培养基配制与灭菌课件

在此输入标题,第一级,第二级,第二级,第三级,第四级,第五级,*,培养基配制与灭菌,氧化还原和电极电势,自定义内容,在此输入标题,第一级,第二级,第二级,第三级,第四级,第五级,无机化学实验,2010.10 2010.12,*,实验中心网站：,http:/ 十二月 2024,培养基配制与灭菌,2021.10 2021.12,2,微生物实验课是微生物学课程学习中的一个重要环节，它不仅与课堂讲授的根本理论、根底知识相结合，而且也是学习后续课程和进行科研工作的根底，同时又是培养学生独立思考和理论联系实际能力的重要手段。,3,发酵工程,基因工程,细胞工程,酶工程,微生物学,实验技术,4,常用培养基的制备和灭菌,土壤中微生物的别离纯化,细菌的形态观察,细菌细胞的生理生化反响,霉菌、放线菌的形态观察,酵母菌的形态观察及微生物直接计数法,葡萄酒的酿制,实验一 常用培养基的制备与灭菌,6,实验目的,1.了解培养基的配制原理,掌握配制培养基的一般方法和步骤,2.了解常用灭菌方法的原理及使用范围，重点掌握高压蒸汽灭菌法的操作步骤和本卷须知,3.熟悉别离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。,7,实验原理,一、培养基medium),1.,定义：由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。,2.,六大要素：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子、微量元素,8,3.,分类,按培养基的物理状态,固体培养基：固体状，通常在液体培养基中参加1.5-2%琼脂配制而成，用于别离、鉴定、计数、保藏等,液体培养基：液体状，未加任何凝固剂，工业大规模发酵生产及实验室生理、遗传等根底理论研究,半固体培养基：柔软的浆糨状，通常在液体培养基中参加0.2-0.7%琼脂配制而成，用于观察微生物的运动、分类鉴定及噬菌体效价测定等,9,按照培养基的物质来源分,天然培养基：天然成分 成分不明确 如马铃薯、牛肉、豆芽、血清等,合成培养基：高纯化学试剂 成清楚确 如葡萄糖、淀粉等,半合成培养基：既有天然成分，又有化学试剂 如马铃薯蔗糖培养基,按照培养基的用途分,根底培养基：含根本营养物质如牛肉膏蛋白胨,加富培养基：特殊营养物质如血液琼脂培养基,鉴别培养基：特定化合物或试剂,选择培养基：化学物质，抑制非目的菌的生长,10,主要用于细菌的培养。应用最广泛、最普通，又称为普通培养基.根底培养基含有牛肉膏、蛋白胨和氯化钠。,其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而氯化钠提供无机盐。琼脂为凝固剂，在常用浓度下96时熔化，琼脂在40时凝固，通常不被微生物分解利用。,用稀酸或稀碱将其pH调至中型或微碱性，利于细菌生长繁殖。,4.,牛肉膏蛋白胨培养基,牛肉膏,3g,，蛋白胨,10g,，,NaCl5g,，琼脂,15-20g,，水,1000mL,，,pH7.0-7.2(,后调,),11,是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。特点：含有多种化学成分的无机盐，这些无机盐可以相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏一号培养基中的七水合硫酸亚铁的量只有0.001%，因此在配制培养基时需预先配成高浓度的七水合硫酸亚铁贮备液，然后再按需参加,5.,高氏一号培养基,可溶性淀粉,20g,，,KNO3 1g,，,NaCl 0.5g,，,K2HPO4,3H2O 0.5g,，,MgSO4,7H2O 0.5g,，,FeSO4,7H2O 0.01g,，琼脂,15-20g,，水,1000mL,，,12,是一种用来别离真菌的选择性培养基。其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，磷酸二氢钾、七水合硫酸镁作为无机盐，为微生物提供钾、磷、镁离子。孟加拉红和链霉素能有效的抑制细菌和放线菌的生长，而对真菌无抑制作用，因而对真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而到达别离真菌的目的。,6.,马丁氏培养基,蛋白胨,0.5g,，葡萄糖,10.0g,，,KH2PO4 1.0g,，,MgSO4,7H2O 0.5g,，琼脂,15-20g,，水,1000mL,，,pH,自然,13,消毒：一般指消灭病原菌和有害微生物的营养体。,灭菌：一般指杀灭一切微生物的芽孢孢子及休眠体。,灭菌的方法：,一干热灭菌法 二高压蒸汽灭菌法三紫外线灭菌法 四过滤除菌,二、灭菌方法,14,方法：热空气灭菌和灼烧。,机理：利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而到达灭菌目的。,一干热灭菌,电烘箱灭菌时，物品摆放不能太挤，以免阻碍空气流通，物品不能接触到电烘箱的内壁铁板，防着火，温度不能超过180,注意,15,二高压蒸汽灭菌法,将物品放入一个密闭的高压灭菌锅中，通过加热使锅内水沸腾产生蒸汽，蒸汽不断增加，使锅内压力升高，沸点升高，得到高于100的高温，导致菌体蛋白质变性到达灭菌目的。,16,波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。,紫外线杀菌机制主要是它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制,如无菌室、接种箱、物体外表灭菌,穿透力差,三紫外线灭菌,17,主要是选用孔径小一般0.2微米或0.4微米的微孔材料如磁土、石棉、超滤膜等制作成专门的细菌滤器，通过抽气泵进行减压过滤。,许多材料如血清、抗生素及糖溶液都是采用此中方法过滤。,空气滤菌：发酵罐，无菌间，超净工作台等,四过滤除菌,18,试剂和器材,1,、试剂,牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、,1mol/L,氢氧化钠、,1mol/L,盐酸、可溶性淀粉、硝酸钾、磷酸氢二钾、七水合硫酸镁、七水合硫酸亚铁、葡萄糖、磷酸二氢钾、孟加拉红、链霉素。,2,、器材,试管、三角瓶、烧杯、量筒、天平、加热炉、药匙、,pH,试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、高压蒸汽灭菌器。,19,实验方法,培养基配制方法和步骤,计算用量,称量,溶解,调,pH,分装,包扎,灭菌,摆斜面,无菌检查,加琼脂熔化,20,1.,计算,每个实验台配制,牛肉膏蛋白胨,、,高氏一号,、,马丁氏,培养基各,400ml,，根据配方计算各药品用量,21,2,.,称量溶解,按实际用量准确称取各药品放入1000ml烧杯中，参加所需水量的一半，玻棒搅匀，加热溶解。,牛肉膏,淀粉,FeSO47H2O,链霉素,22,3,.,加琼脂熔化,将琼脂条剪成小段，待液体培养基煮沸后，参加其中，继续加热至琼脂完全熔化。,1加热过程中要不断搅拌，防止琼脂沉 淀在瓶底烧焦,2控制火力，以免培养基因暴沸而溢出,3补水,注意,23,4,.,分装,一般装量：试管,1/5,，三角瓶,1/3-1/2,每组分装牛肉膏蛋白胨、高氏、马丁氏各,2,个试管,每实验台分装牛肉膏蛋白胨、高氏、马丁氏各,1,个锥形瓶,注意,分装过程，应注意不使培养基玷污管口或瓶口，以免污染棉塞，造成杂菌生长。,24,5,、调,pH,值,牛肉高蛋白胨：,pH7.0,7.2,高氏一号：,马丁氏：,pH,自然,1mol/lNaOH,1mol/lHCl,调节,25,6,.,塞棉塞和包扎,1棉塞的制作：现场演示,用途：防止杂菌侵入 保证良好的通气性能。,2旧报纸包扎：演示,用途：防止灭菌时水蒸气打湿棉塞 减缓培养基水分的蒸发。,3帖标签：注明培养基名称，组别，日期。贴于离管口1/3管身处或用记号笔也可。注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。,需包扎的物品,9,个干净培养皿、一根,0.2ml,移液管、培养基,26,7.,高压蒸汽灭菌,灭菌操作的流程,灭菌条件为：,121,30min,加水,装待灭,菌物品,加盖,加热,灭菌时间到后,断电源,压力降为零,开箱取物,演示灭菌锅的具体使用及本卷须知,27,8.,摆斜面,将灭好菌的试管取出，斜靠在玻璃棒或书本等适宜的支撑物上，形成斜面，斜面长度不超过试管总长的1/2，凝固后取出。,28,培养基灭菌后于室温下培养,1,2d,，确定无菌生长，方可使用。,9.,无菌检查,29,本卷须知,1.药品称量要符合称量规那么,2.调pH值，应小心操作，防止过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度,3加热过程中要不断搅拌，控制火力，防止培养基因暴沸而溢出或琼脂沉淀在瓶底烧焦。,4.培养基配制完成后应立即灭菌或暂时冷藏，防止微生物生长而改变培养基的营养比例和酸碱度所带来的不利影响,5.分装过程，应注意不使培养基玷污管口或瓶口，以免污染棉塞，造成杂菌生长。,6.灭菌标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。,7.使用高压灭菌器时，要注意用前的加水。,