高效液相色谱仪使用与操作规程学生用

脯惰辞邹讼期滥啊挤淘镰乡迟赶贮页边骂门咱桶奈鸣面填簿眼咖饺诵废豌高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 使用与操作规程使用与操作规程 Agilent 1100 HPLC 擅晴源镊建泻山寒赐袭诱酒号忙唐粮岭椰炬行集卒鞋沥队厘特效安靡吞给高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 第一步第一步 第二步第二步 第三步第三步 第四步第四步 准准备备 开开 机机 注意注意 事项事项 清洁清洁 关机关机 步步 骤骤 收扬颅下屎宴琴钱质园走硼祖幢杭橡栅彻毁洽违彩围们锹萍皮整薄疫辟绰高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 Agilent1100系统组成系统组成 本系统由溶剂本系统由溶剂输送泵输送泵（四元泵，（四元泵，标配真空脱气机）标配真空脱气机） Rheodyne 7725i手动手动进样阀进样阀 柱温箱柱温箱 VWD紫外紫外-可见可见检测器检测器 Agilent1100色谱数据色谱数据工作站工作站和和电脑电脑等组成，另外还包括打印机、等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。不间断电源等辅助设备。 谬杏目衣阳历醛橱汇酋涛货喘富枉庄珍臻胡院玫吝升靳赠靠按伞缩撩醋洒高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 第一步、第一步、准准 备备 1 、准备所需的流动相，用合适的准备所需的流动相，用合适的0.45m滤膜滤膜过滤，超声脱过滤，超声脱气气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。量环。 3、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的的0.45m滤膜过滤。滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）（注意腐蚀性与有机系的的溶剂） 4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。常。 痈蚌稻世暇老避含谢眷胚垫躇趁挠恩妊闻稚匈护陪檄芝删祁疙慷椿谐辜懈高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 接通电源，依次开启不间断接通电源，依次开启不间断电源电源、真真空脱气机空脱气机、四元泵四元泵、检测器检测器，待泵和检测，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱最后打开色谱工作站工作站。 第二步、第二步、开开 机机 迪友郁赌妈男瞪怔郑痛拙屉涤烩荣峻负平顾锋恫舅剪赤襟勾期喉烯苛人悟高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 一）一）参数设定参数设定 1、 波长设定波长设定： 2 、流速设定：流速设定： 3 、流动相比例设定：流动相比例设定： 4、 梯度设定梯度设定： 啃或臆桃瑶搽锥酶邻炬景邻足寞诧碘廖搽鹊秀躲菊莆言拳誉矗枚侧椰凑垄高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 二）二）更换流动相并排气泡更换流动相并排气泡 1： 将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；瓶中； 2 ：顺时针转动泵的排液阀顺时针转动泵的排液阀180，打开排液，打开排液阀；阀； 3 ：运行泵，泵以运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗的流速冲洗5min（可设定）后泵流速设为（可设定）后泵流速设为0ml/min； 4 ：将排液阀逆时针旋转将排液阀逆时针旋转适度拧紧适度拧紧，关闭排液，关闭排液阀。阀。 5 ：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。气泡排尽。 衣鞠封识休七畜毖渣砒债瞧钻网洁勤沽檀戳决眠诽嘛敛嚷府耙充嘻穆咒蝇高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 三）平衡系统三）平衡系统 用检验方法规定的用检验方法规定的流动相冲洗系统流动相冲洗系统，一般最少需，一般最少需6倍柱体积倍柱体积的流动相。的流动相。 检查各管路连接处检查各管路连接处是否漏液是否漏液，如漏液应予以排除。，如漏液应予以排除。 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过不超过1MPa。如。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再检查管路后再操作。操作。 观察观察基线变化基线变化。如果冲洗至基线漂移。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声，噪声为为 2525mmol/Lmmol/L的缓冲液的缓冲液 4 4. .每天冲洗柱每天冲洗柱 5 5. .稳定进样条件稳定进样条件, ,调节流动相调节流动相 6 6. .采用保护柱采用保护柱 纯斥疗员傅输跃碗摆偏怀奇烤胆椒镑姆呜蒲菩兰晚桌命运驶纺滚温棘侯妖高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 二、二、 保留时间缩短保留时间缩短 1.流速增加流速增加 2.样品超载样品超载 3.键合相流失键合相流失 4.流动相组成变化流动相组成变化 5.温度增加温度增加 1 1. .检查泵检查泵, ,重新设定流速重新设定流速 2 2. .降低样品量降低样品量 3 3. .流动相流动相PHPH值保持在值保持在3 3 7 7. .5 5检查检查柱的方向柱的方向 4 4. .防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀 5 5. .柱恒温柱恒温 稿丰漂赶拨獭骆韦携扼卿彤纂汛干关凌确鹅黎拱腑史垄枪猾甥老唉隋饥慧高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 三、三、 保留时间延长保留时间延长 1 1. .流速下降流速下降 2 2. .硅胶柱上活性点变化硅胶柱上活性点变化 3 3. .键合相流失键合相流失 4 4. .流动相组成变化流动相组成变化 5 5. .温度降低温度降低 1 1. .管路泄漏管路泄漏, ,更换泵密封圈更换泵密封圈, ,排除泵内排除泵内气泡气泡 2 2. .用流动相改性剂用流动相改性剂, ,如加三乙胺如加三乙胺, ,或采或采用碱至钝化柱用碱至钝化柱 3 3. .流动相流动相PHPH值保持在值保持在3 37 7. .5 5检查柱的检查柱的方向方向 4 4. .防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀 5 5. .柱恒温柱恒温 鞋柒笛英吻扇秘妈宽鳃惮瘴粳躬脆恋淤颊髓缨炕痉件着趋叫靠免阀舰婚缨高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 四、出现肩峰或分叉四、出现肩峰或分叉 1 1. .样品体积过大样品体积过大 2 2. .样品溶剂过强样品溶剂过强 3 3. .柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道 4 4. .柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效 5 5. .进样器损坏进样器损坏 1 1. .用流动相配样用流动相配样, ,总的样品体积小于第一峰总的样品体积小于第一峰的的1515% % 2 2. .采用较弱的样品溶剂采用较弱的样品溶剂 3 3. .更换色谱柱更换色谱柱, ,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件 4 4. .更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢, ,加在线过滤器加在线过滤器, ,过滤样过滤样品品 5 5. .更换进样器转子更换进样器转子 稚捧忽弛赵岂吴堵碉某进颜窜口莉馅考呼漏颠焰起诬瘴札铀衡亭屈陷盘阀高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 五、五、鬼峰鬼峰 1.进样阀残余峰进样阀残余峰 2.样品中未知物样品中未知物 3.柱未平衡柱未平衡 4.三氟乙酸三氟乙酸(TFA)氧化氧化(肽谱肽谱) 5.水污染水污染(反相反相) 1 1. .每次用后用强溶剂清洗阀每次用后用强溶剂清洗阀, ,改进阀和样品改进阀和样品的清洗的清洗 2 2. .处理样品处理样品 3 3. .重新平衡柱重新平衡柱, ,用流动相作样品溶剂用流动相作样品溶剂 ( (尤其尤其是离子对色谱是离子对色谱) ) 4 4. .每天新配每天新配, ,用抗氧化剂用抗氧化剂 5 5. .通过变化平衡时间检查水质量通过变化平衡时间检查水质量，用用HPLCHPLC级的水级的水 晰峦粱预笋矩君贤条淌至锯哦晃幌的判踌端臂绸纹蒋授房蛰午橙乳沾灼筒高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 六、六、 基线噪声基线噪声 1.气泡气泡(尖锐峰尖锐峰) 2.污染污染(随机噪声随机噪声) 3.检测器灯连续噪声检测器灯连续噪声 4.电干扰电干扰(偶然噪声偶然噪声) 5.检测器中有气泡检测器中有气泡 1 1. .流动相脱气流动相脱气, ,加柱后背压加柱后背压 2 2. .清洗柱清洗柱, ,净化样品净化样品, ,用用HPLCHPLC级试剂级试剂 3 3. .更换氘灯更换氘灯 4 4. .采用稳压电源采用稳压电源, ,检查干扰的来源检查干扰的来源( (如水浴等如水浴等) ) 5 5. .流动相脱气流动相脱气, ,加柱后背压加柱后背压 厅柴轧几药粳曲酒凄键莆汝肋概酿蛇粗嗣稠滩扳线奎演烙删搓啥胶路削獭高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 七、七、峰拖尾峰拖尾 1.柱超载柱超载 2.峰干扰峰干扰 3.硅羟基作用硅羟基作用 4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效 5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道 6.死体积或柱外体积过大死体积或柱外体积过大 7.柱效下降柱效下降 1 1. .降低样品量降低样品量, ,增加柱直径采用较高容量的固定相增加柱直径采用较高容量的固定相 2 2. .清洁样品清洁样品, ,调整流动相调整流动相 3 3. .加三乙胺加三乙胺, ,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相降低流动相PHPH值值, ,钝化样品钝化样品 4 4. .更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢, ,加在线过滤器加在线过滤器, ,过滤样品过滤样品 5 5. .更换色谱柱更换色谱柱, ,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件 6 6. .连接点降至最低连接点降至最低, ,对所有连接点作合适调整对所有连接点作合适调整, ,尽可尽可能采用细内径的连接管能采用细内径的连接管 7 7. .用较低腐蚀条件用较低腐蚀条件, ,更换柱更换柱, ,采用保护柱采用保护柱 骡阿积绘肢烛他可颜铸肪瓶账邦咎括株枫诸旧辊浸虚排樱蓝皱携碘愁滞垦高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 八、八、峰展宽峰展宽 1.进样体积过大进样体积过大 2.在进样阀中造成峰扩展在进样阀中造成峰扩展 3.数据系统采样速率太慢数据系统采样速率太慢 4.检测器时间常数过大检测器时间常数过大 1 1. . 用流动相配样用流动相配样, ,总的样品体积小总的样品体积小于第一峰的于第一峰的1515% % 2 2. .进样前后排出气泡以降低扩散进样前后排出气泡以降低扩散 3 3. .设定速率应是每峰大于设定速率应是每峰大于1010点点 4 4. .设定时间常数为感兴趣第一峰半设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的宽的1010% % 腆遇吾隆吩谓终陌咱掷北捣抓乒陀妈念圾盂刹魄鼻孜纷扶粤膜掠无浙创恨高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室 八、八、峰展宽峰展宽 5.流动相粘度过高流动相粘度过高 6.检测池体积过大检测池体积过大 7.保留时间过长保留时间过长 8.柱外体积过大柱外体积过大 9.样品过载样品过载 5 5. .增加柱温增加柱温, ,采用低粘度流动相采用低粘度流动相 6 6. .用小体积池用小体积池, ,卸下热交换器卸下热交换器 7 7. .等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱洗脱 8 8. .将连接管径和连接管长度降至最小将连接管径和连接管长度降至最小 9 9. .进小浓度小体积样品进小浓度小体积样品 除袭恢换族陷典禾引诧全雇剧范索擦的件亭慧溶剧侯浚刻噎瞪饼徒嫌喀千高效液相色谱仪使用与操作规程学生用高效液相色谱仪使用与操作规程学生用