 (2)BE (3)选择培养选择培养基基 纤维素纤维素 (4)酶的活力酶的活力(活性活性) 固定化酶固定化酶(固定化细胞固定化细胞) (5)酵母菌酵母菌 无氧无氧(密闭或密封密闭或密封) (1)微生物的分离与培养微生物的分离与培养 (2)某种微生物数量的测定某种微生物数量的测定 (3)培养基对微生物的选择作用培养基对微生物的选择作用 (4)利用微生物发酵来生产特定的产物以及微利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用生物在其他方面的应用 (1)培养基的种类、营养要求及配制原则培养基的种类、营养要求及配制原则 (2)无菌技术的内容及方法无菌技术的内容及方法 (3)分离纯化微生物的研究思路、方法分离纯化微生物的研究思路、方法 一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养 1培养基的营养构成培养基的营养构成 营养营养 物质物质 定义定义 作用作用 主要来源主要来源 碳源碳源 能提供碳元能提供碳元素的物质素的物质 构成生物体的物构成生物体的物质，异养生物的质，异养生物的能源物质能源物质 无机物：无机物：CO2、NaHCO3 有机物：糖类、有机物：糖类、脂肪酸、石油、脂肪酸、石油、花生粉饼等花生粉饼等 营养营养 物质物质 定义定义 作用作用 主要来源主要来源 氮源氮源 能提供氮元素能提供氮元素的物质的物质 合成蛋白质、合成蛋白质、核酸以及含氮核酸以及含氮代谢产物代谢产物 无机物：无机物：N2、NH3、氨盐、氨盐、硝酸盐硝酸盐 有机物：尿素、有机物：尿素、牛肉膏、蛋白牛肉膏、蛋白胨等胨等 生长生长 因子因子 生长不可缺少生长不可缺少的微量有机物的微量有机物 酶和核酸的成酶和核酸的成分分 维生素、氨基维生素、氨基酸、碱基等酸、碱基等 (1)微生物最常利用的碳源是糖类微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄特别是葡萄糖糖)，常利用的氮源是氨盐、硝酸盐。，常利用的氮源是氨盐、硝酸盐。 (2)在微生物所需要的化合物中需要量最大的在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。是碳源。 (3)微生物之所以需要补充生长因子，是由于微生物之所以需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。限。 2大肠杆菌的纯化大肠杆菌的纯化 大肠杆菌的纯化培养，包括培养基的配制和大肠杆菌的纯化培养，包括培养基的配制和纯化大肠杆菌两个阶段。纯化大肠杆菌两个阶段。 (1)培养基的配制流程培养基的配制流程(以牛肉膏蛋白胨培养基以牛肉膏蛋白胨培养基为例为例) 计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的比例，计算配制例，计算配制100 mL的培养基时，各种成分的培养基时，各种成分的用量。的用量。 称量：准确地称取各种成分。称量：准确地称取各种成分。 溶化：先将称好的牛肉膏连同称量纸一同溶化：先将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水加热。当牛肉膏溶放入烧杯，加入少量的水加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。然后往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠，最后加然后往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠，最后加入琼脂，加热使其熔化。在此过程中不断用入琼脂，加热使其熔化。在此过程中不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。当琼脂完全熔化后，补加蒸馏水至当琼脂完全熔化后，补加蒸馏水至100 mL。 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中加棉塞包好，放入高压灭菌锅，在压力为加棉塞包好，放入高压灭菌锅，在压力为100 kPa、温度为、温度为121 条件下，灭菌条件下，灭菌1530 min。将培养皿包好后放入干热灭菌箱内，在将培养皿包好后放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌下灭菌2 h。 倒平板：等培养基冷却至倒平板：等培养基冷却至50 左右时，在左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。酒精灯火焰附近倒平板。 (2)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。可见的子细胞群体，这就是菌落。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。形成单个的菌落。 (3)培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基培养基(对照组对照组)都放入都放入37 恒温箱中，培养恒温箱中，培养12 h和和24 h后，分别观察并记录结果。后，分别观察并记录结果。 3无菌技术无菌技术 (1)消毒和灭菌的区别消毒和灭菌的区别 条件条件 结果结果 常用的方法常用的方法 消消毒毒 较为温和的较为温和的物理或化学物理或化学方法方法 仅杀死物体表面仅杀死物体表面或内部一部分对或内部一部分对人体有害的微生人体有害的微生物物(不包括芽孢和不包括芽孢和孢子孢子) 煮沸消毒法、巴煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外氏消毒法、紫外线或化学药物消线或化学药物消毒法毒法 灭灭菌菌 强烈的理化强烈的理化因素因素 杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子 灼烧灭菌、干热灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌、高压蒸汽灭菌灭菌 酒精消毒时，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好，原的酒精杀菌效果最好，原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。过低，杀菌力减弱。 (2)无菌技术主要操作要求无菌技术主要操作要求 实验前应对操作空间、操作人员消毒，对实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所有器具和培养基灭菌。所有器具和培养基灭菌。 实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1选择合适的培养基选择合适的培养基 (1)根据培养基的用途可分为选择培养基和鉴根据培养基的用途可分为选择培养基和鉴别培养基别培养基 培养基培养基种类种类 特点特点 用途用途 选择培选择培养基养基 培养基中加入某种化培养基中加入某种化学物质，以抑制不需学物质，以抑制不需要的微生物的生长，要的微生物的生长，促进所需要的微生物促进所需要的微生物的生长的生长 培养、分离出特定微培养、分离出特定微生物生物(如培养酵母菌和如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中霉菌，可在培养基中加入青霉素；用尿素加入青霉素；用尿素作为唯一氮源的培养作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素基用于分离分解尿素的细菌的细菌) (2)分离分解尿素的细菌的培养基即为选分离分解尿素的细菌的培养基即为选择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论择培养基，培养基中的氮源只有尿素，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。 培养培养基种基种类类 特点特点 用途用途 鉴别鉴别培养培养基基 根据微生物的代根据微生物的代谢特点，在培养谢特点，在培养基中加入某种指基中加入某种指示剂或化学药品示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如鉴别不同种类的微生物，如可用伊红可用伊红美蓝培养基鉴别美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽并带有金属光泽) 2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法显微镜直接计数法 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计一定容积的样品中微生物板，在显微镜下计一定容积的样品中微生物数量。数量。 方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。 缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。能推测出样品中大约含有多少活菌。 操作操作 a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在30 300的平板进行计数。的平板进行计数。 计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数 ， 其中其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落 数，数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积代表涂布平板时所用的稀释液的体积 (mL)，M代表稀释倍数。代表稀释倍数。 CVM 3细菌分离与计数的实验流程细菌分离与计数的实验流程 土壤取样土壤取样样品稀释样品稀释取样涂布取样涂布微生物微生物培养培养观察并记录结果观察并记录结果细菌计数细菌计数 三、分解纤维素的微生物的分离三、分解纤维素的微生物的分离 1纤维素酶纤维素酶 是一种复合酶，它包括是一种复合酶，它包括C1酶、酶、Cx酶和葡萄糖酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。 2纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌的筛选原理 (1)刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。反应。 (2)纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。从而使菌落周围形成透明圈。 3土壤中纤维素分解菌的筛选土壤中纤维素分解菌的筛选 (1)方案方案 土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释将样品涂布将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透挑选产生透明圈的菌落。明圈的菌落。 (2)选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，确保能够从样品中分离到所需要的微生物。确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 (3)涉及到的微生物技术主要有：培养基的制作、涉及到的微生物技术主要有：培养基的制作、无菌操作、稀释涂布平板法、选择培养基的作无菌操作、稀释涂布平板法、选择培养基的作用、土壤取样等。用、土壤取样等。 (2010年青岛市模拟年青岛市模拟)啤酒是我们日常生啤酒是我们日常生活中最常见的饮料之一。生产过程大致如下：活中最常见的饮料之一。生产过程大致如下：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多；当糖度下降到一定程度后，结束发酵；多；当糖度下降到一定程度后，结束发酵；最后分别输出有形物质和啤酒。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过根据上述过程，回答以下问题：程，回答以下问题： (1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：变及筛选过程如下： 步骤步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。线照射诱变处理。 步骤步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意添加础上，注意添加_和调低和调低pH，加琼脂，加琼脂后灭菌，制成固体平板。后灭菌，制成固体平板。 步骤步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。 步骤步骤4：根据：根据_筛选出突变菌。筛选出突变菌。 (2)上述步骤上述步骤2、3的目的分别是的目的分别是_。 (3)酿酒过程中，经检测活菌数量适宜但却不酿酒过程中，经检测活菌数量适宜但却不产生酒精，应采取的措施是产生酒精，应采取的措施是_。 (4)秸秆的主要成分为木质素、纤维素和半纤秸秆的主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌却无法直接利用，原因是维素，但是酵母菌却无法直接利用，原因是其其_。若要酵母菌能利用植物。若要酵母菌能利用植物秸秆进行发酵抽取酒精，请提出解决该问题秸秆进行发酵抽取酒精，请提出解决该问题的方法。的方法。(列举两种方法列举两种方法)_ _。 【解析解析】 (1)因为是选择耐高糖的酵母菌，因为是选择耐高糖的酵母菌，所以应该加糖；一般来说能在选择培养基上所以应该加糖；一般来说能在选择培养基上生长繁殖的一定是耐高糖和耐酸的酵母菌。生长繁殖的一定是耐高糖和耐酸的酵母菌。 (2)步骤步骤2的目的是创造选择的特定环境，步骤的目的是创造选择的特定环境，步骤3的目的是通过稀释的方法期望获得单一菌落。的目的是通过稀释的方法期望获得单一菌落。 (3)活菌数量较多但不能产生酒精说明酵母菌活菌数量较多但不能产生酒精说明酵母菌不能进行无氧呼吸，所以为了获得酒精必须不能进行无氧呼吸，所以为了获得酒精必须密闭。密闭。 (4)酵母菌缺乏分解纤维素的酶系所以不能利酵母菌缺乏分解纤维素的酶系所以不能利用纤维素，但是可以通过基因工程的方法将用纤维素，但是可以通过基因工程的方法将分解纤维素的微生物中有关基因导入酵母菌，分解纤维素的微生物中有关基因导入酵母菌，或者混合培养等方式。或者混合培养等方式。 【答案答案】 (1)高浓度蔗糖高浓度蔗糖(葡萄糖葡萄糖) 是否能在是否能在选择培养基上生长选择培养基上生长 (2)提供高糖和酸性筛选环境提供高糖和酸性筛选环境 获得单菌落获得单菌落 (3)隔绝空气隔绝空气 (4)缺乏相应分解酶系缺乏相应分解酶系(或缺乏纤维素酶和半纤或缺乏纤维素酶和半纤维素酶维素酶) 在酵母菌中转入分解酶系相关基因；在酵母菌中转入分解酶系相关基因；利用酶或微生物分解秸秆；利用物理和化学利用酶或微生物分解秸秆；利用物理和化学方法分解秸秆；将酵母菌与其他能分解秸秆方法分解秸秆；将酵母菌与其他能分解秸秆的微生物混合发酵的微生物混合发酵 (2009年宁夏高考题年宁夏高考题)(1)在大肠杆菌培在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、选择、_、_等优点，因此常作等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。为遗传学研究的实验材料。 (2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行染，需对培养基和培养皿进行_(消毒、灭消毒、灭菌菌)；操作者的双手需要进行清洗和；操作者的双手需要进行清洗和_；静；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能紫外线能使蛋白质变性，还能_。 (3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的品稀释的_。 (4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。 (5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是测方法是_。 (6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过及其培养物必须经过_处理后才能丢处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。弃，以防止培养物的扩散。 【解析解析】 (1)影响微生物培养的因素除了营影响微生物培养的因素除了营养条件外，外界条件主要包括温度、酸碱度养条件外，外界条件主要包括温度、酸碱度和渗透压等。由于大肠杆菌具有体积小、结和渗透压等。由于大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，所以常作为遗传学研究的实周期短等优点，所以常作为遗传学研究的实验材料。验材料。 (2)灭菌是指用强烈的物理或化学的方法，杀灭菌是指用强烈的物理或化学的方法，杀死物体内外的一切微生物，包括芽孢和孢子。死物体内外的一切微生物，包括芽孢和孢子。消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。对于培养基和培养器皿要进行灭菌，对物。对于培养基和培养器皿要进行灭菌，对操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒，操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒，静止空气中的细菌在用紫外线照射能够使蛋静止空气中的细菌在用紫外线照射能够使蛋白质变性，并损伤白质变性，并损伤DNA结构，使细菌死亡。结构，使细菌死亡。 (3)样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目，实际操作中，通常选用一定稀释范的数目，实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得的菌落数围的样品液进行培养，以保证获得的菌落数在在30300之间。之间。 (4)菌落的特征是判断微生物的种类的重要依菌落的特征是判断微生物的种类的重要依据。对获得的纯菌种可以依据菌落的特征对据。对获得的纯菌种可以依据菌落的特征对细菌进行初步检测。细菌进行初步检测。 (5)要判断固体培养基是否被污染，可将未接要判断固体培养基是否被污染，可将未接种的培养基在适宜的温度下培养一段时间，种的培养基在适宜的温度下培养一段时间，若发现有菌落说明培养基已被污染。若发现有菌落说明培养基已被污染。 (6)进行微生物培养时，使用过的培养基及培进行微生物培养时，使用过的培养基及培养物必须经灭菌后才能丢弃，防止培养的微养物必须经灭菌后才能丢弃，防止培养的微生物扩散到环境中，造成危害。生物扩散到环境中，造成危害。 【答案答案】 (1)温度温度 酸碱度酸碱度 易培养易培养 生活生活周期短周期短 (2)灭菌灭菌 消毒消毒 损伤损伤DNA的结构的结构 (3)比例合适比例合适 (4)鉴定鉴定(或分类或分类) (5)将未接种将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生观察培养基上是否有菌落产生 (6)灭菌灭菌 1(2009年四川高考题年四川高考题)下列关于几种微生物下列关于几种微生物的营养代谢和生长繁殖的描述，正确的是的营养代谢和生长繁殖的描述，正确的是( ) A根瘤菌通过生物固氮，制造了含氮养料和根瘤菌通过生物固氮，制造了含氮养料和含碳有机物含碳有机物 B接种到培养基上的青霉菌，进入对数期接种到培养基上的青霉菌，进入对数期能大量积累青霉素能大量积累青霉素 C培养液中溶氧量的变化，会影响酵母培养液中溶氧量的变化，会影响酵母菌的生长繁殖和代谢途径菌的生长繁殖和代谢途径 D用用32P标记的噬菌体感染细菌，在新形标记的噬菌体感染细菌，在新形成的噬菌体中都能检测到成的噬菌体中都能检测到32P 【解析解析】 根瘤菌异养生活，不能合成含氮根瘤菌异养生活，不能合成含氮有机物，有机物，A选项错误；处于对数期的青霉菌是选项错误；处于对数期的青霉菌是菌种数目大量增加的时期，处于稳定期时才菌种数目大量增加的时期，处于稳定期时才能积累大量青霉素，能积累大量青霉素，B选项错误；酵母菌的繁选项错误；酵母菌的繁殖需要在有氧条件下进行，酵母菌在有氧和殖需要在有氧条件下进行，酵母菌在有氧和无氧条件下分别进行有氧呼吸和无氧呼吸，无氧条件下分别进行有氧呼吸和无氧呼吸，C选项正确；用选项正确；用32P标记噬菌体感染细菌时，其标记噬菌体感染细菌时，其子代遗传物质的合成是以被子代遗传物质的合成是以被32P标记噬菌体的标记噬菌体的DNA为模板，以细菌的核苷酸为原料，所以为模板，以细菌的核苷酸为原料，所以子代噬菌体中只有少数含子代噬菌体中只有少数含32P，D选项错误。选项错误。 【答案答案】 C 2(2009年重庆高考年重庆高考)下列有关大肠杆菌的叙下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是述，正确的是( ) A大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其拟核是一个环状一个环状DNA分子分子 B在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用乳糖作碳源首先利用乳糖作碳源 C用大肠杆菌工程菌生产干扰素时，应及时用大肠杆菌工程菌生产干扰素时，应及时添加核酸等生长因子添加核酸等生长因子 D处于对数期的大肠杆菌，常作为生产用的处于对数期的大肠杆菌，常作为生产用的菌种和科研的材料菌种和科研的材料 【解析解析】 大肠杆菌是一种细菌，以二分裂大肠杆菌是一种细菌，以二分裂的方式进行繁殖；在含葡萄糖和乳糖的培养的方式进行繁殖；在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用葡萄糖作能源，然基上，大肠杆菌首先利用葡萄糖作能源，然后再利用乳糖；利用大肠杆菌作为工程菌生后再利用乳糖；利用大肠杆菌作为工程菌生产干扰素时，不需要添加外源生长因子；处产干扰素时，不需要添加外源生长因子；处于对数期的大肠杆菌细胞代谢最旺盛，常作于对数期的大肠杆菌细胞代谢最旺盛，常作为生产用的菌种和科研的材料。为生产用的菌种和科研的材料。 【答案答案】 D 3(2009年安徽高考题年安徽高考题)下列是关于“检测土下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是的是( ) A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板温、高压灭菌后倒平板 B取取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水倍的土壤稀释液和无菌水各各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上 C将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37 恒温恒温培养培养2448小时小时 D确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300以以上的实验组平板进行计数上的实验组平板进行计数 【解析解析】 采用稀释涂布平板法统计菌落数采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在目时，一般选择菌落数在30300的平板进行的平板进行计数。计数。 【答案答案】 D 4(2007年江苏高考卷年江苏高考卷)不同的微生物对营养不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是确的是( ) A氮源物质为该微生物提供必要的氮素氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B碳源物质也是该微生物的能源物质碳源物质也是该微生物的能源物质 C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D水是该微生物的营养要素之一水是该微生物的营养要素之一 【解析解析】 本题考查微生物的营养要素以及本题考查微生物的营养要素以及理解应用能力、判断能力。理解应用能力、判断能力。CO2可为自养型微可为自养型微生物提供碳源，但不能提供能源。生物提供碳源，但不能提供能源。 【答案答案】 B 5下列所述环境条件下的微生物，能正常生下列所述环境条件下的微生物，能正常生长繁殖的是长繁殖的是( ) A在缺乏生长素的无氮培养基中的固褐固氮在缺乏生长素的无氮培养基中的固褐固氮菌菌 B在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌在人体表皮擦伤部位的破伤风杆菌 C在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌在新配制的植物矿质营养液中的酵母菌 D在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病在灭菌后的动物细胞培养液中的禽流感病毒毒 【解析解析】 圆褐固氮菌是自生固氮细菌，圆褐固氮菌是自生固氮细菌，因此可以在缺乏生长素的无氮培养基中的生因此可以在缺乏生长素的无氮培养基中的生长繁殖。破伤风杆菌是异养厌氧细菌，人体长繁殖。破伤风杆菌是异养厌氧细菌，人体表皮擦伤部位是有氧的环境，破伤风杆菌不表皮擦伤部位是有氧的环境，破伤风杆菌不能生长和繁殖，酵母菌是异养型微生物，新能生长和繁殖，酵母菌是异养型微生物，新配制的植物矿质营养液中缺少有机碳；禽流配制的植物矿质营养液中缺少有机碳；禽流感病毒不能独立生活，只能寄生在活的细胞感病毒不能独立生活，只能寄生在活的细胞中，因此禽流感病毒不能在灭菌后的动物细中，因此禽流感病毒不能在灭菌后的动物细胞培养液中生长繁殖。胞培养液中生长繁殖。 【答案答案】 A 6下列关于平菇培养的操作程序，正确的是下列关于平菇培养的操作程序，正确的是( ) A配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养汽灭菌，培养 B配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养接种，培养 C配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养培养 D配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养培养 【解析解析】 培养平菇所用的培养基是棉子壳，培养平菇所用的培养基是棉子壳，具体的操作程序是：配制培养基，高压蒸汽具体的操作程序是：配制培养基，高压蒸汽灭菌，培养。灭菌，培养。 【答案答案】 D 7通过选择培养基可以从混杂的微生物群体通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出(多选多选)( ) A大肠杆菌大肠杆菌 B霉菌霉菌 C放线菌放线菌 D固氮细菌固氮细菌 【解析解析】 根据题意，固氮细菌的生长不需根据题意，固氮细菌的生长不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌和酵母能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌和酵母菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作原料合成自身生长，而放线菌却能利用酚作原料合成自身的产物。的产物。 【答案答案】 DBC 8(2008年广东高考年广东高考)苯酚是工业生产排放的苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示：为土壤样品。选的主要步骤如下图所示：为土壤样品。请回答下列问题：请回答下列问题： (1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，中不同浓度碳源的培养基作为碳源，中不同浓度碳源的培养基_(A.影响；影响；B.不影响不影响)细菌的数量，如果要细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用测定中活细菌数量，常采用_法。法。 (2)为对照，微生物在中不生长，在中为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于生长，与培养基的主要区别在于_；使用使用_法可以在上获得单菌落。采用法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？_。 (3)如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？_。 (4)实验过程中如何防止其他微生物的污染？实验过程中如何防止其他微生物的污染？_。 【解析解析】 题目中所筛选的细菌“只能”题目中所筛选的细菌“只能”降解苯酚，故可采用以苯酚为唯一碳源的选降解苯酚，故可采用以苯酚为唯一碳源的选择培养基筛选，含除苯酚外其他碳源的培养择培养基筛选，含除苯酚外其他碳源的培养基作为对照。培养液中苯酚浓度下降的速度基作为对照。培养液中苯酚浓度下降的速度可反映该菌对苯酚的降解能力。严格灭菌、可反映该菌对苯酚的降解能力。严格灭菌、无菌操作可有效防止实验过程中的杂菌污染。无菌操作可有效防止实验过程中的杂菌污染。 【答案答案】 (1)苯酚苯酚 A 平板菌落计数平板菌落计数(活菌活菌计数或菌落计数计数或菌落计数) (2)的培养基没有加入苯酚作为碳源，培的培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基中加入苯酚作为碳源养基中加入苯酚作为碳源 稀释涂布平板法稀释涂布平板法或平板划线或平板划线 采用固体平板培养细菌时要倒采用固体平板培养细菌时要倒置培养以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养置培养以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基基上污染培养基 (3)用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株。用同样苯酚浓度的培养液培养不同菌株。一定时间后，测定培养液中苯酚含量一定时间后，测定培养液中苯酚含量 (4)从制备培养基到接种与培养等全部实验过从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作程要无菌操作(答案合理即可答案合理即可) 微生物的培养与应用微生物的培养与应用 微生物的实微生物的实验室培养验室培养 土壤中分解尿素的土壤中分解尿素的细菌的分离与计数细菌的分离与计数 分解纤维素分解纤维素的微生物的的微生物的分离分离 微生物微生物的实验的实验室培养室培养 培养基：概念、种类、成分、常用培养基：概念、种类、成分、常用培养基培养基 无菌技术无菌技术 无菌技术内容无菌技术内容 消毒与灭菌消毒与灭菌 实验室常用的消毒方法实验室常用的消毒方法 实验室常用的灭菌方法实验室常用的灭菌方法 实验操作实验操作 制备牛肉膏蛋白胨固体制备牛肉膏蛋白胨固体 培养基的方法培养基的方法 纯化大肠杆菌的方法纯化大肠杆菌的方法 菌种保藏的方法菌种保藏的方法 研究思路研究思路 菌种筛选菌种筛选 统计菌落菌数目统计菌落菌数目 设置对照设置对照 系列稀释系列稀释 实验设计实验设计 涂布平板涂布平板 培养观察培养观察 土壤取样土壤取样 土壤中土壤中 分解尿分解尿 素的分素的分 离与计离与计 数数 分解纤分解纤维素的维素的微生物微生物的分离的分离 纤维素与纤维素酶纤维素与纤维素酶 纤维素分解菌的筛选纤维素分解菌的筛选 实验设计实验设计 土壤取样土壤取样 选择培养基的特点、选择选择培养基的特点、选择培养的目的培养的目的 刚果红染色法刚果红染色法 实验流程：土壤取样实验流程：土壤取样选择培选择培养（可以省略）养（可以省略）梯度稀释梯度稀释涂布平板涂布平板培养后挑选产生透培养后挑选产生透明的圈的菌落明的圈的菌落 (1)植物细胞全能性含义及其表达的条件植物细胞全能性含义及其表达的条件 (2)植物组织培养中生长素和细胞分裂素的作植物组织培养中生长素和细胞分裂素的作用用 (3)花药培养产生花粉植株的两种途径花药培养产生花粉植株的两种途径 (4)花粉发育经历的不同时期花粉发育经历的不同时期 (1)细胞分化与细胞全能性的生产应用细胞分化与细胞全能性的生产应用 (2)植物组织培养的基本原理及其培养条件植物组织培养的基本原理及其培养条件 (3)影响植物组织培养的因素影响植物组织培养的因素 (4)植物激素在植物组织培养中的作用植物激素在植物组织培养中的作用 一、对植物组织培养的分析一、对植物组织培养的分析 1原理：原理：植物细胞全能性植物细胞全能性 基础：细胞内具有该物种发育所需的全部遗传物质基础：细胞内具有该物种发育所需的全部遗传物质 全能性高低：受精卵全能性高低：受精卵生殖细胞生殖细胞体细胞体细胞 植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞 分化程度低的细胞分化程度低的细胞分化程度高的细胞分化程度高的细胞 2细胞分化的实质：细胞分化的实质：细胞内遗传物质的执细胞内遗传物