南医大药物分析第07章-苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析

苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析第七章第七章结构与性质结构与性质1鉴别试验鉴别试验2特殊杂质检查特殊杂质检查3 含量测定含量测定4本章内容本章内容第一节、结构与性质第一节、结构与性质一、典型药物和结构特点一、典型药物和结构特点HCOHCHNHR2.HXR1R3R1:RR2: -H; -CH3; -CH(CH3)2; -C(CH3)3; ; R3: -H; -CH3OHOH儿茶酚胺类儿茶酚胺类HX: HCl; H2SO4; 重酒石酸重酒石酸OHCNHCNH2NHNH*常见苯乙胺类典型药物：常见苯乙胺类典型药物：肾上腺素肾上腺素盐酸多巴胺盐酸多巴胺CHOHOHOHCH2NHCH3CHOHOHOHCH2NH2.HCl二、理化性质二、理化性质1、酚羟基特性、酚羟基特性 本类药物的一些药物分子具有邻苯二酚（或酚羟基）结构本类药物的一些药物分子具有邻苯二酚（或酚羟基）结构 ： 、与重金属配位呈色、与重金属配位呈色 、露置空气，遇光、热、碱易氧化，色泽变深。、露置空气，遇光、热、碱易氧化，色泽变深。2、弱碱、弱碱性性 具有脂烃氨基侧链，氮为仲氨氮，显弱碱性。游离碱难溶于水，盐具有脂烃氨基侧链，氮为仲氨氮，显弱碱性。游离碱难溶于水，盐可溶于水。可溶于水。HCOHCHNHR2.HXR1R33、旋光性、旋光性 大多数具有手性碳，具有旋光性。大多数具有手性碳，具有旋光性。*具有苯环特征吸收带具有苯环特征吸收带 （max=254nmmax=254nm）。）。4、紫外吸收特性、紫外吸收特性第二节、鉴别试验第二节、鉴别试验紫红色紫色绿色配合物氧化碱 FeClOHAr3OHR一、与铁盐的反应一、与铁盐的反应二、与甲醛二、与甲醛-硫酸反应硫酸反应具有酚羟基的药物，与硫酸具有酚羟基的药物，与硫酸-甲醛反应，生成相应的醌式结构。甲醛反应，生成相应的醌式结构。与三氯化铁反应、与甲醛硫酸反应与三氯化铁反应、与甲醛硫酸反应药物药物三氯化铁三氯化铁甲醛硫酸甲醛硫酸肾上腺素肾上腺素Adrenaline0.1mol/L盐酸液中显翠绿色，盐酸液中显翠绿色，加氨试液显紫色，紫红色加氨试液显紫色，紫红色红色红色重酒石酸去甲肾上腺素重酒石酸去甲肾上腺素Noradrenaline bitartrate翠绿色，加碳酸氢钠试液翠绿色，加碳酸氢钠试液显蓝色，红色显蓝色，红色淡红色淡红色盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素Phenylephrine hydrochloride紫色紫色玫瑰红玫瑰红橙红橙红深棕深棕红红盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素Isoprenaline hydrochloride深绿色，滴加新制深绿色，滴加新制5%碳酸碳酸氢钠液，显蓝紫色，红色氢钠液，显蓝紫色，红色棕色棕色暗紫色暗紫色盐酸多巴胺盐酸多巴胺Dopamine hydrochloride墨绿色，滴加墨绿色，滴加1%氨溶液，氨溶液，显紫红色显紫红色酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色肾上腺素肾上腺素碘或过氧化氢碘或过氧化氢中性或酸性中性或酸性肾上腺素红肾上腺素红放置放置棕红色多聚体棕红色多聚体盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素偏酸性条件偏酸性条件碘碘异丙肾上腺素红异丙肾上腺素红硫代硫酸钠硫代硫酸钠重酒石酸重酒石酸去甲肾上腺素去甲肾上腺素酒石酸氢钾饱和液酒石酸氢钾饱和液pH 3.56碘试液碘试液放置放置5min硫代硫酸钠硫代硫酸钠溶液为无色或仅显溶液为无色或仅显微红色或淡紫色微红色或淡紫色淡红色溶液淡红色溶液三、还原性反应三、还原性反应四、氨基醇的双缩脲反应四、氨基醇的双缩脲反应盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱芳环侧链有氨基醇芳环侧链有氨基醇- -双缩脲反应双缩脲反应双缩脲试剂双缩脲试剂：0.1 g/ml NaOH 试剂试剂A ,0.01g/mLCuSO4试剂试剂B检测蛋白质等物质的特异性反应，与双缩脲检测蛋白质等物质的特异性反应，与双缩脲试剂作用试剂作用, 产生紫色反应产生紫色反应.ChP(2010): 鉴别麻黄碱和盐酸去氧肾上腺素鉴别麻黄碱和盐酸去氧肾上腺素盐酸麻黄碱NaOH +CuSO4紫色乙醚水层蓝色乙醚层紫红色盐酸去氧肾上腺素NaOH +CuSO4紫色乙醚乙醚层不显色水层紫色五、脂肪伯胺的五、脂肪伯胺的Rimini反应反应重酒石酸间羟胺重酒石酸间羟胺H2O溶解溶解亚硝基铁氰化钾亚硝基铁氰化钾丙酮丙酮（无甲醛）（无甲醛）碳酸氢钠碳酸氢钠紫红色紫红色六、吸收光谱特征六、吸收光谱特征（1）、）、紫外紫外药物药物溶剂溶剂浓度浓度(mg/ml)nm (nm)吸收度吸收度 (A)重酒石酸间羟胺重酒石酸间羟胺水水0.10272盐酸异丙肾上腺素盐酸异丙肾上腺素水水0.052800.50盐酸多巴胺盐酸多巴胺0.5%硫酸硫酸0.03280盐酸芬氟拉明盐酸芬氟拉明0.1mol/L盐酸盐酸0.25263, 270盐酸苯乙双胍盐酸苯乙双胍水水0.012340.60盐酸克伦特罗盐酸克伦特罗0.1mol/L盐酸盐酸0.03243, 296硫酸沙丁胺醇硫酸沙丁胺醇水水0.08274盐酸伪麻黄碱盐酸伪麻黄碱水水0.50251, 257, 263（2）、红外）、红外盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素第三节、特殊杂质检查第三节、特殊杂质检查生产工艺：酮体氢化还原制得，生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。若氢化不完全则引入酮体杂质。一、酮体杂质的检查（一、酮体杂质的检查（UV）310nm处杂质有吸收，样品无吸收处杂质有吸收，样品无吸收 药物 检查的 杂质 溶剂样品浓度(mg/ml)测定波长(nm) A肾上腺素 酮体 HCl(92000) 2.0 3100.05盐酸去氧肾上腺素 酮体 水 2.0 310 0.20重酒石酸去甲肾上腺素 酮体 水 2.0 310 0.05盐酸异丙肾上腺素 酮体 水 2.0 310 0.15盐酸甲氧明 酮胺 水 1.5 347 0.06苯乙胺类药物酮体杂质的检查（苯乙胺类药物酮体杂质的检查（UV）二、光学纯度的检查二、光学纯度的检查肾上腺素肾上腺素对于手性药物光学纯度检查的最佳方法是对于手性药物光学纯度检查的最佳方法是实现对映体分离分析实现对映体分离分析色谱法色谱法电泳法电泳法三、有关物质检查三、有关物质检查TLC法：法：检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每醇稀释成每1ml中含中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各上述两种溶液各10l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G薄层板上，以薄层板上，以异丙醇氯仿浓氨溶液异丙醇氯仿浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。例：盐酸去氧肾上腺素例：盐酸去氧肾上腺素纸色谱法：纸色谱法：例：盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查例：盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查取本品取本品1.00g ，置，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法（附录谱法（附录 A）试验，精密吸取上述溶液）试验，精密吸取上述溶液0.2ml ，分别点于两张色谱滤，分别点于两张色谱滤纸条纸条(7.5cm 50cm) 上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为均为0.5 1cm ；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯乙醇水酯乙醇水(6:3:1) 为展开剂，展开至前沿距下端约为展开剂，展开至前沿距下端约7cm 处，取出，晾干，处，取出，晾干，用显色剂（取用显色剂（取10铁氰化钾溶液铁氰化钾溶液1ml ，加，加10 亚硝基铁氰化钠溶液与亚硝基铁氰化钠溶液与10氢氧化钠溶液各氢氧化钠溶液各1ml ，摇匀，放置，摇匀，放置15min，加水，加水10ml与丙酮与丙酮 12ml，混匀），混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为值约为0.1 ），参照此色谱），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm ，并分，并分剪成碎条，精剪成碎条，精 密吸取甲醇各密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录分别进行萃取后，照分光光度法（附录 A），在），在232nm 的波长处测定吸收度，不得过的波长处测定吸收度，不得过0.48。 色谱柱：色谱柱：C18流动相流动相: 硫酸四甲基铵溶液硫酸四甲基铵溶液 ：甲醇（：甲醇（95 ：5）检测波长检测波长: 205 nm 供试品溶液：供试品溶液：1mg/ml对照品溶液：对照品溶液：2m mg/mlHPLC法法例：肾上腺素例：肾上腺素对照品对照品溶剂峰溶剂峰样品峰样品峰供试品供试品单个杂质不得大于对照溶液单个杂质不得大于对照溶液主峰面积（主峰面积（0.2%），各杂质），各杂质峰面积和不大于主峰面积的峰面积和不大于主峰面积的2.5倍（倍（0.5%） 原原 料药：非水溶液滴定法料药：非水溶液滴定法 溴量法溴量法 亚硝酸钠法亚硝酸钠法 制制 剂：剂：比色法比色法提取容量法提取容量法紫外分光光度法紫外分光光度法高效液相色谱法高效液相色谱法第四节、含量测定第四节、含量测定 脂烃胺基侧链，显弱碱性脂烃胺基侧链，显弱碱性 ，在水溶液中用酸直接滴定，在水溶液中用酸直接滴定没有明显突跃；在非水酸性溶剂中，相对碱强度显著增强。没有明显突跃；在非水酸性溶剂中，相对碱强度显著增强。当当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须酸性较强时，反应不能定量完成，必须除去或降低除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。的酸性，使反应顺利地完成。BH+ A-+HClO4BH+ ClO4+HA游离碱类盐游离碱类盐被置换出的弱酸被置换出的弱酸因此，要根据不同情况采用相应测定条件。因此，要根据不同情况采用相应测定条件。供供试试品品+冰冰醋醋酸酸10ml30ml若供试品为氢卤酸盐再加若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液醋酸汞的冰醋酸液3ml5ml结结果果高氯酸滴定液滴定高氯酸滴定液滴定以空白以空白试验校试验校正正指示剂：结晶紫，或电位法确定终点指示剂：结晶紫，或电位法确定终点222 .2 .B HXHgAcB HAcHgX 结晶紫：结晶紫：0.5的冰醋酸溶液；酸式色为黄色，碱的冰醋酸溶液；酸式色为黄色，碱式色为紫色式色为紫色 在滴定不同强度的碱时，终点颜色变化不同。滴定较强的碱时，在滴定不同强度的碱时，终点颜色变化不同。滴定较强的碱时，蓝色为终点；滴定较弱的碱时，蓝绿色或绿色为终点；滴定极弱碱蓝色为终点；滴定较弱的碱时，蓝绿色或绿色为终点；滴定极弱碱（如咖啡因）时，黄色为终点。为确定终点的颜色，事先常辅以电（如咖啡因）时，黄色为终点。为确定终点的颜色，事先常辅以电位滴定加以判定。位滴定加以判定。 pH减小减小例：盐酸沙丁胺醇的含量例：盐酸沙丁胺醇的含量测定测定 取本品约取本品约0.4g，精密称定，加，精密称定，加冰醋酸冰醋酸10mL ，微温使溶解，放，微温使溶解，放冷，加醋酐冷，加醋酐15mL 与结晶紫与结晶紫1滴，滴，用用高氯酸高氯酸滴定液（滴定液（0.1mol/L）滴）滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定结定至溶液显蓝绿色，并将滴定结果用空白试验校正。果用空白试验校正。中国药典中国药典2010（1）、有机弱碱）、有机弱碱可直接用高氯酸滴定的有机弱可直接用高氯酸滴定的有机弱碱有：胺类、氨基酸类、含氮碱有：胺类、氨基酸类、含氮杂环、有机碱盐、弱酸盐杂环、有机碱盐、弱酸盐应用示例：应用示例：样品在不同比例酸酐样品在不同比例酸酐-冰冰醋酸中的滴定曲线醋酸中的滴定曲线232(3)CH COOCH COOH酸性酸性2、溴量法、溴量法 盐酸去氧肾上腺素及其注盐酸去氧肾上腺素及其注射液、重酒石酸间羟胺射液、重酒石酸间羟胺 反应摩尔比为反应摩尔比为1 3HOCH CH2NHCH3OHBr2+3BrBrHOBrCH CH2NHCH3OH+3HBrBr22KI2KBrI2I22Na2S2O32NaINa2S4O6203.7 0.0533.393/AaTmMbmg ml0100%sT VVFm（）百分含量3、亚硝酸钠法、亚硝酸钠法适用于：具有芳伯胺结构的药物适用于：具有芳伯胺结构的药物4、紫外分光光度法、紫外分光光度法UV法法:盐酸甲氧明注射液盐酸甲氧明注射液,重酒石酸间羟胺注射液重酒石酸间羟胺注射液注意：注意：由于偶合剂（由于偶合剂（N-(1-萘基萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。比色法：盐酸克仑特罗栓，盐酸异丙肾上腺素气雾剂比色法：盐酸克仑特罗栓，盐酸异丙肾上腺素气雾剂ClClN2+Cl-CH(OH)CH2NH(CH3)3+NHCH2CH2NH2ClClNCH(OH)CH2NH(CH3)3NNHCH2CH2NH22HNO2+2H2NSO3NH42N2+(NH4)2SO4+H2SO4+H2O芳伯胺重氮化芳伯胺重氮化-偶合反应偶合反应盐酸多巴胺测定盐酸多巴胺测定: :显色剂显色剂: : 硫酸亚铁硫酸亚铁- -酒石酸盐测定波长酒石酸盐测定波长: : 520 nm520 nm分子结构中的酚羟基可与分子结构中的酚羟基可与FeFe2+2+配位显色配位显色5、高效液相色谱法、高效液相色谱法盐酸肾上腺素注射液、重酒石酸去甲肾上腺素注射液、硫酸沙盐酸肾上腺素注射液、重酒石酸去甲肾上腺素注射液、硫酸沙丁醇片、缓释片、盐酸氨溴口服、片剂、胶囊、缓释胶囊等丁醇片、缓释片、盐酸氨溴口服、片剂、胶囊、缓释胶囊等色谱条件色谱条件: C18流动相流动相: 甲醇甲醇-NaH2PO4 (pH 3.10)(15:85)检测波长检测波长: 276nm定量方法：外标法定量方法：外标法【硫酸沙丁醇片测定硫酸沙丁醇片测定】例1. 能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为（）A. 浓硫酸B. 甲醛试液C. 氨试液D. 甲醛硫酸试液E. 茚三酮试液 例2. 盐酸异丙肾上腺素的检查项目是（）A. 有关物质B. 二苯酮C. 盐酸D. 醛E. 酮体