多聚酶链式反应扩增DNA片段 ppt

l 通 过 本 实 验 学 习 PCR反 应 的 基 本 原 理 与实 验 技 术 。 l 聚 合 酶 链 式 反 应 (polymerase chain reaction,PCR)， 是 一 种 在 体 外 快 速 扩 增特 定 基 因 或 DNA序 列 的 方 法 ， 故 又 称 为基 因 的 体 外 扩 增 法 。l 在 待 扩 增 的 DNA片 断 两 侧 和 与 其 两 侧 互 补的 两 个 寡 核 苷 酸 引 物 ， 经 变 性 、 退 火 和延 伸 若 干 个 循 环 后 ， DNA扩 增 2n倍 。 l 1.变 性 ： 在 加 热 或 碱 性 条 件 下 可 使 DNA双 螺 旋的 氢 键 断 裂 ， 形 成 单 链 DNA， 称 之 为 变 性 。l 2.退 火 ： 是 模 板 与 引 物 的 复 性 。 引 物 是 与 模 板某 区 序 列 互 补 的 一 小 段 DNA片 段 。l 3.延 伸 ： 从 结 合 在 特 定 DNA模 板 上 的 引 物 为 出发 点 ， 将 四 种 脱 氧 核 苷 酸 以 碱 基 配 对 形 式 按5 3 的 方 向 沿 着 模 板 顺 序 合 成 新 的 DNA链 。 Parameter ConcentrationTemplate pHdNTPsG elatin PrimersMg2+ oncentrationEnzyme Total volume 10 attomoles(1 106 molecules)8.4（ 10mM Tris-Hcl）200 M(each one) 100 g/ml (optional)0.5 M(each one);(0.11.0 M)0.5mM 10mM 1 unit25100 l 电 泳 仪 PCR仪 移 液 器 l 1、 DNA模 板l 2、 4种 dNTPl 3、 引 物 1、 引 物 2l 4、 Taq酶l 5、 琼 脂 糖l 6、 DNA相 对 分 子 质 量 标 准 物l 7、 吸 头 、 50ul PCR管 l 10 PCR缓 冲 液 (含 Mg2 )l 4 dNTP (每 种 1mmol)l Tag酶 1U/ull DNA模 板l 引 物 1: 5- G G G G AATTCATG G TG AG CAAG G G C-3l 引 物 2: 5-GACCTG CAG G CATG CAAG CTTG G C-3 l 引 物 溶 液 浓 度 10pmol/ul l 1在 0.5ml RCR管 内 配 置 20ul反 应 体 系 ： CK(ul) 1#(ul)模 板 0 1引 物 1 0.4 0.4引 物 2 0.4 0.410 PCR Buffer 2 2Taq酶 0.5 0.5dNTPs 0.4 0.4ddH 2O 14.3 15.3Total 20 20 实 验 报 告l 要 求 ：l 1、 写 出 本 实 验 目 的 、 原 理 ；l 2、 实 验 器 材 及 实 验 步 骤 ；l 3、 列 出 实 验 结 果 示 意 图 并 分 析 原 因 。 PCR结 果 。 1、 对 照 (无 模 板 )； 2 6、PCR产 物 （ 5ul样 品 ）