肺癌ALK靶点检测研究进展培训ppt课件

Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,30,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,19,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,29,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,肺癌ALK靶点检测研究进展,肺癌ALK靶点检测研究进展,1,1994,年,ALK,基因异常首次在淋巴瘤中被发现,ALK,基因异常首次在间变性大细胞淋巴瘤中被发现,(ALCL),并因此而得名“,ALK,”,（,anaplastic lymphoma kinase,）间变性大细胞淋巴瘤激酶,ALK,融合到核磷蛋白（,NPM,）的,N-,末端部分,(,NPM-ALK,),导致,ALK,基因组成性激活。,Science 1994;263:12814,Blood 1997;89:167885,1994年ALK基因异常首次在淋巴瘤中被发现ALK基因异常首,2,2007,年首次在非小细胞肺癌中发现,EML4-ALK,融合基因,EML4,EML4ALK,variant 1,HELP,1,496,981,WD,Basic,1,496,1059,1,1058,1620,TM,Kinase,ALK,EML4-ALK,NMP-ALK,Nature 2007;448:5617,2007,年首次在非小细胞肺癌中发现,EML4-ALK,融合类型，并证实为肺癌的驱动基因。并且越来越多的研究表明,ALK,融合在,NSCLC,当中以较为稳定的频率出现，大约,5%,。,2007年首次在非小细胞肺癌中发现EML4-ALK融合基因E,3,Permanent proliferation & inhibition of apotosis,EML4-ALK fusion proteinsilenced bycrizotinib,Proliferation & survivalupon ligand bindingto ALK,ALK,融合突变在蛋白水平的变化,配体,ALK,受体,细胞外,细胞内,正常,ALK,信号,细胞外,永久扩增和凋亡抑制,细胞外,克唑替尼抑制,EML4-ALK,融合蛋白,病理性,ALK,信号,克唑替尼,作用模式,配体与,ALK,结合后，扩增和存活,由于与,EML4,融合，,ALK,激酶区,异常激活,多效蛋白,?,肝素结合细胞因子,?,Permanent proliferation & inhi,随着,ALK,靶向抑制剂的发现，,ALK,基因越来越多的受到重视,2007, Soda & Mano,首次发现,EML4-ALK,基因,2009, Alice T. Shaw,首次出现,EML4-ALK,阳性,非小细胞肺癌,的称谓，并将其,定义为,NSCLC,的独特亚型,2010, Kwak EL:,证实,克唑替尼治疗有效,，,但仍沿用,EML4-ALK,阳性,非小细胞肺癌的称谓,Soda M, et al. Nature 2007; 448(7153):561-566.,Shaw AT, et al. J Clin Oncol 2009; 27:4247-4253.,Kwak EL, et al. N Engl J Med 2010; 363:1693-1703.,随着ALK靶向抑制剂的发现，ALK基因越来越多的受到重视20,5,NSCLC,临床病理分型的演变,Adenocarcinoma,Squamous-cell carcinoma,Large cell carcinoma,组织分型,Current Standard of NSCLC Care,Non-squamous,NSCLC,分型现状,Squamous,EGFR,WT,EGFR,Mu,Squamous,EGFR,Mu,KRAS,Mu,ALK,+,Other non-squamous WT,Squamous,2012,NCCN,2014,NCCN,EGFR,Mu,ALK,+,KRAS,Mu,Other non-squamous WT,Squamous,ROS1,+,2010,NCCN,NCCN Guidelines, NSCLC, Version 4.,2014,Horn L,et al.,Clin Oncol. 2009,驱动基因分型,早期,NSCLC临床病理分型的演变AdenocarcinomaSq,6,NSCLC,分子分型与治疗决策密切相关,HER2,EGFR mutants,ALK,ROS/RET,b-raf,K-ras,Chemotherapy and PCI,Adeno,LCC/NOS,SCC,SCLC,K-ras,NSCLC分子分型与治疗决策密切相关HER2EGFR mut,7,ALK,阳性非小细胞肺癌有哪些特点？,ALK阳性非小细胞肺癌有哪些特点？,8,ALK,阳性,NSCLC,具有鲜明的临床及病理特征,特征,EGFR,突变,EML4/ALK,组织学,腺癌,TTF1+,腺癌,TTF1+,亚型,非粘液型,粘液型,吸烟状态,不吸烟,不吸烟,人种,东亚,所有人种,发病年龄,66,岁,52,岁,性别,女性,无差异,Shaw AT, et al. J Clin Oncol 2009; 27:4247-4253,.,85.4%,的,ALK,阳性,NSCLC,年龄,65,岁,(PROFILE1007),ALK阳性NSCLC具有鲜明的临床及病理特征特征EGFR突变,9,与,EGFR,突变人群相比，,ALK,融合人群,年龄更轻,ALK,阳性患者的中位年龄比,EGFR,阳性患者中位年龄小,15,岁,与EGFR突变人群相比，ALK融合人群年龄更轻ALK阳性患者,10,低年龄组,ALK,阳性率高于,EGFR,在,低于,51,岁,的人群中，,ALK,阳性率高于,EGFR,阳性率，可达,18.5%,，所以对于年轻患者来说，在标本限制的情况下建议先检测,ALK,靶点。,Scientific Reports; Li Zhang,2014,低年龄组ALK阳性率高于EGFR在低于51岁的人群中，ALK,11,中国,ALK,突变的发生率有多高？,Author,ALK incidence,Publications,Zhang X, Wu YL et al.,11.6%,(12/103),Mol Cancer 2009,Wong, et al. (Hongkong),4.9%,(13/265),Cancer 2009,Li H, Chen HQ, et al.,3.0%,(7/230,smokers, AC,),Lung Cancer 2012,Sun Y, Chen H, Ji H, et al.,5.8%,(3/52,surgical AC, non-smokers,),JCO 2010,Wu SG, Yang PC, et al. (Taiwan),34%,(39/116,AC, WT EGFR,),JTO 2012,Rikova K, et al,4.7%,(6/137),Cell 2007,Wang Z, Wang J, et al.,9.7%,(11/113,Stage IV,),Oncology 2012,Ren S, Zhou C, et al.,9.6%,(10/104,Female, AC, non-smoker,),Cell Biochem Biophys. 2012; Cancer 2012,早期患者（手术标本）,ALK,阳性率,4.5%,，,晚期,患者,ALK,阳性率,8%-10%,，胸水标本的,ALK,阳性率可达,11%,。,中国ALK突变的发生率有多高？AuthorALK incid,12,不同人种中克唑替尼的疗效的差异,ID,患者数,ORR(%),PFS,（月）,所有,亚裔,(%),所有,非亚裔,亚裔,中国,所有,非亚裔,亚裔,中国,PROFILE1001,149,41(28),60.8,54.8,76.9,-,9.7,-,-,-,PROFILE1005,259,93(36),59.8,54,70,73.9,8.1,-,-,-,PROFILE1007,347,157(45),65,-,74.7,75,7.7,7.1,8.1,-,PROFILE1014,343,157(46),74,72,70,-,10.9,-,13.6,-,Fei-Yu Niu, Yi-Long Wu. Onco Targets and Therapy 2 May 2015,亚裔或者中国患者，,ORR,维持在,70%,以上；克唑替尼一线治疗亚裔患者，中位,PFS,达到,13.6,个月,不同人种中克唑替尼的疗效的差异ID患者数ORR(%)PFS（,13,什么样的人群需要进行,ALK,检测？,什么样的人群需要进行ALK检测？,14,更新内容,2011,版,2015,版,对临床实践影响,诊断,病理报告内容,未提及分子病理诊断结果,诊断内容包括,肿瘤部位、组织学亚型、累及范围（支气管、胸膜、脉管、神经、伴随病变类型、肺内播散灶、淋巴结转移情况等）、切缘及必要的特殊染色、,免疫组化结果或分子检测结果,。包含的信息应满足临床分期的需要，并给出,pTNM,分期。,规范诊断：,标准,NSCLC,诊断需尽可能注明,EGFR & ALK,基因状态（如：右肺上叶腺癌,T3N2M1,（骨）,-IV,期,ALK,融合基因阳性）,NSCLC,驱动基因检测,未推荐,EGFR & ALK,检测,对于晚期,NSCLC,、腺癌或者含腺癌成分的其他类型肺癌，,应在诊断的同时常规进行表皮生长因子（,EGFR,）和间变性淋巴瘤激酶（,ALK,）等基因突变检测,，检测前应有送检标本的质控（包括亚型确认及样本量确认）。检测标本类型包括活检组织、细胞学标本和细胞蜡快，检测方法推荐使用获得国家食品药品监督管理总局批准的检测方法或试剂。,常规检测：,晚期,NSCLC,诊断同时，需常规检测,EGFR & ALK,基因状态（特殊情况除外）,非小细胞肺癌靶向个体化诊疗策略更新要点,P71,P69,更新内容2011版2015版对临床实践影响诊断病理报告内容,15,腺癌,/,大细胞癌,/NOS,应该进行,EGFR,及,ALK,检测,少吸烟,/,小活检肺鳞癌，不能排除混合性成分，需要进行,EGFR/ALK,检测,为了识别出已经有有效药物治疗的罕见驱动基因靶点，,NCC,指南,强烈推荐,对肿瘤病人进行,更广谱,的,肿瘤驱动基因,检测，或为病人推荐可获得的临床研究。广谱的驱动基因筛查是改善,NSCLC,预后的关键,Version 4.2016,强调分子检测的重要性,腺癌/大细胞癌/NOS应该进行EGFR及ALK检测少吸烟/小,16,如何检测,ALK,融合突变？,如何检测ALK融合突变？,CFDA,获批的三种诊断方法,ALK break-apart,FISH,assay,(Abbott Molecular, Vysis probes),ALK,immunohistochemistry,(Roche Ventana),Split,Isolated red,Amoy Dx EML4-ALK,融合基因检测试剂盒,RT-PCR,（厦门艾德）,CFDA获批的三种诊断方法ALK break-apart F,荧光原位杂交（,FISH,）,5,ALK,EML4,3,阳性,（分,离,倒位,）,2p23-21,5,ALK,EML4,3,倒位,（70）,基因融合,阴性,两个信号之间的距离,小于2个信号直径, 12 Mb,本图由,Lukas Bubendorf,提供,荧光原位杂交（FISH）5ALKEML43阳性（分离 ,实时逆转录法（RT-PCR）原理,20,逆转录酶（,AMV,）催化合成,cDNA,第一条链,加入,PCR,成分,用,Takara Ex Taq,TM,HS,合成,cDNA,第二条链,扩增,cDNA,RT- PCR,试剂盒的原理,EML4,ALK,上游引物,下游引物,融合点,检测探针,实时逆转录法（RT-PCR）原理20逆转录酶（AMV）催化合,20,VENTANA IHC,试剂设计,ALK,融合蛋白,:,无,ALK,重排的,NSCLC,不表达,ALK,融合蛋白,部分,ALK,融合蛋白表达较低,Ventana IHC,的原理,:,使用具有高度敏感性和特异性的一抗,D5F3,全自动仪操作，充分保证特异性,独有,Optiview,扩增技术，充分保证敏感性,D5F3 rabbitt monoclonal antibody,Optiview DAB IHC Detection,Optiview Amplification Kit,VENTANA IHC 试剂设计ALK融合蛋白:D5F3 r,21,0,1+,2+,3+,Neg,Pos,Pos,Pos,CST-IHC,Ventana-IHC,Pos,Ventana-IHC,原理：在常规,IHC,之后加入扩增信号，并且通过充分洗涤一抗避免假阳性,-,创建一个“二元”的判读系统,J.Ying,et al. Annals of Oncology 2013;,01+2+3+NegPosPosPosCST-IHCVent,22,Ventana,IHC,与,FISH,检测结果比较,FISH,总数,敏感性,特异性,一致率,阳性,阴性,Ventana IHC(1),阳性,46,7,53,100%,98.20%,98.40%,阴性,0,377,377,Ventana IHC(2),阳性,31,0,31,94%,100%,99.10%,阴性,2,198,200,Ventana IHC(2),阳性,32,0,32,100%,100%,100%,阴性,0,217,217,Ventana IHC(3),阳性,40,2,42,91%,96%,94%,阴性,4,53,57,Ventana IHC(4),阳性,18,0,18,90%,100%,99.60%,阴性,2,503,505,Ventana IHC(5),阳性,63,2,65,100%,98.4%,98.9%,阴性,0,131,131,(1)Jinghui Wang,et al. PLoS ONE 2014 9(7): e101551,(2) Eugen C. Minca,et al.,J Mol Diagn 2013, 15: 341-346,(3),Murry W. Wynes,et al. J Thorac Oncol. 2014;9: 631638,(4) Greta,et al. Arch Pathol Lab Med. doi: 10.5858/arpa.2013-0388-OA,（,5,）,J.Ying;et al. Annals of oncology.2013,24:2589-2593,Ventana IHC与FISH检测结果比较FISH总数敏感,23,全自动,VENTANA IHC,优势一,判读标准简单，仅存在阴性,or,阳性的判读,IHC,阳性,= FISH,阳性,全自动VENTANA IHC优势一判读标准简单，仅存在阴性,全自动,VENTANA IHC,优势二,全自动检测，避免操作流程中的误差，可重复性好,全自动VENTANA IHC优势二全自动检测，避免操作流程中,全自动,VENTANA IHC,优势三,价格便宜，可同时用于,ALK,的筛选和诊断,EMEA,（欧盟）、,CFDA,批准,Ventana IHC,用于诊断,ALK,阳性,NSCLC,，从而帮助确定可使用克唑替尼的患者,全自动VENTANA IHC优势三价格便宜，可同时用于ALK,VENTANA IHC,试剂盒已于,2013.8,全部获得,CFDA,批准，用于检测,ALK,阳性,NSCLC,VENTANA IHC试剂盒已于2013.8全部获得CFDA,27,ALK,ALK Ventana,检测推荐的检测时间,1,：,节约标本,-,针对非小细胞肺癌在第二次切片的时候多切,2,张切片,2,：,节约费用,用,IHC,的方法让更多患者得到筛查,3,：,节约时间,随病理大报告同时得到,ALK,结果,ALKALK Ventana检测推荐的检测时间1：节约标本-,28,肺癌ALK靶点检测研究进展培训ppt课件,细胞学标本检测,ALK,针对锁骨上淋巴结,FNA,，和,胸水,，都可以常规进行,Ventana IHC,检测,细胞学标本检测ALK针对锁骨上淋巴结FNA，和胸水，都可以常,