氨基乙酰丙酸在祛痘美容方面的应用2

,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,5-,氨基乙酰丙酸,(5-aminolevulinic acid,，简称,ALA),，是具有多种生物功能的生物活性剂，在医药上它属第二代光敏剂，可治疗多种不同病因的疾病；在农牧业上它有多种不同的用处，它的应用范围越来越多,倍受人们的重视。现作如下介绍,:,ALA,在医药上用作光敏剂，通过光动力疗法（,PDT,）来治疗多种不同病因的疾病。光动力疗法,(Photodynamic Therapy,，,PDT),是人们在医疗实践中发现的一种新的治疗方法，它是通过某些光敏物质,-,通称光敏剂,在进入机体后，光敏剂在生长旺盛、分裂速度快的异常组织细胞及某些病菌内的聚积浓度远大于正常组织细胞，具有明显的靶向性。当用一定波长的光进行照射时，光敏剂会在生物组织内发生光化学反应，产生具有细胞毒性的单态氧和其他自由基，从而引起细胞膜、细胞核和线粒体的损伤，使细胞坏死、凋亡，而达到治疗疾病的目的。,这种治疗方法有两大特点,:,一是在正确的使用方法下,能把病变细胞和致病菌杀死，而正常组织细胞几乎不受损伤,对皮肤和粘膜部位的疾病在治愈后不留下疤痕；它的另一特点是同一个药物能治疗多种不同病因的疾病,如,5,氨基乙酰丙酸，外用它能够治疗多种皮肤癌、痤疮、扁平疣、鲜红斑痣、银屑病、尖锐湿疣、老年性黄斑变性、痔疮、膀胱癌、子宫内膜移位、宫颈糜烂、口腔粘膜疣状增生及某些难以治疗的皮肤病毒感染等；在美容方面可用于光子嫩肤、光子美白和祛皱祛斑；口服可治疗乳腺癌、上消化道癌、直肠癌、脑胶质瘤、类风湿性关节炎以及防止血管形成术后的再度狭窄。,一,.ALA,生物功能及特性,:ALA,是一个具有多种生物活性功能的物质，它在人、植物、动物和微生物等多种生物体的生命活动中所不可缺少的物质。,ALA,在上述生物体内所起的作用，可以通过下图来表达：,在正常情况下，,ALA,是由生物体自行合成的一个体内固有的物质，在人及动物体内是由甘氨酸、琥珀酸和辅酶,A,在,ALA,合成酶的促使下而合成的。在一系列酶促反应下，,ALA,代谢途径是：,ALA,胆色素原尿卟啉原,（六氢尿卟啉）粪卟啉原原卟啉原,原卟啉,血红素。在植物体内，沿下述路线运行：谷氨酸,ALA,尿卟啉原原卟啉,叶绿素。,血红素和叶绿素分别是动植物生命活动的重要物质，都是由,ALA,来合成的，可见,ALA,对生命体的重大意义。在生物合成血红素和叶绿素的过程中，都必需先经过合成原卟啉,IX,，这是一个光敏物质。在某些微生物（细菌）内除生成原卟啉,IX,外，还生成尿卟啉、粪卟啉，也是属卟啉类的光敏物质。,在正常情况下,生物体靠自身的反馈机制,自身合成,ALA,的速度,(,即第一限速反应,),跟原卟啉,生成血红素,(,或叶绿素,),的速度,(,即第二限速反应,),是一致的,不会有多余的原卟啉,有光照也不会产生光化学反应。当有外源性的,ALA,给入时，第一限速反应被冲破，外界拥进来的大量的,ALA,会很快变为原卟啉,，在细菌内除原卟啉,外还会产生尿卟啉、粪卟啉等，这时如有适当波长的光照射时，这些光敏物质就会在生物体内发生光化学反应，释放出单生态的氧和一些自由基等细胞毒性物质,而使细胞坏死，凋亡。,利用,ALA,在生物体内的上述代谢特性，给于生物体,(,包括人、动物、植物和微生物,),不同剂量的外源性,ALA,，生物体会产生不同的效果,:,适当的低剂量可促进细胞的代谢功能、增强生物细胞的活力；高剂量并有一定波长的光能激发时,就会杀死生物细胞。这是,ALA,有着广泛用途的主要因素。,二,ALA-PDT,治疗痤疮的作用机理,:,1,痤疮的病因及目前常规的治疗方法,:,痤疮的病因主要有以下三个方面：,（,1,）,皮脂腺功能亢进。皮脂腺的发育和分泌受雄激素的支配，青春期时雄激素分泌旺盛使皮脂腺增大，引起皮脂分泌增多。另外，饮食不当也可促进皮脂腺异常分泌。,（,2,）,毛囊皮脂腺导管角化过度，皮脂分泌排泄不畅。痤疮患者的毛囊上角化异常，上皮细胞不能正常脱落，使毛囊口变小，皮脂堵塞在毛囊内，淤积在毛囊口，形成粉刺。,（,3,）微生物的异常生长。皮脂分泌旺盛，如果排泄不通畅，造就了病菌生长繁殖环境，滋生丙酸杆菌属痤疮菌（以下简称痤疮杆菌）、葡萄球菌、毛囊虫（俗称,“,螨虫,”,）等痤疮的病原微生物。毛囊内的微生物及其代谢产物都可引起炎症反应，导致红肿化脓等现象。,针对痤疮的病因，常规的治疗方法是：,（,1,）内服或外用抗生素以杀灭致病菌：如四环素、美满霉素、强力霉素、红霉素等，因痤疮杆菌对抗生素产生耐药性，其治疗效果越来越不令人满意。,（,2,）异维,A,酸（,isotretinoin,）：异维,A,酸对皮脂腺的分泌和痤疮杆菌有较强的抑制作用。但服药后可出现口唇干燥、皮肤脱屑、脱发、血脂升高等副反应。本药有致畸作用，不适于育龄期,（,3,）皮质类固醇激素：如曲安西龙混悬液、泼尼龙男女服用。混悬液，也可用长效皮质激素制剂。激素类药物虽然有很强的抑制炎症反应的作用，但副作用亦较多。,（,4,）内分泌疗法：皮脂腺的发育受雄激素支配，因此具有拮抗雄性激素作用的药物对痤疮具有治疗作用。但该疗法可引起内分泌的紊乱，因此一般不主张使用。,（,5,）物理治疗：液氮冷冻喷雾法或点涂，适用于结节性或囊肿性痤疮，但易留下疤痕。,（,6,）中医治疗：中医称本病为,“,肺风粉刺,”,，治则宜宣肺清热，可内服枇杷清肺饮（党参、枇杷叶、黄连、桑白皮、黄柏、甘草），外用颠倒散（大黄、硫磺），但作用缓慢，效果不理想。,2,ALA,PDT,法治疗痤疮的作用机理,国内外学者对,ALA,PDT,法治疗寻常痤疮的作用机理进行了系统深入的研究，针对寻常痤疮的发病原因，本疗法通过抑制皮脂腺过度分泌、抑制毛囊口上皮角化亢进、打通堵塞的毛囊孔和杀死毛囊内的致病菌等而取得显著的疗效。现综述如下：,（,1,）,ALA,PDT,对毛囊皮脂腺分泌有明显的抑制作用,另据,Mee Sook Jun,等人报道，,ALA,在人的离体毛囊皮脂腺单位中引起的原卟啉,IX,主要表达在皮脂细胞内。从头皮移植术病人取得有毛的头皮部位样本，显微解剖后将所有细胞培养，各种细胞的,PpIX,含量按每,g,细胞蛋白质中含,PpIX,的量进行计算，用分光光度计测定并与,PpIX,的标准曲线作比较；用,Bio-Rad,蛋白质测定法测定细胞蛋白质含量。结果：所得细胞,PpIX,含量,(Fig.1A),在真皮乳头细胞、表皮角化细胞、外根鞘细胞、纤维原细胞、皮脂细胞中依次递增，平均数,标准偏差分别为,21922.6,42288.6,45731.2,57015.8,67929.7(ng/,g,蛋白质,),。在受试细胞中,皮脂细胞中的,PpIX,含量最高，是真皮乳头细胞的三倍多。但表皮角化细胞和外根鞘毛囊角化细胞之间没有明显差别。,Fig.1,人体毛囊皮脂腺细胞中,ALA,引起的细胞,PpIX,含量（,A,）和皮脂细胞中,PpIX,在细胞内的位置（,B-D,）,（,A,）全部细胞用,100,g/mlALA,处理,48,小时，细胞,PpIX,含量以,PpIX/,g,细胞蛋白质的,ng,来表示。,Sebocyte,皮脂细胞,;ORS,外根鞘细胞；,DP,真皮乳头细胞；,EK,表皮角化细胞；,FB,纤维原细胞。（,B-D,）,(B),对照皮脂细胞；,(C),用,50,g/mlALA,处理,48,小时的皮脂细胞；,(D),次级培养的皮脂细胞。,低温切片中,PpIX,的荧光图象显示了,PpIX,在离体毛囊皮脂腺单位中的位置，在用,ALA,培养,6,小时的毛囊皮脂单位中，只有皮脂腺周围区域,PpIX,的表达最明显，而对照样品未见,PpIX,（,Fig.2A,和,B,）。在用,ALA,处理,24,小时的单元中（,Fig.2E,），全部毛囊皮脂腺单位，包括皮脂腺，毛囊和表皮，都有明显的,PpIX,表达。在毛球基质和外根鞘细胞中都测得强的表达，毛囊皮脂腺单位的真皮乳头细胞中观察到的,PpIX,表达较弱。皮肤纤维原细胞没有表达。综上结果，,PpIX,表达的位置和密度与每一份毛囊皮脂腺单位中细胞密度及增殖活性有很大关系。见,H&E,染色和,Ki-67,测定（,Fig.2F,和,G,）。,Fig.2 PpIX,在离体人毛囊皮脂单位中的位置。,（,A,）对照样本；（,B,）用,1mg/mlALA,培养,6,小时；（,C,）,6,小时,ALA,培养后再在没有,ALA,的培养基中培养,24,小时；（,D,）,6,小时,ALA,培养后再在没有,ALA,的培养基中培养,48,小时；（,E,）用,1mg/mlALA,培养,24h,（,F,）,H&E,染色；（,G,）,Ki-67,增殖测定。（,a,，,a-1,）表皮角化细胞；（,b,，,b-1,）皮脂腺；（,c,，,c-1,）毛外根鞘角化细胞；（,d,，,d-1,）在毛球中的真皮乳头,T,和基质细胞；（,e,）真皮纤维原细胞。在（,G,）上的绿点标记（白色箭头）表示增生扩散细胞。,本研究证明，人的离体毛囊皮脂腺细胞用,ALA,处理后，产生明显的原卟啉,IX,，皮脂腺周围区域,PpIX,的表达最明显，亲脂性的,PpIX,容易在皮脂腺中油脂充足的环境中聚积。该实验证实局部用,ALA,会导致,PpIX,在皮脂腺中优先聚积，当光照时就会产生光动力效应损伤皮脂细胞减少皮脂分泌。,(2).,对毛囊皮脂腺过度角质化的作用：,毛囊皮脂腺过度角质化、皮脂分泌旺盛及痤疮杆菌的侵害是寻常痤疮的主要发病机理。我们给家兔耳外涂抹煤焦油，使其毛孔扩张、毛囊口部位角化过度、皮损略突于皮面，似痤疮样。病理检查可见角质层增厚，呈明显角化过度及角化不全，皮脂腺毛囊口部位有由皮脂、角化细胞及角化不全细胞组成的栓塞物。以此为动物痤疮模型，进行,ALA-PDT,治疗试验。,由于局部用,ALA,后，皮肤角化细胞及皮脂腺吸收了外源性,ALA,，在体内产生原卟啉,IX,，经波长为,632nm,、剂量为,150J/c,的光照，皮肤角化细胞及皮脂细胞被灭活。病理切片可见，表皮增厚明显减轻，毛囊口堵塞程度减轻，其内角化物质减少，部分已接近正常组织。按组织学判定级别标准，属,0-1,级；,ALA-PDT,法优于阳性对照药克林霉素甲硝唑搽剂的疗效。与对照组相比，有统计学意义（,P0.01,）,（,3,）,ALA,PDT,对毛囊内微生物的灭活作用,在,405nm,激发时卟啉的特征发射峰为,612nm,。用高效液相分析痤疮杆菌的卟啉含量，显示痤疮杆菌产生的卟啉主要是粪卟啉（见,Fig3,中的上图）。细菌内产生的卟啉保留时间是,12,分钟与标准盒中粪卟啉的保留时间一致。加入,100,g/ml ALA,，使粪卟啉在,24,小时培养菌中明显增加（,Fig3,中的下图）。两个案例中的卟啉都是从相同数目的细菌中提取的。,Fig3.,从,P.,痤疮菌中萃取的卟啉的,HPLC,（上图），和用含,100g/mlALA,培养的培养物中萃取的卟啉的,HPLC,（下图）。,生长时间对卟啉量增加的作用如,Fig4,所示。加入,ALA,（,100g/ml,）促进了卟啉的增加。有,ALA,存在时产生的粪卟啉的量明显提高。试验开始时从,“,起始平皿,”,中转移来的肉汤培养基的细胞悬液中测得卟啉量几乎是零。,Fig4.,不同生长阶段的,P.,痤疮菌的培养物的粪卟啉荧光强度。,在液体培养基中有（）或没有（）,ALA,（,100g/ml,）时生长,24,，,48,，,72,，,96,小时。提取每一培养时间的样品进行,HPLC,分析。记录相同数量细胞提取物中粪卟啉的荧光强度。,痤疮杆菌在厌氧性液体培养基中培养,24,小时,(,A),为没有照射的对照培养菌存活率。,(B),为用,75J/cm,的蓝光照射一次，细菌的成活数减少一个或两个数量级。（,C,）为连续照射,2,次，每次间隔时间,24,小时（在生长,24,和,48,小时时照射）培养物成活量减少四个数量级。（,D,）为,24,，,48,，,72,小时照三次减少五个数量级。,(E