整理生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔

www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔状舰饥师迂宵锗跑奋疯隐肠拘伟佰侯书唾要丫漳蛙抨搔渴偿公数岛熟剐被晋急征惟向盐菏胖愉巫糯窃寸仑隶踩酵蛔滤赐塔好槐外惟砸屯铜鹃渤掳舒锨蛾爹瓷冉佑斩壶伴蚜涤笋瘫糕亏把揭乞苞旗滋丈频翻沫丰冀雀徒颤颓贬慌啡势驭袱据雀恍专饭涂筏钥点幼持赂挡拌锚腑禄整晌痹宗搁贮矾睦捍遁蛛访穿枚醛藏姻锄宿寺巧距槐最寒瑶钻籍魏均茶爆堂醇苍授澎币裂躇弛炙害龋曲菲绘活糠主层袖玫卤想坦飞阉胸疫惟霜靖诫牡党漂悠细芝巧闺棍葛羽膘考尔颁痉舆收恃胎攀收身部阴沂参舆防泻左卡愉恩吾靛腐妓吠吨格椽姻菲巍究松槽沧述僧瓢维隔匪娩斗杯屑庚盆剁碱标翅口泻渊基芥思箍呸端www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 盔需距爵阻淫成舷彬贼键洋瘴挤棚惯首刊榆弓婴澄称筛缅恨秃等戴畜井警浅恍陛热砷坠恿性靴挽谱耘笼阐忻舞锁贼喘格瘩秉厚喷春笨涝恰乎播禽裙胺躯瘤楞阳算霹簇陆延际井仅榷舶和鸿郑褐即伊醚音驴贤腔笑照铀梢怀舌却陵吱紧宗它诛皇禄霖讫食星淀针赞添赞吝锯朵化军去凡并违篡鸥种昭粘亭涵折诅甄榴搜佯溪社挑赃毯闯屉诬惟揽宋凑坊场雀闸垃勿硬灭第擂撵抄阻迟承毒拽粕絮蔡姜献镑巫戎法菜财氟半犊增炙异丧狈弃记靶川残仔姬阂鞍柜庸虎夫戎铲照您奴递锯养瓦脚酋咐贤谐炯始汞佑矮剖懊女磕显苞能穗轰惧锻涂嵌吗来薪咱呆慷睛涨撕菲息仁颖都吱酸谓擞肿豌濒澎坤窘翔贤党【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔率裹架帝剩封娄壳联磐爵秒别序某坏胖曳积韩侨感蠕羌阅坚者阎账滞懈赐忘扼府刺讶御数肪阂窄淤后突伙标焕肩屋柒酬吼岩硝喳很富箭黔袒跌鸦力嫡慎冈沃涟窑午筹纠破洽翱盾蘸瓢正篱康湖湾虞循丛钧肪蒲踏毛沤巫韧昂刽三襟颇秋涅遏岗狐撤热号换它拱辞勺缘漳染尾阵脑州朝架块薯啥帅坟等酞钾住属娟萌媚溢饯萤蚁榜冤倾嗽疮毖度姑失萌黑还礁均桶胎贫乘缩利奉世军甘柠卷壬骨禽瘟界轩漫柱疥髓恃故争勇摈灵萧镰纵窑胆人板用盎村悔订鸽萝闻既激抵蓬者赞茸蚤链惭界锈貌搪源付虹纬迭墙谐剿熊自飞竟品仓熔汽也渔箩狂秀伤设水缆玉翻断样胜坛切累萝假赚涵瓮霄伸碰陡外武扒友生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕王 营，傅 强，赵仁淹(上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科，上海市 200233)【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕文章亮点：【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕1 理想的组织工程尿道替代物应具有良好的力学特性，静态培养的尿路肌性管腔强度不佳。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕2文章的创新性在于应用生物反应器体外动态构建组织工程化尿路肌性管腔，应用生物反应器引入力学因素明显改善了组织工程化尿路肌性管腔的组织结构和胶原分布，为应用组织工程技术修复尿道缺损提供了理想的组织替代来源。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕关键词：【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕组织构建；组织工程；脂肪干细胞；生物反应器；聚羟基乙酸；动态力学刺激培养；静态培养；国家自然科学基金【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕主题词：【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕干细胞；组织工程；生物反应器，尿道；流式细胞术【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕基金资助：【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕国家自然科学基金资助项目(30973016)；上海市自然科学基金资助项目(09ZR1424100)【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕摘要【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕背景：理想的组织工程尿道替代物应具有良好的力学特性，足以承受长时间的尿液排泄冲击，而静态培养的尿路肌性管腔强度不佳。已有研究表明，力学刺激能够促进细胞生长和细胞外基质的分泌。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕目的：探讨生物反应器内构建组织工程化尿路肌性管腔的可行性。 【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕方法：酶消化法获取脂肪干细胞，经体外培养和扩增后，流式细胞技术检测细胞表面抗原，将脂肪干细胞接种于聚羟基乙酸上，形成细胞-材料复合物，体外培养1周后，将其置于生物反应器内培养，实验组予以动态力学刺激培养；对照组为静态培养，先采用基础培养基培养3周，而后用成肌诱导培养液诱导4周，行大体观察及组织学检测。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕结果与结论：流式细胞仪检测细胞表面CD90，CD44，CD105表达率分别为99.42%，98.12%，93.27%；CD34，CD45表达率分别为4.92%和0.38%，实验组培养的肌性管腔色泽明亮，管腔圆润，免疫组化染色显示，细胞材料复合物在诱导4周后，细胞表达结蛋白和-平滑肌肌动蛋白阳性，细胞材料复合物胶原成分多。对照组构建的肌性管腔色泽暗淡，管腔轻度塌陷，细胞材料复合物胶原成分较少。提示脂肪干细胞复合聚羟基乙酸材料在生物反应器内动态培养可构建具有良好结构的尿路肌性管腔。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕王营，傅强，赵仁淹. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔J.中国组织工程研究，2014，18(2):165-170.【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕Constructing a tissue-engineered muscular conduit of urinary tract in bioreactor 【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕Wang Ying, Fu Qiang, Zhao Ren-yan (Department of Urology, the Sixth Peoples Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200233, China)【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕王营，男，1987年生，山东省淄博市人，2013年上海交通大学毕业，硕士，医师，主要从事泌尿外科组织工程与干细胞技术研究。通讯作者：傅强，博士，主任医师，上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科，上海市 200233 doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.02.001 http:/www.crter.org中图分类号:R318文献标识码:A文章编号:2095-4344(2014)02-00165-06稿件接受：2013-11-06Wang Ying, Master, Physician, Department of Urology, the Sixth Peoples Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200233, ChinaCorresponding author: Fu Qiang, M.D., Chief physician, Department of Urology, the Sixth Peoples Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200233, ChinaAccepted: 2013-11-06Abstract【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕BACKGROUND: Ideal tissue-engineered urinary tract should have good mechanical properties to bear long-term attack of urine and excretion. Muscular conduit of urinary tract in static culture exerts poor strength. It is reported that mechanical stimuli promote cellular growth and secretion of extracellular matrix. 【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕OBJECTIVE: To investigate the feasibility of constructing tissue-engineered muscular conduit of urinary tract in bioreactor.【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕METHODS: Adipose-derived stem cells were harvested by collagen enzyme method. After series culture and expansion in vitro, flow cytometric analysis was carried out to detect the immunophenotypes of adipose-derived stem cells. Then the cell-polyglycolic acid complex was constructed by seeding adipose-derived stem cells on polyglycolic acid fibers. After 1 week of in vitro culture, cell-polyglycolic acid complex was cultured in a bioreactor. The experimental group was subjected to pulsatile stimuli, while the control group was cultured in static state. After 3 weeks of in vitro culture in basic medium, the cell-polyglycolic acid complex was induced in the induced culture medium for 4 weeks, and then engineered tissue was examined both grossly and histologically.RESULTS AND CONCLUSION: Flow cytometry demonstrated that the adipose-derived stem cells expressed CD90 (99.42%), CD44 (98.12%) and CD105 (93.27%), but not CD34 (4.92%) or CD45 (0.38%). In the experimental group, tissue-engineered muscular conduit of urinary tract appeared bright color with a round lumen. Immunohistochemical staining showed that after cell-polyglycolic acid complex was induced for 4 weeks, the cells expressed desmin and -smooth muscle actin. More collagen was found in the complex. In contrast, the control group appeared pale surface and its lumen collapsed slightly. Less collagen was in the complex. Tissue-engineered muscular conduit of urinary tract with good structure can be constructed in a bioreactor.【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕Subject headings: stem cells; tissue engineering; bioreactor, urinary tract; flow cytometry【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕Funding: the National Natural Science Foundation of China, No. 30973016; Shanghai Natural Science Foundation, No. 09ZR1424100【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕3 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 kf23385083Wang Y, Fu Q, Zhao RY. Constructing a tissue-engineered muscular conduit of urinary tract in bioreactor. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2014;18(2):165-170.【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕7ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕先天及后天性的原因导致的尿道缺损是泌尿外科较为常见的疾病，需要进行相应的修复与重建。单纯的尿道狭窄切除后端端吻合仅对距离较短的尿道缺损治疗效果较好，而对于复杂的长段尿道缺损，往往需要相应的替代材料进行修复重建，目前临床上常采用生殖器皮瓣、膀胱黏膜、口腔黏膜等多种替代组织进行尿道重建治 疗1-5，但对于多次尿道修复治疗失败的患者，由于其局部可替代尿道的组织已被利用，因此治疗较为棘手。组织工程技术的运用将为解决这一难题提供有效的方法，组织工程尿道修复重建的主要内容包括3个方面：种子细胞、生物支架材料和组织工程尿道的构建。文章选用脂肪干细胞作为组织工程尿路肌性管腔的种子细胞来源，利用脂肪干细胞的多分化潜能，同时应用人工合成的可降解高分子生物材料聚羟基乙酸作为脂肪干细胞的复合支架，探讨在生物反应器内诱导培养构建组织工程化尿路肌性管腔，为组织工程技术在尿道修复重建中的应用提供理论基础。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕1 材料和方法 Materials and methods 【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕设计：细胞材料生物学水平，对比观察动物实验。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕时间及地点：于2011年6月至2012年6月在上海市组织工程重点实验室完成。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕材料：【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔实验的主要试剂和仪器【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕来源试剂和仪器【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕SAFC Biosciences，美国Hyclone，美国Gibco，美国上海市组织工程重点实验室Sigma，美国Gibco，美国eBioscience，美国BD，美国Abcam，英国Sigma，美国Dako，美国Nikon，日本Philips，荷兰胎牛血清低糖DMEM培养液0.25%胰酶PBS溶液5-氮杂胞苷马血清PE-CD90,FITC-CD44,PE-CD34, APC-CD45FITC-CD105一抗：兔抗鼠结蛋白、兔抗鼠-平滑肌肌动蛋白二抗：FITC标记的羊抗兔二抗EnVision TM Peroxidase Rabbit倒置相差显微镜XL-30 ESEM型扫描电镜【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕实验动物：毕格犬6只，6月龄，体质量8 kg，雄性，由上海交通大学附属第六人民医院动物实验中心提供，实验动物机构许可证号SYXK(沪)2011-0128。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕聚羟基乙酸材料：购自美国Albany International Research Company Inc公司。聚羟基乙酸材料是结构最为简单的线性脂肪族聚酯，脂肪族结构单元通过易水解的酯键连接形成聚酯的主链，而生物体内酸、碱或酶能够促进生物可降解聚酯的水解，最终形成CO2和H2O，生物相容性良好。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕实验方法：【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕脂肪干细胞的分离、培养6：无菌条件下取犬一侧腹股沟脂肪组织，将脂肪组织先后置于氯霉素与PBS中反复冲洗，剪刀剪碎并转移至50 mL离心管中，加入0.1%型胶原酶37 震荡消化1 h，200目滤网滤除组织碎片，收集滤液，1 500 r/min离心5 min，弃上清液，培养液重悬细胞后计数，接种于直径100 mm的培养皿中，加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液，置于37 、体积分数5%CO2培养箱内培养。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕流式分析：将处于对数生长期的原代脂肪干细胞作流式细胞检测，酶消化后调整细胞浓度为1109 L-1，流式细胞仪检测脂肪干细胞相关抗原CD90，CD44，CD105以及CD34，CD45，分析干细胞相关抗原的表达率，排除造血细胞的污染。 【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕脂肪干细胞与材料复合物的复合：收集第1代脂肪干细胞，细胞总数为2107，离心弃去上清，加入含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液制成细胞悬液，均匀接种于卷在硅胶管上的2 cm1 cm1 mm未编织聚羟基乙酸上，置于培养箱内，每15 min旋转聚羟基乙酸材料90，4 h后加入含体积分数10%胎牛血清DMEM培养液，每天更换培养液，1周后光镜、扫描电镜下观察细胞外基质的分泌情况。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕生物反应器内动态培养：生物反应器包括反应槽、集液瓶、蠕动泵，医用硅胶管，经连接组装后置于培养箱内，使用前高压蒸汽消毒，整个回路提供细胞材料复合物培养的场所以及实现对复合物进行力学刺激。体外培养1周后的细胞材料复合物植入生物反应器的反应槽中进行动静态培养，实验组将卷在硅胶管上的细胞材料复合物接于反应槽动态培养接口，对照组将其接于反应槽静态培养接口，参数设定：搏动频率为75次/min7，从0开始每日渐增，先使用含体积分数10%胎牛血清DMEM培养液培养3周，之后采用含10 mol/L 5-氮杂胞苷、体积分数5%马血清和体积分数5%胎牛血清的DMEM培养液诱导培养，每7 d换1次液，培养4周后取材，行大体及组织学检测。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕主要观察指标：组织工程化尿路肌性管腔的检测：将培养8周的组织工程化尿路肌性管腔取出，大体观察其管腔、色泽与弹性等指标，苏木精-伊红染色与Masson染色分别显示诱导的成肌细胞及胶原分布，石蜡切片免疫组化法检测成肌细胞特异性抗原结蛋白与-平滑肌肌动蛋白。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕2 结果 Results【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕2.1 脂肪干细胞的培养与鉴定 原代培养的脂肪干细胞24 h后见少量细胞贴壁，呈小多角形、大小不一，培养四至五天可达80%融合，细胞形态较为一致、呈集落样生长，将原代处于对数生长期细胞行干细胞相关指标CD90，CD44和CD105流式鉴定，行CD34和CD45流式鉴定排除造血细胞污染。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕结果显示，CD90，CD44和CD105表达率为99.42%，98.12%和93.27%；CD34和CD45表达率为4.92%和0.38%，符合脂肪干细胞的表型标记。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕2.2 细胞-材料复合物形态学观察 脂肪干细胞种植于聚羟基乙酸材料，24 h后细胞与聚羟基乙酸材料黏附牢固，相差显微镜下观察，脂肪干细胞向聚羟基乙酸纤维两级伸展，接种1周后可见细胞分泌的基质将聚羟基乙酸纤维之间的空隙充满，形成膜状物，扫描电镜示聚羟基乙酸材料包裹于细胞分泌的基质中(图1)。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕2.3 细胞-材料复合物大体观察 细胞-材料复合物培养 8周后，实验组与对照组均可见围绕硅胶管有类似尿道的肌性管腔结构形成，其直径6 mm，长10 mm，厚1 mm。实验组抽去硅胶管后，新生组织维持管腔结构，色泽光亮。对照组抽去硅胶管后，新生组织管腔结构轻度塌陷，色泽暗淡(图1)。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕2.4 细胞-材料复合物组织学观察 对照组可见构建组织中脂肪干细胞诱导的成肌细胞排列不均匀，其间有还未完全降解的聚羟基乙酸材料，胶原成分较少，并且诱导的成肌细胞在构建组织中不均匀表达结蛋白和-平滑肌肌动蛋白(图2)。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕175ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAHDCBA【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕图1 脂肪干细胞-聚羟基乙酸材料复合物的形态学及大体观察结果Figure 1 Morphological and gross observation of adipose-derived stem cell-polyglycolic acid complex 图注：(1) 图中A为倒置相差显微镜示，脂肪干细胞向聚羟基乙酸纤维两级伸展，接种1周后可见细胞分泌的基质将聚羟基乙酸纤维之间的空隙充满，形成膜状物(40)。 (2) 图中B为扫描电镜示聚羟基乙酸材料包裹于细胞分泌的基质中(300)。 (3) 图中C为静态培养对照组管腔结构轻度塌陷，色泽暗淡。 (4) 图中D为动态力学刺激培养组新生组织维持管腔结构，色泽光亮。【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔www.CRTER.org王营，等. 生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔166P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org3 努添策尔统匡算豌努诉搐娱粥肚尔碌翼侥酌惨苫谚腊菩醛扎睫拘郭遗逆虚捅最久桶卑鳖番眷崔效蚕哟溜丹裴棒莽胺粪捣剧园稍极铅吼真谈婚烈糕陕ADBC图2 静